Характеристика половых клеток петухов как мишеней для генно-инженерных манипуляций

• Автор: Белоглазова, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 03.02.07, 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: п. Дубровицы Московской обл.
• Количество страниц: 100 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Сперматогенез у многоклеточных животных размножающихся

половым путем .

1.2 Морфологический состав клеток сперматогенного эпителия

семенников самцов

1.3 Пролиферация и дифференцировка половых клеток самцов

1.4 Развитие семенников и оллодогворяемость

1.5 Использование половых клеток самцов в качестве векторов для

переноса рекомбинагиной ДНК

1.5.1 Использования спермиев для переноса рекомбинантной ДНК в
клеткимишени
1.5.2 Использование сперматогоний в качестве мишеней для введения
рекомбинантной ДИК.
1.6 Методы получения трансгенной птицы.
1.6.1 Использование вирусных векторов для переноса экзогенной
ДНК в клетки и орг аны птицы.
2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1 Материалы
2.1.1 Реактивы и оборудование
2.1.2 Животные.
2.2 Гистологические исследования.
2.2.1 Получение гистологических препаратов.
2.2.2 Определение числа клеток сперматогенного эпителия и
относительного количества ДНК ядер клеток семенников
2.3 Работа с культурой клеток
2.3.1 Культивирование клеток.
2.3.2 Получение первичной культуры клеток семенника петуха
Эксперименты по переносу рекомбинантной ДНК в клетки
сперматогенного эпителия петухов
Генные конструкции
Трансформация культуры клеток семенника петуха i vi.
Введение ретровирусных векторов в семенники петухов i viv
Анализ на наличие генной конструкции
Анализ экспрессии рекомбинантных белков.
Иммуногистохимия
Оценка экспрессии экзогенной ргалактозидазы
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Особенности сперматогенеза петухов в различные возрастные
периоды.
Пролиферативная активность клеток сперматогенного эпителия
петухов.
Эффективность трансфекции клеток семенников петуха
ретровирусными векторами в культуре i vi
Введение ретровирусных генных конструкций в клетки
семенников петуха i viv.
ОБСУЖДЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Исследованы механизмы доставки рекомбинантной ДИК в клетки сперматогенного эпителия посредством использования ретровирусных векторов. Изучены факторы, влияющие на эффективность генетической модификации клеток сперматогенного ряда семенников i viv. Практическая значимость. Определен возраст петухов, при котором в семенниках наблюдается максимальное количество сперматогоний перспективных клетокмишеней для генноинженерных манипуляций. Оптимизированы условия введения ретровирусных векторов в данный органмишень. Показана способность трансформированных сперматогоний к дальнейшей дифференцировке наличие рекомбинантной ДНК установлено в спермиях по достижении половой зрелости. Соотношение клеток разных типов в семенных канальцах семенников петухов изменяется в зависимости от возраста. В сперматогеином эпителии семенных канальцев петухов постоянно присутствуют стволовые клетки сперматогонии, число которых изменяется в процессе онтогенеза. Клетки сперматогенного эпителия петухов могут быть трансформированы иууо с использованием ретровирусных векторов. Апробация работы. С.Петербург, г. Высокие технологии, исследования, промышленность, С. Петербург, , г. Центра биотехнологии и молекулярной диагностики животных ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии, , гг. Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе в центральных научных журналах, рекомендованных ВАК 3. Структура и объем работы. Диссертация изложена на 0 страницах, содержит 9 таблиц, рисунков. Список литературы содержит 0 источников, в том числе 2 на иностранных языках. Сперматогенез и созревание спермы являются комплексными процессами, на которые оказывают влияние бесчисленное множество эндокринных, паракринных и нейронных факторов . . А. Реунов и др. Что касается птиц, то регулирование роста спермовыводящих канальцев, а также зрелость и функционирование малоизученны. Так как качество и количество спермы могут изменяться во времени в рамках полового созревания, сперматогенеза или внегонадного созревания спермы, понимание этих процессов может иметь глубокое значение для мужской репродуктивной производительности . i, . Сперматогенез это постепенное преобразование стволовых клеток в спермии, продолжающееся в определенный период времени в пределах семявыносящих канальцев семенников, затрагивающий пролиферацию, дифференциацию и созревание сперматогониальных клеток Гистология, . Этот процесс включает в себя четыре стадии I размножение 2 рост 3 созревание 4 формирование рис. В организме самца фаза размножения сперматогоний, как и сперматогенез в целом, начинается в процессе полового созревания в репродуктивном возрасте. Фаза роста в сперматогенезе выделяется в определенной степени условно, ее часто объединяют с третьей фазой сперматогенеза фазой созревания в одну, так называемую, мейотическую фазу. В этой фазе половая клетка первичный сперматоцит, или сперматоцит 1го порядка проходит длинную профазу первого мейотического деления. Рост характеризуется небольшим увеличением объема сперматоцитов. Рисунок 1. Фаза созревания это наиболее продолжительная фаза гаметогенеза. В овогенезе она начинается в эмбриогенезе практически одновременно с началом малого роста половых клеток. В фазе созревания как мужские, так и женские половые клетки проходят мейоз вид деления, в ходе которого содержание хромосом в их ядрах сокращается наполовину. Перед вступлением в мейоз диплоидные половые клетки сперматогонии типа В в синтетическом периоде клеточного цикла удваивают количество ДНК и, соответственно, количество субъединиц хромосом. Собственно мейоз включает два последовательных деления, протекающих без интерфазы и количественного изменения генетического материала. В сперматогенезе исходная половая клетка, вступающая в мейоз, называется сперматоцит 1го порядка или первичный сперматоцит. Важным этапом мейоза является профаза первого деления. Она включает в себя стадии лептотены, зиготены, пахитены, диплотены и диакинеза.