Соматический мозаицизм у человека и мыши по данным мультилокусного маркирования ДНК

• Автор: Бутовская, Полина Руслановна
• Шифр специальности: 03.02.07, 03.01.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 96 с. : ил.

Оглавление

Условные обозначения

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Соматический мозаицизм, причины его возникновения.

1.1.1. Хромосомная нестабильность

1.1.2. Изменения числа повторов в мини и микросателлитах

1.1.3. Вариации по числу копий крупных 0 т.п.н. хромосомных сегментов

1.1.4. Метилирование ДНК эпигенетическая модификация функционального состояния генома

2.1. Методы выявления соматического мозаицизма

1.2.1. Мультилокусный ДНК фингерпринтинг

2.2.2. полимеразная цепная реакция со случайными праймерами Глава 2. Материалы к методы
2.1. Биологический материал
2.2. Выделение ДНК из тканей и органов
2.3. Выделение ДК из клеточных линий
2.4. Выделение стромальных клеток из жировой ткани
2.5. Получение клеточных культур
2.5.1. Культивирование СКЖГ
2.5.2. Культивирование клеток фибробластов
2.6.
5.7. Электрофоретическое фракционирование 1 ЩРиродуктов
5.8. ДНКфингсрпринтинг
5.8.1. Обработка ДНК рестрикционными эндонуклеазами
5.8.2. Электрофоретическое фракционирование рестрикционных фрагментов ДНК и перенос ДНК из геля на мембранные фильтры
5.8.3. Обработка фильтров перед гибридизацией
5.8.4. Приготовление Р меченных зондов
5.8.5. Блот гибридизация
5.8.6. Получение радиоавто графов
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Выявление соматического мозаицизма у человека
3.1.1. Использование мулитилокусного ДНК фиш ерпринтиш а
3.1.2. Использование полимеразной цепной реакции со случайными праймсрамиКАРО
3.2. Выявление соматического мозаицизма у мыши с помощью полимеразной цепной реакции со случайными праймерамиКАРП
3.3. анализ клеточных культур на разных стадиях пассирования
Заключение
Выводы
Благодарности
Список литературы


Глава 1. Соматический мозаицизм, причины его возникновения. Вариации по числу копий крупных 0 т. полимеразная цепная реакция со случайными праймерами Глава 2. Глава 3. Отличительной особенностью эукариотического генома является большое количество различных типов диспергированных и тандемно организованных повторяющихся последовательностей ДНК. Многие из этих повторов являются источниками различных полиморфизмов и используются в качестве генетических маркеров в популяционных и эволюционных исследованиях Рысков, . Встает вопрос, не играют ли эти последовательности определенную роль в спецификации клеток, в клеточной дифференцировке. Очевидно, эксперименты в рамках этой концепции направлены на выявление геномных различий между специализированными клетками и их предшественниками. В биологических системах описано такое явление, как соматический мозаицизм, что означает присутствие в одном организме генетически различных популяций соматических клеток. Структурные изменения в ДНК злокачественно трансформированных клеток наиболее известный пример соматического мозаицизма Iv . Его причинами могут служить как генетические, так и эпигенетические события Vii . v . . В то же время, имеется очень мало данных о соматическом мозаицизмс в нормальных тканях. Цель и задачи исследования. Целью исследования является изучение феномена соматического мозаицизма в нормальных органах и тканях млекопитающих с помощью методов полимеразной цепной реакции со случайными праймерами и мультилокусного ДНКфингерпринтинга. Разработать варианты анализа для получения информативных амплификационных спектров ДНК органов и тканей человека и мыши. Исследовать ДНК, выделенную из нормальных органов и тканей эмбрионов человека, методами и ДНКфингерпринтинга с целью выявления соматического мозаицизма на уровене индивидуального организма. Исследовать ДНК нормальных органов и тканей взрослых мышей с целью выявления соматического мозаицизма у индивидов разных линий. Оценить наблюдаемые эффекты геномных изменений на модели длительно пассируемых клеточных культур с помощью анализа. Впервые обнаружена соматическая изменчивость ДНК в нормальных тканях эмбрионов человека и мыши методами НАРОРСЯ и ДНКфингерпринтинга. Показано, что возникновение соматического мозаицизма происходит с довольно высокой частотой и носит случайный характер. Впервые показана измечивость РА1Шспектров клеточных культур при длительном пассировании мезенхимные прогениторные клетки человека, стромальные клетки жировой ткани человека, клетки фибробластов человека. Эти результаты имеют фундаментальный характер и вносят важный вклад в изучение проблемы соматического мутагенеза. Заявка на патент Способ паспортизации и контроля за генетической изменчивостью в клеточных культурах различной длительности пассирования 0 от апреля года.