Противодифтерийные антитоксические и антибактериальные антитела в сыворотках крови людей

• Автор: Фирсова, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 154 с. : ил.

Введение.

Обзор литературы

Глава 1 Коринебактретии дифтерии и противодифтерийный иммунитет.

1.1. Вид i ii.

1.2.Дифтерийный токсин и механизм его действия.

1.3. Антитоксический иммунитет и вакцинация

1.4.Надзор за эпидемическим процессом дифтерии в России и странах Европы.

1.5. Антибактериальный противодифтерийный иммунитет

1.6. Морфологическая структура клеточных стенок С.ii

Глава 2. Антитоксические и антибактериальные противодифтерийные антитела

2.1. Иммуноглобулины.

2.2. Иммунная реактивность организма.
2.3. Методы определения содержания противодифтерийных антибактериальных и антитоксических антител
2.3.1. Определение i viv.
2.3.2. Нейтрализация в культуре клеток.
2.3.3. Реакция пассивной гемагглюгинации.
2.3.4. Иммуноферментный анализ.
2.4. Аффинная хроматография как метод выделения антитоксических и антибактериальных противодифтерийных антител
Глава 3. Материалы и методы исследования
3.1. Материалы исследования.
3.2. Методы исследования
3.2.1. Определение специфической активности
бактериального антигена.
3.2.2. Диализ
3.2.3. Аффинная хроматография.
3.2.4. Метод непрямого иммуноферментного анализа
3.2.5. Расчет количества антител в исследуемых образцах
сывороток
3.2.6. Корреляционный анализ
3.2.7. Популяционный анализ.
Собственные исследования.
Глава 4. Разработка иммуноферментной тестсистемы для
выявления противодифтерийных антитоксических
антител в абсолютных единицах
4.1. Получение стандарта противодифтерийных антитоксических
антител
4.1.1. Подготовка колонки к аффинной хроматографии
4.1.2. Получение гаммаглобулиновой фракции пула
сывороток крови здоровых людей
4.1.3. Нанесение гаммаглобулиновой фракции пула сывороток крови здоровых людей на хроматографическую
колонку и элюция антитоксических антител
4.1.4. Регенерация хроматографической колонки.
4.1.5. Определение с помощью ИФА концентрации противодифтерийных в полученных после аффинной хроматографии фракциях
4.2. Выбор рабочей концентрации антигена
дифтерийного анатоксина.
4.3. Определение оптимальной концентрации конъюгатов.
4.4. Определение оптимального разведения образцов и стандарта
4.5. Определение оптимальных значений
буферных растворов
4.6. Определение оптимального температурного режима
и времени инкубации
4.7. Контроль результатов и воспроизводимость метода.
4.8. Чувствительность
4.9. Сравнение показателей концентрации противодифтерийных антитоксических антител, выявляемых с помощью разработанной
и коммерческой иммунофсрментных тестсистем
4 Схема проведения ИФА для выявления противодифтерийных антитоксических
в сыворотках крови людей.
Глава 5. Определение концентрации противодифтерийных
антитоксических антител в сыворотках крови людей с помощью разработанной
иммуноферментной тестсистемы
5.1. Выявление противодифтерийных антитоксических
в сыворотках крови людей.
5.2. Напряженность противодифтерийного антитоксического иммунитета в популяциях людей.
Глава 6. Разработка иммуноферментной тестсистемы для выявления противодифтерийных антибактериальных М, в абсолютных единицах.
6.1. Получение и биохимический контроль
бактериального препарата.
6.2. Получение стандарта антибактериальных антител.
6.3. Выбор рабочей концентрации бактериального антигена
6.4. Определение оптимальной концентрации конъюгатов
6.5. Определение оптимального разведения образцов и стандарта.
6.6. Определение оптимальных значений буферных растворов.
6.7. Подбор оптимального температурного режима и
времени инкубации
6.8. Специфичность.
6.9. Контроль результатов и воспроизводимость метода.
6 Чувствительность.
6 Схема проведения ИФА для выявления противодифтерийных антибактериальных I, I, I в сыворотках крови людей.
Глава 7. Определение противодифтерийных антибактериальных антител в сыворотках крови людей с помощью разработанной иммуноферментной тестсистемы.
7.1. Выявление противодифтерийных антибактериальных
I, I, I в сыворотках крови людей.
7.2. Напряженность противодифтерийного
антибактериального иммунитета в популяциях людей.
Заключение
Список литературы.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АБ антибактериальный ые
АДСм адсорбированный дифтерийностолбнячный анатоксин с уменьшенным содержанием антигена АДФ аденозиндифосфат
АКДС адсорбированная коклюшнодифтерийностолбнячная вакцина АТ антитоксический ие
ВОЗ всемирная организация здравоохранения ДТ дифтерийный токсин ЗФР забуференный физиологический раствор ИГ иммуноглобулины ИС иммунная система ИФЛ иммуноферментный анализ МКАТмоноклональные антитела НАД никотинамидадениндинуклеотид РПГА реакция пассивной гемагглютинации С. ИрЫкепае Лнс СогупеЬас1егшт сНрЫБепае токсигенные С. сНрШЬепае х СогупеЬас1егшш рЬ1Ьег1ае нетоксигенные иммуноглобулин з1А секреторный иммуноглобулин А у фракция гаммаглобулиновая фракция
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Разработанная иммуноферментная тестсистема позволяет выявлять концентрацию АТ в абсолютных единицах, которые коррелируют с показателями содержания антитоксина в международных условных единицах МЕмл, выявленных с помощью коммерческой тестсистемы на основе ИФА. Созданная тестсистема на основе ИФА позволяет определять концентрацию образующихся естественным путем АБ антител изотипов б, М, А в сыворотках крови людей в абсолютных единицах. Использование биометрического анализа дает возможность изучить напряженность противодифтерийного антитоксического и антибактериального иммунитета в популяциях людей. Глава 1. Коринебактерии широко распространены в природе. Большинство видов коринебактерий, являющиеся облигатными паразитами слизистых оболочек, патогенные и условнопатогенные для животных и человека виды. В определителе бактерий Берджи род СогупеЬаМепит отнесен к группе Грамположительные неспорообразующие палочки неправильной формы. К роду СогупеЬаМегшт помимо дифтерийной палочки относятся и многочисленные микроорганизмы, известные под названием дифтероидов , , 7, 4. Вид С. ИрЫИепае тонкие слегка изогнутые палочки длиной мкм, шириной 0,,8 мкм с характерным расположением в мазках попарно, под углом друг к другу. Для коринебактерий характерен полиморфизм, проявляющийся в многообразии форм клеток. В культуре одного и того же штамма наряду с длинными, изогнутыми палочками обнаруживаются короткие, толстые, с вздутиями на одном или обоих концах, придающих им сходство с булавой или булавкой. Полиморфизм дифтерийных бактерий обусловлен несбалансированным синтезом муреина в их клеточных стенках при культивировании их на искусственных питательных средах с большим количеством сывороточных белков. При культивировании в среде с оптимальным содержанием сывороточных белков большинство клеток имеют однородную форму. Среди факторов, влияющих на морфологию, отмечаются также старение особей, содержание в питательной среде фосфатов, глицерина, антибиотиков, железа, дерепрессия профагов, в результате которой прекращается деление клеток и появляются гигантские особи. Бактерии дифтерии грамположительны, неподвижны, не образуют спор, некоторые штаммы имеют микрокаисулу. Коринебактерии дифтерии являются факультативными анаэробами и хемоорганотрофами , , , , , 8, 4. Вид С. Свое название штаммы получили благодаря выявленной зависимости степени тяжести вызываемого ими заболевания от культуральноморфологических свойств возбудителя. С. ii варианта vi выявлялись у больных с тяжелым течением болезни, сопровождающимися выраженным токсическим и геморрагическим синдромом. Вариант ii ассоциировался с более легким течением болезни, в то время как вариант ii занимал промежуточное положение. В дальнейшем многие исследователи отмечали, что не существует достаточно четкой корреляции между культуральным вариантом и его степенью вирулентности , , ,, , 9. Почти все исследователи сходились во мнении, что по морфологии колоний можно предварительно дифференцировать культуральные варианты С. Наиболее четко различия видны на среде Клауберга II с гемолизированной кровью и теллуритом калия. На этой среде штаммы варианта vi дают крупные до мм в диаметре матовочерные или аспидносерые колонии с приподнятым центром и зазубренными краями. Согласно другой классификации, типированис штаммов происходит по способности ферментировать или не ферментировать крахмал. Вариант ii фактически относят к варианту ii, как не способный к ферментации крахмала вариант. Однако при идентификации дифтерийных штаммов по культуральным вариантам наибольшие трудности связаны именно с вариантом ii, который встречается достаточно редко. Штаммы данного варианта, подобно варианту ii, не сбраживают крахмал. Некоторые из них на кровянотеллуритовых средах, подобно варианту ii, растут в виде гладких колоний, но дают зернистый рост на бульоне сбраживают крахмал, другие, подобно варианту vi, растут в виде шероховатых колоний и дают зернистый рост на бульоне. Внутри каждого культурального варианта циркулируют токсигенные и нетоксигенные штаммы , 1, 4.