Экспресс - методы оценки иммунного статуса крупного рогатого скота

• Автор: Богомолова, Олеся Анатольевна
• Шифр специальности: 03.01.06, 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 101 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Цель и задачи исследования

Научная новизна работы

Практическая значимость.

Положения, выносимые на защиту

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Состояние и перспективы развития молочного животноводства

в Российской Федерации

1.2. Факторы, вызывающие изменения иммунной системы

крупного рогатого скота
1.3. Иммунологический мониторинг иммунодефицитов
крупного рогатого скота
1.4. Методы количественного опредсленияиммуноглобулинов
крупного рогатого скота
1.5. Методы и средства коррекции иммунодефицитов
крупного рогатого скота
.б.Заключение по обзору литературы
2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Материалы и методы.
Исследуемый материал.
Компоненты для экспресс методов
Иммуноферментная тестсистема на основе сэндвич варианта ИФА
Тестсистема латексагглютинации РЛА.
Количественное определение иммуноглобулинов классов О, М и А.
Гематологические исследования
Физиологический и иммунный статус телят
Степень чистоты иммуноглобулинов и аффинноочищенных антител
Определение белка
Статистическая обработка результатов.
3.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1.Получение компонентов и разработка тестсистемы на основе
сэндвич варианта ИФА.
3.1.1 .Синтез антивидового конъюгата.
3.1.2.Отработка условий постановки сэндвич варианта
ИФА для количественного определения .
3.1.3.Результаты количественного определения в сыворотке крови и молозиве крупного рогатого скота методом сэндвич варианта ИФА
3.2.Разработка тестсистемы на основе латекс агглютинации
3.3. Количественное определение иммуноглобулинов методом РИД.
3.4.Сравнительная оценка экспрессметодов и РИД для количественного определения
3.5. Результаты изучения естественной резистентности организма высокопродуктивных коров.
3.6. Изучение клеточного и гуморального иммунитета коров.
3.7.Результаты изучения физиологического и иммунного статуса телят
от высокопродуктивных коров
4. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АФ абсолютный фагоцитоз крови
БСА бычий сывороточный альбумин
ВНИТИБП Всероссийский научноисследовательский и технологический институт биологической промышленности
I содержание популяции Тлимфоцитов
ЗФР забуференный физиологический раствор
ИАН индекс активации нейтрофилов
ИД иммунодефицит
ИФА иммуноферментный анализ
К коэффициент метаболической активности нейтрофилов
КРС крупный рогатый скот
ЛТИ лейкоТлимфоцитарный индекс м.м. молярная масса
I содержание популяции Влимфоцитов
.. оптические единицы
ОП оптическая плотность
ПААГ полиакриламидный гель
ПР перефиричсская кровь
ПХ пероксидаза хрена
ПЭГ полиэтиленгликоль
РДП реакция диффузной преципитации
РИД радиальная имму но диффузия
1 реакция латексагглютинации
РФ Российская Федерация
СЦК средний цитохимический коэффициент
СК секреторный компонент
ФБР фосфатный буферный раствор
ФБРТ фосфатно твиновый буферный раствор
ФБСР фосфатносолевой буферный раствор
ФИ фагоцитарный индекс
ФПфагоцитарный показатель
ФЧ фагоцитарное число иммуноглобулин
I иммуноглобулин
I иммуноглобулин А
I иммуноглобулин М
персональный компьютер
поверхностный резонанс
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Нарушение метаболических процессов в организме высокопродуктивных коров часто является причиной дефицита иммуноглобулинов в молозиве, снижения уровня их биосинтеза Б. Ьеу1еих, е1 а1. Для своевременного контроля состояния иммунитета у коров матерей, новорожденных телят и иммунологической полноценности молозива необходимо с помощью высокочувствительных тестсистем быстро оценить иммунологический статую и принять адекватные решения. В.М Чекишев, Н. Е. I, . Благодаря совершенствованию методов иммунологического анализа появилась, возможность диагностировать у животных генетически обусловленный и приобретенный иммунодефициты, что позволяет правильно выбрать стратегию иммунокорригирующей терапии и профилактики . . Хаитов и др. Классический метод радиальной иммунодиффузии РИД по Манчини используется в ветеринарной практике для количественного определения иммуноглобулинов основных классов, однако у него есть недостатки большой расход реагентов, длительность постановки реакции и невозможность определения низких концентраций иммуноглобулинов . . i . Исследования ряда, авторов показали, что. ИФА и латекс агглютинация РЛА для количественного определения иммуноглобулинов в сыворотке крови и других биологических жидкостях организма животных и человека Б. Б. Дзантиев с соавт. Е.С. .. i, . i . В.И. Клюкина, . . . .. Борзенко, . С учетом этого, разработка экспресс методов для оценки иммунного статуса животных является актуальной задачей для практической ветеринарии. Цель исследований разработка экспресс методов для оценки иммунного статуса крупного рогатого скота. Разработать тестсистему на основе сэндвич варианта ИФА для количественного определения, иммуноглобулинов класса в в сыворотке крови и молозиве крупного рогатого скота. Разработать тестсистему латекс агглютинации РЛА для количественного определения иммуноглобулина класса в в сыворотке и молозиве крупного рогатого скота. Провести, оценку иммунного статуса крупного рогатого скота и иммунологической полноценности молозива с помощью сэндвич варианта ИФА и РЛА. Изучить уровень естественной резистентности коров в зависимости от возраста и продуктивности. Изучить физиологический и иммунный статус телят от высокопродуктивных коров. Научная новизна исследований Разработана тестсистема на основе сэндвич варианта ИФА для количественного определения иммуноглобулина класса в в сыворотке крови и молозиве крупного рогатого скота. Впервые получен латекс препарат на основе аффинноочищенных анти10 антител для количественного определения иммуноглобулина класса О в сыворотке крови и молозиве крупного рогатого скота. Показана высокая чувствительность разработанных тестсистем для экспресс анализа уровня иммуноглобулинов в сравнении с методом РИД. С помощью разработанных тестсистем изучен иммунный статус крупного рогатого скота и дана характеристика иммунобиологической полноценности молозива коров разного возраста и продуктивности. Установлена взаимосвязь развития вторичного иммунодефицита у высокопродуктивных коров от количества лактаций. Определена взаимосвязь физиологического и иммунного статуса телят от высокоудойных коров матерей, что позволяет прогнозировать использование их для воспроизводства молочного стада. Результаты исследований вошли в Методические1 рекомендации по оптимизации формирования колострального иммунитета у новорожденных животных, рассмотренные и одобренные г. Набор для количественного определения ИФА Технологический регламент на производство Набор для количественного определения в сыворотке крови и молозиве крупного рогатого скота в реакции латекс агглютинации, утвержденные г директором ВНИТИБП. Положения, выносимые на защиту 1 . Тест система на основе латекс агглютинации для оценки иммунного статуса крупного рогатого скота и иммунологической полноценности молозива. Результаты изучения естественной резистентности организма коров разного возраста и продуктивности. Результаты изучения физиологического и иммунного статуса телят, полученных от высокопродуктивных коров.