Разработка и применение диагностического биопрепарата "YP-09 УГСХА" на основе бактериофагов Yersinia Pseudotuberculosis

• Автор: Катмакова, Надежда Петровна
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 151 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Характеристика бактерий вида ii i.

1.2 Распространение, источники заражения, факторы передачи

. i.

1.3 Патогенез и клинические проявления болезни

1.4 Лабораторная идентификация бактерий вида

. i.

1.5 Применение бактериофагов в диагностической практике

П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы
2.1.1 Материалы
2.1.2 Методы.
2.2 Результаты собственных исследований и их обсуждение
2.2.1 Выделение и идентификация бактерий вида
i
2.2.2 Выделение бактериофагов . i.
2.2.3 Характеристика биологических свойств выделенных бактериофагов.5
2.2.4 Разработка технологических параметров изготовления
и контроля индикаторных псевдотуберкулезных фагов.
2.2.5 Разработка параметров ускоренной идентификации бактерий
вида . i с помощью бактериофагов.
2.2.6 Разработка оптимальных условий постановки РНФ
2.2.7 Использование РНФ для индикации бактерий вида
i в объектах внешней среды
з
2.2.7.1 Исследование с помощью РНФ проб воды,
контаминированных бактериями вида рБеисоШЬегсиозз.
. Исследование с помощью РНФ комбикорма,
контаминированного бактериями вида К рзеиШЬегсиозБ.
. Исследование с помощью РНФ фекалий,
контаминированных бактериями вида рзеитЬегсиозз
.1 А Исследование с помощью РФ мяса,
контаминированного бактериями вида У. ряеисошЬегсиояз
2.2.8 Изучение эффективности сконструированного биопрепарата
псевдотуберкулезных фагов УР УГСХА.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ
ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
БКД буферноказеииоводрожжевая среда
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ДСЛ дальневосточная скарлатиноподобная лихорадка
ЗПС забуференная лептонная вода
ипс иерсиниознопсевдотуберкулезная среда
ИФА иммунофермеитный анализ
ЛИС липополисахарид
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
МКА моноклональные антитела
ПЦР полимеразная цепная реакция
ПК пептоннокалиевая среда
РА реакция агглютинации
РАЛ реакция агглютинации латекса
РКА реакция коагглютинации
РИГА реакция непрямой гемагглютинации
РНИФ реакция непрямой иммунофлюоресценции
РНФ реакция нарастания титра фага
РПГА реакция пассивной гемагглютинации
РСК реакция связывания комплемента
СБТС среда с бромтимоловым синим
ФБР фосфатнобуферный раствор
ОП остров патогенности
рУУ плазмида вирулентности иерсиний
Уорэ белки наружной мембраны иерсиний
м.к.мл количество микробных клеток в 1 мл
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Семейство 1. Триба IV. Род XI. ii V i . До г возбудитель псевдотуберкулеза относили к семейству , роду . В г на основании сходства микроорганизма с чумным микробом, а также отличий данных бактерий от других видов пастерелл, введен новый род ii, под которым объединили возбудителя чумы i, псевдотуберкулеза i и иерсиниоза ii. Кроме указанных патогенных видов, в род ii былы включены еще зри вида ii iii, iii. Патогенные свойства последних видов бактерий полностью не изучены, однако они могут вызывать оппортунистические инфекции. Еще один вид У i является возбудителем болезни красного рта у радужной форели. Впоследствии род ii дополнили еще четыре вида У. i, ii и vi. В настоящее время работа по изучению иерсиний различных видов серо и биотипов продолжается, уточняется их роль в патологии человека и животных 0. У i грамотрицательные, не образующие спор палочковидные бактерии, чаще овоидной формы. Размеры палочек зависят от возраста культуры, температуры и среды выращивания и составляют 0,8 1,2 мкм в длину, 0,5 0,8 мкм в ширину. В мазках из бульонных культур могут располагаться цепочками по 2 5 клеток. Подвижность микроорганизма обусловлена наличием 35 перитрихиальньтх жгутиков. С в течение часов, что связано с уменьшением числа и атрофией жгутиков. Микроорганизм хорошо окрашивается всеми анилиновыми красителями. Бактерии, взятые с агара, окрашиваются биполярно, в бульоне преобладают равномерно окрашенные особи. В молодых культурах, выращенных при С, преобладают кокковидные бактерии, в старых наблюдается полиморфизм бактерий, особенно при С или на различных селективных средах агаре Эндо и др. Вопрос о наличии капсулы является спорным по мнению Н. Ф. Тимченко , Т. П. Сомова 0 бактерии У. ГиЬегсови образуют капсулу, степень выраженности которой . Бактерии, выращенные при 4 С и С формируют капсулы, различные по размеру и полипептидному составу. И.В. Смирнов 7 считает, что микроорганизм не образует капсулу. При изучении морфологии клеток иерсиний выявлено наличие тонких капсулоподобных фибрилл, являющихся элементами покрова бактериальных клеток и выполняющих защитную функцию 7. Важнейшим непостоянным структурным элементом клетки является уникальная для иерсиний плазмида вирулентности рУУ кольцевидно замкнутая молекула ДНК, лежащая непосредственно в цитоплазме клетки или интегрированная в ее хромосому. Гены этой плазмиды во многом определяют патогенные свойства возбудителя 7. Возбудитель псевдотуберкулеза факультативный анаэроб, обладает психрофильными и олиготрофными свойствами 0, . Микроорганизм хорошо растет на простых питательных средах МИД, агаре Эндо, Хоттингера и др. Температурный фактор для У р8еис1оилЬегси1о8 является одним из важнейших, определяющих изменчивость микробов и устойчивость их во внешней среде. Оптимальной для роста считается температура С в диапазоне от 4 до С 9, 0. По типу питания микроб псевдотуберкулеза сходен с почвенными микроорганизмами и является прототрофом 3. В жидкой среде питательный бульон, пептонная вода, синтетические среды возбудитель псевдотуберкулеза дает равномерное помутнение, иногда нежную пленку на поверхности среды. При дальнейшем культивировании, особенно при С наблюдается просветление среды и образование слизистого или крошковидного осадка. На питательном агаре, в зависимости от условий культивирования и хранения, бактерии У. ЯошЬегсиЬзгя образуют колонии двух типов Я и Я или переходные БЯ. Как правило, при пониженной температуре культуры растут в гладкой 8форме, а при повышенной более С бактерии активно диссоциируют в шероховатую Яформу. Через сутки роста Бформы бактерий выделенные от больных и грызунов представляют собой круглые, диаметром до 1 мм, выпуклые, голубоватобелые, полупрозрачные колонии слизистой консистенции, с ровным краем.