Влияние модифицированных ДНК- и РНК-олигонуклеотидов, содержащих теломерные повторы, на активность теломеразы и рост опухолевых клеток

• Автор: Свинарева, Людмила Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структура и функции теломер

1.1.1. Лимит Хейфлика.

1.1.2. Проблема концевой недорспликации.

1.1.3. Строение теломер.

1.1.4. Шелтериновый комплекс

1.2. Структура и функции теломеразы.

1.2.1. Строение фермента

1.2.2. Принцип действия теломеразы
1.2.3. Альтернативные способы удлинения теломер.
1.2.4. Роль телохмеразы в иммортализации клеток.
1.3. Регуляция теломеразной активности
1.3.1. Транскрипция гена ЬТЕКТ
1.3.2. Альтернативный сплайсинг мРНК ЬТЕЯТ
1.3.3. Регуляция на уровне посттранскрипционных изменений
1.4. Активность теломеразы в нормальных и опухолевых клетках человека
1.5. Ингибиторы теломеразной активности.
1.5.1. Низкомолекулярные ингибиторы теломеразы
1.5.2. Антисснстерапия.
1.5.3. Рибозимы
1.5.4. Соединения, взаимодейстующие стеломерным вквадруплексом
1.5.5. РНКинтерференция.
1.6. Внетеломерные функции теломеразы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы.
2.1.1. Реактивы
2.1.2. Олигонуклеотиды.
2.1.3. Клеточные линии.
2.1.4. Клинический материал
2.2. Методы исследования.
2.2.1. Получение экстрактов из клеток опухолевых линий и тканей пациентов.
2.2.2. Анализ теломеразной активности
2.2.3. Определение цитотоксической активности исследуемых олигонуклеотидов
2.2.4. Исследование апоптоза и распределения клеток но фазам клеточного цикла с помощью проточной цитофлуориметрии.
2.2.5. Исследование препаратов клеток МеГЮ, содержащих РАМмеченые олигонуклеотиды, методом конфокальной микроскопии
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Анализ активности теломеразы в тканевых экстрактах пациентов с различными онкопатологиями.
3.2. Исследование влияния модифицированных ДНК и РНКолигонуклеотидов на теломеразную активность i vi.
3.3. Исследование динамики накопления модифицированных ДНКолигонуклеотидов и их влияния на рост и выживаемость опухолевых клеток.
3.4. Исследование внутриклеточной локализации меченых фосфоротиоатных олигонуклеотидов посредством конфокальной микроскопии
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. ГЛАВА 1. Лимит Хейфлика. Проблема концевой недорспликации. Строение теломер. Структура и функции теломеразы. Альтернативные способы удлинения теломер. Роль телохмеразы в иммортализации клеток. Ингибиторы теломеразной активности. Антисснстерапия. РНКинтерференция. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Материалы. Олигонуклеотиды. Клеточные линии. Методы исследования. Получение экстрактов из клеток опухолевых линий и тканей пациентов. Исследование апоптоза и распределения клеток но фазам клеточного цикла с помощью проточной цитофлуориметрии. ГЛАВА 3. Анализ активности теломеразы в тканевых экстрактах пациентов с различными онкопатологиями. Исследование влияния модифицированных ДНК и РНКолигонуклеотидов на теломеразную активность i vi. Исследование динамики накопления модифицированных ДНКолигонуклеотидов и их влияния на рост и выживаемость опухолевых клеток. ВЫВОДЫ. П.н. Т.п. Актуальность темы. Одной из важных задач современной онкологии и фармакологии является разработка соединений, ингибирующих рост опухолей. Несмотря на большое количество проводимых исследований, остается открытым вопрос о поиске и применении эффективных противоопухолевых препаратов, способных избирательно воздействовать на раковые клетки и не оказывать негативного действия на организм. Главными мишенями действия таких лекарственных средств должны являться специфические компоненты раковых клеток, необходимые для их существования и размножения. В нормальных соматических клетках существует механизм контроля пролиферации, обусловленный постепенным укорочением концевых участков хромосом теломер в каждом цикле клеточного деления. Раковые клетки обладают способностью обходить этот механизм и тем самым приобретать свойство иммортальности неограниченного репликативного потенциала. Приобретение иммортальности клетками опухолей напрямую связано с активацией фермента теломеразы, компенсирующей укорочение теломер, происходящее в процессе каждого деления клетки. Теломсразнаяактивность ТА обнаруживается почти во всех типах злокачественных опухолей человека, в то время как в большинстве нормальных тканей она практически не детектируется. Именно поэтому теломераза рассматривается как уникальный маркер опухолевого роста, а также как перспективная мишень для действия лекарственных препаратов. Особую группу соединений, исследуемых в настоящее время в качестве потенциальных ингибиторов теломеразы, представляют антисмысловые олигонуклеотиды.