Разработка промышленных технологий очистки рекомбинантных белков: гормона роста человека и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора

• Автор: Кононова, Наталья Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.01.06, 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1. Характеристика выделяемых объектов

1.1. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор.

1.1.1. Функции.

1.1.2. Структура.

1.1.3. Секреция и механизм действия

1.1.4. Применение препарата рчГКСФ в медицинской практике

1.2. Соматотропин

1.2.1 Функции
1.2.2. Структура.
1.2.3. Секреция и механизм действия
1.2.4. Свойства рекомбинантного ГРЧ
1.2.5. Применение препарата ГРЧ в медицинской практике.
2. Солюбилизация и ренатурация эукариотических белков, экспрессируемых в . i в виде телец включения.
2.1. Введение
2.2. Характеристика телец включения
2.3. Фолдинг белков живой клетке.
2.4. Промежуточные состояния и их роль в образовании
агрегированных форм белка
2.5. Ренатурация белков i vi.
2.6. Методы солюбилизации и ренатурации белков, формирующих тельца включения
2.6.1. Традиционные методы.
2.6.2. Методы, позволяющие улучшить проведение процесса ренатурации белка, полученного из телец включения
2.6.3. Новейшие методы солюбилизации белков, позволяющие
добиться высокого выхода белка после ренатурации.
3. Требования зарубежных фармакопей к фармацевтическим генно
инженерным препаратам.
3.1. Введение.
3.2. Определяемые примеси и методы контроля.
3.3. Эндотоксины
3.3.1. Методы определения эндотоксинов.
3.3.2. Взаимодействие эндотоксинов с белками.
3.3.3. Методы удаления эндотоксинов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
1. Оборудование, реактивы, сорбенты
2. Методы
2.1. Аналитические методы.
2.2. Препаративные методы.
3. Математические расчеты
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Оптимизация процесса ренатурации рГРЧ и рчГКСФ.
1.1. Введение.
1.2. Солюбилизация в мягких условиях Схема 1
1.3. Солюбилизация в жестких условиях Схема 2.
1.4. Масштабирование процесса ренатурации.
2. одбор условий очистки рГРЧ и рчГКСФ
2.1. Ионообменная хроматография
2.1.1. Исследование влияния и размера частиц сорбента
на процесс ИОХ.
2.1.2. Определение динамической емкости сорбента.
2.1.3. Определение рабочей скорости проведения ИОХ.
2.2. Оценка чистоты рГРЧ и рчГКСФ после ИОХ.
2.3. Подбор условий отщепления концевого метионина от рГРЧ
2.4. Гидрофобная хроматография
2.5. Масштабирование процессов очистки
3. Анализ качества выпускаемых препаратов.
3.1. Анализ рГРЧ
3.2. Анализ рчГКСФ
ВЫВОДЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


СМР надлежащая производственная практика. ВВЕДЕНИЕ. Актуальность исследования. Получение лекарственных препаратов с помощью методов генной инженерии является сегодня приоритетным направлением в развитии такой важной отрасли, как биотехнология. Возможность получения фармацевтических генноинженерных белков в промышленности дает следующие преимущества отсутствие ограничений по источнику сырья и низкая себестоимость конечного продукта. В настоящее время в мировой практике четко выражена тенденция к замене препаратов, получаемых из природных источников, на их рекомбинантные аналоги. Такие препараты, разрабатываемые рядом зарубежных фармацевтических компаний, уже сегодня успешно применяются в медицинской практике. Способы получения инсулина, интерферонов, интерлейкинов, гормона роста человека, гранулоцитарно о колониестимулирующего фактора, окситоцина и др. Они характеризуются различными способами экспрессии генов в клеткахпродуцентах, штаммовой вариабельностью и видовым разнообразием продуцирующих культур, способами очистки и качеством самих препаратов. Однако в России, по ряду причин, отсутствуют как собственные технологии получения многих, из перечисленных выше, терапевтических препаратов, а имеющиеся инновационные разработки не внедрены в производство. Одним из путей быстрого развития биофармацевтической промышленности является производство дженериков лекарственных препаратов, срок действия патентной защиты на которые уже закончился. Разработка таких технологий и организация собственного масштабного производства позволит быстро освоить современное оборудование, приобрести опыт работы в условиях вМР, изучить различные методы анализа и очистки, добиться высокого качества выпускаемого продукта, обеспечить необходимыми препаратами большее количество пациентов и заложить основы импортозамещения. Целыо диссертационной работы являлась разработка технологий получения и очистки рГРЧ и рчГКСФ из телец включения для организации полномасштабного промышленного производства активных фармацевтических субстанций. Оптимизировать условия проведения процессов солюбилизации и ренатурации рГРЧ и рчГКСФ в различных условиях. ГРЧ и рчГКСФ из телец включения на промышленных сорбентах. МерГРЧ. ГРЧ и рчГКСФ. Масштабировать процессы получения рГРЧ и рчГКСФ в условиях опытнопромышленного производст ва. Провести сравнительную оценку качества полученных препаратов с импортными аналогами. Впервые, для ренатурации белков, Ме1рГРЧ и рчГКСФ, был применен пероксид водорода, который позволяет быстро и эффективно проводить процесс при высокой концентрации белка. Установлено, что применение Си4 в процессе ренатурации осложняет очистку белков от эндотоксинов. Суя Суэ в тиоэфирную при . Разработан опытнопромышленный регламент на производство 0 г субстанций рГРЧ за один производственный цикл. Растан. Разработан опытнопромышленный регламент на производство 0 г субстанции рчГКСФ за один производственный цикл. Нейпомакс. Н.В. Кононова, А. И. Бобрускин, Т. Н. Костромина, Т. Д. Мелихова, . Вайнсон, Е. В. Свешникова, . Зинченко, . Демин, Д. И. Баирамашвили Разработка и оптимизация технологического процесса получения субстанции филграстима Биотехнология. С.. Н.В. Кононова, А. И. Бобрускин, И. А. Пучков, С. А. Косарев, Г. О. Кожевников, . Демин, Д. И. Баирамашвили, А. И. Мирошников Опытнопромышленная технология получения активной фармацевтической субстанции рекомбинантного гормона роста человека. Биотехнология. С.ЗЗ . Н.В. Кононова, А. И. Бобрускин, И. А. Пучков, Т. Г. Галкина, Д. И. Баирамашвили Сравнительный анализ качества российского препарата РАСТАН с зарубежными аналогами ГЕНОТРОПИН и ХУМАТРОП Тезисы научных докладов Доклад на Российском симпозиуме Биофарма . Турция. Н.В. Кононова, А. И. Бобрускин, И. А. Пучков, Д. И. Баирамашвили Технология производства рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в промышленных масштабах Тезисы научных докладов на Международной школеконференции посвященной летию создания ГосНИИгенетики. Москва. А.И. Бобрускин, Н. В. Кононова, Д. Москва.