Биотехнологические аспекты разработки методов диагностики сахарного диабета типа I

• Автор: Першина, Альбина Сабирьяновна
• Шифр специальности: 03.01.06, 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 142 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Методы диагностики сахарного диабета

1.1.1 .Показатели, используемые для постановки первичного диагноза

1.1.2.Методы оценки степени компенсации нарушений углеводного обмена больных сахарным диабетом

1.2. Особенности транспорта инсулина в крови человека

1.3. Диагностические системы на основе стабилизированных эритроцитов

1.4. Аналитические системы на основе аффинных сорбентов

Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Объекты исследований, реактивы и материалы
2.1.1. Принципы формирования групп добровольцев при изучении системы
транспорта инсулина в норме и при сахарном диабете типа I
2.1.2. Основные реактивы для синтеза аффинных сорбентов
2.1.3. Реагенты белковой природы и иммунологические препараты
2.2. Методы исследований
2.2.1. Химические методы
2.3. Формалинизация эритроцитов
2.3.1. Получение эритроцитарного диашостикума с использованием хлорида хрома III
2.4. Хроматографические методы
2.4.1. Приготовление гемолизатов
2.4.2. Хроматографическое выделение гликогемоглобина на сорбенте, содержащем дигидроксиборильные группы
2.4.3. Проведение хроматографического выделения связывающих инсулин белков сыворотки человека
2.5. Оценка иммуномодулирующих свойств компонентов сыворотки, связывающих инсулин
2.6. Определение коэффициента распределения инсулина между поверхностью эритроцитов и плазмой крови
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка метода иммобилизации мегааминофенилбороновой кислоты на силикагеле
3.2. Оценка достоверности и воспроизводимости количественного определения гликозилироваиного гемоглобина на полученном сорбенте
3.3. Разработка диагностических систем, использующих эритроциты, сенсибилизированные ковалентно связанным инсулином
3.4. Применение коэффициента распределения инсулина между поверхностью эритроцитов и плазмой крови в качестве показателя, отражающего степень нарушения транспорта инсулина при сахарном диабете типа I
3.5. Оценка иммуномодулирующих свойств компонентов сыворотки, связывающих инсулин
3.6. Исследование гипогликемических эффектов двух транспортных форм инсулина
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Использование в качестве матрицы аффинного сорбента для определения гликозилированной формы гемоглобина силикагеля, позволяет увеличить стабильность сорбента и повысить кратность его использования. Для оценки нарушений транспорта инсулина более информативным является определение коэффициента распределения инсулина, позволяющее дифференцировать компенсированную и декомпенсированиую стадии заболевания. Две транспортные формы инсулина достоверно различаются по выраженности гипогликемического эффекта. Белки плазмы крови, формирующие комплекс с инсулином в норме, обладают иммуносупрессорным действием. Результаты исследований были представлены на Международной научной конференции Проблемы биоэкологи и пути их решения Саранск, , ХШ международной экологической студенческой конференции Экология России и сопредельных территорий Новосибирск. Уфа, . Публикации. Основные материалы диссертации изложены в печатных работах, в том числе в четырех статьях в журналах, рекомендованных ВАК. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 7 страницах, содержит 8 рисунков, 8 таблиц и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы, включающего 4 работы. Глава 1. Сахарный диабет одно из самых распространенных эндокринных заболеваний, каждые лет число больных диабетом во всех странах мира удваивается Уоткинс, , Лябах, , Мельникова, . Существуют две основные клинические формы сахарного диабета, имеющие существенные различия как с точки зрения этиологии, патогенеза и клинического развития, так и с точки зрения лечения сахарный диабет типа I и типа II Дедов, . К диабету типа I предложено относить те нарушения углеводного обмена, развитие которых обусловлено деструкцией 3клеток поджелудочной железы и с наклонностью к кетоацидозу. Уменьшение или полностью исчезновение рклеток ведет к полной и н сули независимости, без чего у больного развивается кетоацидоз, кома и смерть. Сахарный диабет, при котором имеет место деструкция и уменьшение рклеток, что проявляется постоянной инсулинопенией со склонностью к кетоацидозу, но этиология и патогенез неизвестны, предложено относить к идиопатическому. У больных идиопагическим диабетом отсутствуют явления аутоиммунности и ассоциация с определенными генами Балаболкин, . Диагностика сахарного диабета подразумевает установление формы заболевания, оценку общего состояния организма, выявление сопутствующих осложнений и оценку степени их тяжести. Существует определенный алгоритм обследования пациентов. Лябах, . Основной клинической характеристикой сахарного диабета, является длительное повышение концентрации глюкозы крови, как следствие нарушения метаболизма глюкозы в организме В связи с этим, одним из наиболее специфических тестов при подтверждении д иагноза сахарный диабет является определение концентрации глюкозы в крови обследуемого. Нормальное содержание глюкозы в крови натощак при определении глюкозооксидазньтм или ортотолудиновым методом составляет 3,35,5 ммольл 0 мг0 мл, а при определении методом ХагедорнаЙенсена 3,6, ммольл 0 мг0мл. По данным ВОЗ , у взрослых нормальный уровень глюкозы в плазме, полученной из венозной крови натощак составляет 4,0 6,4 ммольл 5 мг0 мл, в цельной венозной крови 3,3 5,6 ммольл 0мг0мл и в цельной капиллярной крови 3,5 5,6 ммольл 0мг0мл. Для подтверждения диагноза требуется установить повышение концентрации глюкозы в крови по меньшей мере в двух последовательных измерениях проводимых в разные дни. Забор крови на анализ проводят в утреннее время. Перед забором крови необходимо удостовериться в том, что пациент ничего не принимал пищу накануне обследования. Дедов, . Как показали исследования последних лет, с возрастом нормальное содержание глюкозы в сыворотке крови увеличивается поэтому после лет необходимо проводить коррекцию нормальных значений гликемии, котораясоставляет 0,6 ммольл 1 мг0 мл на каждый последующий год. У практически здоровых лиц пожилого возраста гликемия натощак может составлять от 4,4 до 8,0 ммольл 5 мг0мл Лябах, .