Полиморфизм генов ферментов метаболизма эстрогенов и молекулярная характеристика опухолей молочной железы и эндометрия

• Автор: Хвостова, Екатерина Петровна
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.01.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 109 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Молекулярногенетические механизмы гормонального канцерогенеза женских репродуктивных органов

1.1.1. Промоторный тип гормонального канцерогенеза

1.1.2. Генотоксический тип гормонального канцерогенеза

1.2. Ферменты метаболизма эстрогенов.

1.2.1. Цитохромы Р0 го семейства СУР .

1.2.2. Роль цитохромов Р0 подсемейства 1А

1.2.3. Сульфотрансферазы.

1.3. Генетический полиморфизм ферментов синтеза и метаболизма эстрогенов.
1.4. Эстрогеновые рецепторы в гормональном канцерогенезе
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Материалы
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение геномной ДНК из букального эпителия
2.2.2. Выделение геномной ДНК из букального эпителия при
помощи набора для выделения ДНК
2.2.3. Измерение концентрации ДНК
2.2.4. Амплификация фрагментов геномной ДНК
2.2.5. Анализ продуктов ПЦР
2.2.6. Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции
2.2.7. Анализ продуктов рестрикции.
2.2.8. Аллельспецифическая ПЦР в режиме реального
времени
2.2.9. Выделение РНК гуанидинфенольным методом
2.2 Очистка РНК от примеси ДНК с помощью ДНКазы
2.2 Электрофорез РНК в частично денатурирующих
условиях.
2.2 Определение концентрации РНК
2.2 Реакция обратной транскрипции.
2.2 Мультиплексная ПЦР
2.2 Горизонтальный электрофорез нуклеиновых кислот в
агарозном геле
2.2 Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты

3.1. Определение экспрессии генов СУР и ЕКа в тканях рака молочной железы и рака эндометрия.
3.2. Анализ полиморфных вариантов СУР1А1, СУР1А2, СУР и ЗиЬТ1А1 у больных раком молочной железы.
3.3. Анализ полиморфных вариантов СУР1А1, СУР1А2, СУР и ЗиЬТ1А1 у больных раком молочной железы без ожирения и с ожирением.
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Роль эстрогеновых рецепторов и ароматазы в развитии рака молочной железы и рака эндометрия
4.2. Роль полиморфизма генов ферментов метаболизма эстрогенов в развитии опухолей молочной железы и эндометрия.
4.3. Взаимосвязь полиморфизма генов фермента метаболизма
эстрогенов с индексом массы тела.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Что касается рака эндометрия, то это заболевание также является наиболее часто встречаемой неоплазией женской половой системы во многих странах. В России заболеваемость составляет около случаев на 0 0 женского населения. К сожалению, на сегодняшний день онкологические заболевания часто выявляются на достаточно поздних стадиях своего развития, когда оказание медицинской помощи больным малоэффективно. Поэтому исследование патогенетических механизмов данных заболеваний с целью выяснения их молекулярных маркеров для ранней диагностики и эффективного лечения попрежнему актуально. Многочисленные исследования показали, что большая часть злокачественных опухолей женской репродуктивной сферы, таких как рак молочной железы и рак эндометрия, являются гормонозависимыми. Особое место в патогенезе данных заболеваний занимают эстрогены, играющие ключевую роль в стимуляции клеточной пролиферации в органахмишенях. Доказано, что необходимым условием запуска процессов трансформации в клеткахмишенях является увеличение содержания эстрогенов, в большей степени эстрадиола. Локальное повышение концентрации эстрогенов может быть следствием увеличения активности фермента ароматазы , которая является ключевым ферментом синтеза эстрогенов из андрогенных предшественников. В норме I9 экспрессируется в эстрогенпродуцирующих клетках клетки гранулезы, желтое тело яичников, клетки Лейдига яичек, плацента, различные районы головного мозга, жировая ткань. У женщин репродуктивного возраста основным органом, где осуществляется синтез эстрогенов, являются яичники. В период постменопаузы образование эстрогенов происходит в других тканях, таких как жировая ткань и кожа. Показано, что увеличение локальной концентрации эстрогенов, обусловленное гиперэкспрессией в тканяхмишенях, является одним из наиболее важных факторов для усиления клеточной пролиферации . Эстрогены проявляют свое действие посредством взаимодействия с эстрогеновыми рецепторами , , которые принимают участие в регуляции транскрипции многих генов, в том числе участвующих в клеточной пролиферации. Увеличение количества и активности эстрогсновых рецепторов в нормальной тканимишени усиливает ее чувствительность к эстрогенам и, как следствие, увеличивает риск возникновения гормонозависимой опухоли. Молекулярногенетическое исследование каждой отдельно взятой опухоли позволит понять причины таких различий. Одним из подходов для выяснения механизмов развития патологий, специфичных для каждой опухоли, является молекулярная характеристика опухоли и исследование генетического полиморфизма ключевых генов, участие которых в патогенезе заболевания не вызывает сомнения. Так как злокачественные опухоли молочной железы и эндометрия в большинстве случаев являются гормонозависимыми, то одной из важных характеристик является определение рецепторного статуса по экспрессии . Следует отметить, что на сегодня причины, вызывающие усиление его экспрессии, остаются неизвестными. Одним из таких механизмов может быть амплификация гена либо активация рецептора протеинкиназами экстраклеточных сигнальных путей . ii , , наблюдаемая почти в случаев РМЖ. Другой возможной причиной может быть нарушение синтеза и распада эстрогенов, прежде всего, эстрадиола Ашрафян I. . и др. i . Так, нарушение экспрессии гена ароматазы, сопровождающееся усилением ее ферментативной активности, часто характерно для гормонозависимых опухолей у женщин . Кроме того, источником эстрогенов может быть жировая ткань, для которой характерна высокая активность ароматазы. В таком случае, ожирение может быть фактором риска для равития гормонозависимых опухолей репродуктивной сферы. Важную роль в поддержании гормонального баланса играет ферментативная система деградации эстрогенов, осуществляемая цитохромом Р0. В последние годы в этом процессе доказана роль таких его изоформ, как 11, 12, которые окисляют эстрогены с образованием субстратов для 2й фазы метаболизма . Дальнейшая деградация метаболитов гормонов осуществляется с помощью сульфотрансфераз 11 и 11 i .