Механизм поступления цисплатина в клетки с участием системы транспорта меди

• Автор: Скворцов, Алексей Николаевич
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.01.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 256 с. : ил.

Введение
Глава 1. Анализ последовательности высокоаффинного транспортера меди СТЯ1 в контексте предпосылок связывания меди, серебра и платиновых препаратов
1.1. Свойства последовательности белка СТИЛ хордовых предполагают значительную функциональную консервативность

его доменов.

1.2. Предполагаемая роль медьсвязывающих мотивов Лконцевого фрагмента СТИЛ в транспорте ионов меди.

1.3. Докинг медьсвязывающих мотивов Уконца йОТЮ с предполагаемыми донорами меди

1.4. Металлсвязывающие свойства и потенциальная функциональная роль Сконца СТРЛ позвоночных.

1.5. Гипотетическая модель функционирования СТИЛ при транспорте меди

1.6. Предпосылки транспорта ионов серебра через СТИЛ

1.7. Гипотетическая модель транспорта платиновых препаратов

через СТЮ.
Глава 2. Тканеспецифическая экспрессия гена СТШ у млекопитающих
2.1. Экспрессия гена СТИЛ в печени и статус меди у крыс в онтогенезе.
2.2. Экспрессия гена СТИ и статус меди в отделах мозга.
2.3. Экспрессия гена СТЮ и статус меди в лактирующсй молочной железе крыс.
2.4. Экспрессия гена СТЯ1 и статус меди в сердце крыс.
2.5. Экспрессия гена 1 в органах взрослых мышей и содержание меди
этих органах.
Глава 3. Строение и механизмы взаимодействия платиновых комплексов с серосодержащим и соединениями.
Конкурентное связывание цисплатина с ДНК и донорами
Трансэффект и изомеризация в смешаннолигандных , и
.комплексах платиныН
Применение спектроскопии УФпоглощения в сочетании с многомерным разрешением кривых для исследования реакции
цисплатина с высокомолекулярной ДНК.
Идентификация сайтов платинирования на альбуминах
сыворотки человека и быка.
Связывание цисплатина и трансДДП с изолированными
гистоновыми белками i vi
Взаимодействие .метионина с комплексами платины.
Конкуренция i vi между реакциями цисплатина с
метионином и с высокомолекулярной ДНК.
Глава 4. Животная модель грызунов с контролируемым статусом меди.
4.1. Изменение статуса меди у грызунов, получающих с кормом хлорид серебра
4.2. Выделение и анализ церулоплазмина из крови крыс.
4.3. Распределение серебра в организме грызунов
4.4. Внутриклеточное распределение серебра в клетках печени мышей
4.5. Влияние диеты на метаболизм меди в печени грызунов
4.6. Распределение серебра в отделах мозга крыс и его влияние на метаболизм меди в мозгу
4.7. Форсированное восстановление статуса меди у грызунов
с помощью солей медиН.
Глава 5. Использование модели серебряных грызунов для установления взаимосвязи между статусом меди и транспортом цисплатина i viv
5.1. Влияние модуляции статуса меди ионами серебра на рост
клеток и цитостатический эффект цисплатина i vi.
5.2. Влияние статуса меди на распределение цисплатина в организме крыс i viv
5.3. Распределение цисплатина в организме мышей и его связь с тканеспецифической экспрессией 1 и статусом меди.
5.4. Влияние статуса меди на нефротоксичность и распределение платины у мышей в отдаленные сроки после инъекции цисплатина
5.5. Анализ корреляции между тканеспецифическим уровнем экспрессии мРНК 1 и накоплением меди, серебра и платины
в органах мышей.
Глава 6. Использование модели серебряных грызунов для установления взаимосвязи между статусом меди и ростом опухолей i viv
6.1. Метаанализ литературных данных по связи статуса меди и опухолевого роста у человека
6.2. Изменение статуса меди у мышей, выращивающих опухоли различного происхождения
6.3. Влияние диеты на рост опухоли НСТ6 у иммунодефицитных мышей
6.4. Влияние диеты на рост меланомы мышей В
Заключение
Материалы и методы
Список цитированной литературы


В то же время, структурные исследования покоящегося , указывают на сильно наклонное положение ТМД1 в мембране, что плохо согласуется с минимальной длиной а. Алгоритм I предсказывает, что аспираль потенциального ТМД консервативна и продолжается в сторону Сконца до суммарной длины а. Однако в области неизменно присутствуют 5 положительно заряженных а. ТМД1 с цитозольной стороны позицией . Одновременно интуитивный анализ профиля гидропатии предсказывает ТМД1 в области V, что совпадает с диапазоном, указанном в референтной записи для . ТМД1 в сторону Лконца рис. ТМД1 включает в себя а. Рис. Статистика свойств последовательностей СТЯ1 хордовых, выравненных по Сконцу без вставок. Средний по последовательностям заряд остатков а, Н считается незаряженным. Профиль гидропатичности рамка а. Епе1тип е а. Распределение нуклеофильных групп в, черный 5доноры, темносерый Лдоноры, светло серый 9доноры. Предсказание вторичной структуры г с помощью алгорима РРге1 ордината надежность предсказания 0 наименьшая надежность цвета белый неупорядоченная структура гс. Положение ключевых сайтов и предсказание трансмембранных доменов ТМД алгортимом МЕМБАТ черный ТМД предсказан во всех последовательностях, серый ТМД предсказан в более последовательностей стрелки направлены в сторону внеклеточных концов ТМД в соответствии с ориентацией, предсказанной МЕМБАТЗ. Абсцисса номер а. ЬСТШ. Г. Блобела i, i, , поэтому механизм направления 1 в мембрану остается непонятным. Возможно, роль сигнала переноса выполняет сам ТМД1, и значительную роль в этом процессе может играть кластер положительно заряженных аминокислот в потенциально аспиральной области . Если это так, то предсказанное нами его удлинение по направлению к концу является оправданным. Повидимому, как мы и предполагали исходно Самсонов и др. ТМД2 и ТМДЗ с образованием тригональной медьпроводящей поры, а экстрацеллюлярное наружное устье петлями между ними рис. Аа, 6. Такое строение обеспечивает образование двух тиоэфирных колец, образованных остатками и . ТМД покоящегося в двумерном кристалле в мембране соответствует предложенной нами модели с тем небольшим отличием, что аспирали ТМД1 и ТМД2 имеют значительный наклон рис. ТМД в мембране и их функциональную роль рис. Консервативные нуклеофильные а. ТМДЗ не содержит консервативных нуклеофильных остатков, но консервативные а. Рис. ТМД Самсонов и др. ТМД на основании электронномикроскопических данных Эе Бео с соавт. Ое Рео е1 Ы. СТШ. Черные ромбы указывают положение остатков М4, также схематически отмечено положение сайта Агликозилирования у млекопитающих. Рис. Спиральная диаграмма потенциальных трансмембранных аспиралей СТШ позвоночных изображены вид спиралей с внеклеточной стороны, последовательность ИСТШ и внеклеточная петля, демонстрирующая асимметричное распределение нуклеофильных и консервативных остатков. Строго консервативные а. Более темные оттенки соответствуют большей гидрофильности. Остатки с консервативным зарядом или гидропатичностью обведены тонкой линией. Вариабельные остатки без контурных линий. Рис. Частоты встречаемости аминокислотв полной последовательности 1 а и Vконцевом фрагменте а. Наиболее вариабельной частью белка 1 является внеклеточный концевой домен а. В последовательности Vконцевого домена не удалось найти консервативные участки или сайты, типичные для внутриклеточных медьсвязывающих мотивов. Таким образом, для функционирования домена важна не конкретная последовательность аминокислот, а ее свойства. Вопервых, последовательность сильно обогащена остатками М и Н и обеднена положительно заряженными аминокислотами рис. Общий заряд Vконца отрицательный, что благоприятствует электростатическому притяжению катионов. Остатки М и Н чаще всего разделены одним или двумя а. МхМ, МххМ, НхН, IIxx в Vконцах двадцати семи анализируемых последовательностей составляют , , и , соответственно. Такое расположение остатков благоприятствует возможности образования хелатного комплекса обеими нуклеофильными группами Н или М в а и конформациях пептидного остова, соответственно. Вовторых, Vконец, несмотря на высокое содержание остатков М, обладает гидрофильными свойствами рис.