Изучение цитостатических свойств и других биологических эффектов некоторых синтетических полиаминов в модельных системах

• Автор: Сокуева, Наталья Александровна
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение
Глава 1. Основные природные и синтетические полиамины, их свойства и роль в разработках некоторых биомедицинских проблем. Обзор литературы.

1.1. Общие биохимические характеристики полиаминов

1.2. Общие представления о метаболизме полиаминов у человека и некоторых других млекопитающих
1.3. Главные функции полиаминов у человека и некоторых других млекопитающих полиамины и рак.

1.3.1. Полиамины в регуляции биосинтеза белков.

1.3.2. Полиамины в функционировании некоторых ионных каналов и рецепторов

1.4. Полиамины при стрессе, старении и некоторых заболеваниях

1.4.1. Иолиамины при стрессе

1.4.2. Полиамины при старении
1.4.3. Полиамины при онкологических и некоторых других заболеваниях
1.5. Синтетические полиамины и их некоторые биомедицинские приложения
1.6. Некоторые модели для определения биологической активности синтетических полиаминов.
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Биологические материалы и реактивы
2.1.1. Клеточные культуры
2.1.2. Образцы цельной крови
2.1.3. Образцы регенерирующей печени здоровых крыс
2.1.4. Пролиферирующая ткань гепатомы крыс линии Г
2.1.5. Химические соединения аналоги полиаминов
2.1.6. Реактивы
2.2. Методы выращивания клеточных культур и методики определения пролифера
тивной активности.
2.3. Оценка пролиферативной активности и цитотоксичности тестируемых веществ
2.3.1. Оценка цитотоксичности V
2.3.2. Оценка цитотоксичности на флуоресцентном ридере СеНЯероПег
2.4. Количественное определение содержания полиаминов
2.4.1. Экстракция свободных полиамидов
2.4.2. Разделение и количественное определение полиаминов методом ВЭЖХ
2.4.3. Количественное определение белка в бесклсточных тестструктурах
2.5. Цротеомные методы исследования. 2.5.1. Подготовка проб 2.5.2. Фракционирование белков двумерным электрофорезом по ОФарреллу 2.5.2.1. Изоэлектрофокусированис в полиакриламидном геле с градиентом , сформированном амфолинами 2.5.2.2. электрофорез в пластинах полиакриламидного геля 2.5.3. Детекция белков на елевых пластинах. Денситомстрия двумерных электрофоре рамм. Компьютерный анализ результатов. Хранение гелевых пластин 2.5.4. Масссиектрометрическая идентификация белков 2.6. Методы получения ДНК и формирование ДНКколлекций 2.7. Методы исследования ДНКполиморфизма 2.7.1. Метод дискриминации аллелей с помощью ПЦР в реальном времени 2.8. Статистическая обработка результатов.
Результаты исследований и их обсуждение
Глава 3. Биотестсистемы на основе тканей и культивируемых клеток животных
Глава 4. Биотестсисгема на основе быстро пролиферирующих клеток человека.
Глава 5. Протеомный анализ клеток линии РС3 и изучение биологических эффектов синтетических аналогов полиаминов
Глава 6. Изучение полиморфизма генов РЛОХ, 1 и в выборке пациентов с раком простаты и у здоровых россиян
Заключение
Выводы
Список литературы


Для обеспечения определения цитостатической биологической активности синтетических полиаминов разработана клеточная биотсстсистема, использующая в качестве тестируемого объекта быстро пролиферирующие культивируемые клетки рака простаты человека РС3 и . С помощью этой биотесгсистемы охарактеризованы четыре новых синтетических аналога полиаминов дифенилсодержащих амина ДФСА1 ДФСА4 по их способности подавлять рост опухолевых клеток человека. По результатам протеомного анализа в клетках линии РС3 определены шесть белков, количественно изменяющихся под действием ДФСА1 и 2. При этом впервые установлено присутствие в этих клетках двух безымянных белков белка, который зарегистрирован в базе данных i I под 9 по данным анализа кДНК из ткани матки, локус 0 в и считается родственным аспартат аминотрансферазам, а также белка, идентифицированного как безымянный белок из семейства РНКсвязывающих белков с доменом в i I. Впервые установлено, что у этнических русских по результатам изучения полиморфизма однонуклеотидных замен сайты 1 и РАОХявляются мономорфными и они не пригодны для изучения ассоциаций с РП в отличие от этого для сайта 0 в гене 1 удалось выявить достаточно выраженный полиморфизм со следующими характеристиками . А, и . РП. Научнопрактическая значимость. Апробировано несколько модельных систем для определения биологической активности синтетических аналогов природных полиаминов и разработана биотсстсистема, позволяющая оценивать цитостатические цитотоксические свойства указанных соединений на клетках и РС3 метод тестирования витальная система регистрации количества клеток. Изучены показатели биологической активности ти синтетических аналогов природных полиаминов, включая антипролиферативные свойства у 6ти соединений на разработанной биотестсистеме, использующей быстро пролиферирующие клетки рака простаты. При протеомном анализе белков из клеток РС3 проведена массспектрометрическая идентификация белковых фракций, в результате чего расширен информационный модуль в отечественной базе данных Протеомика рака простаты версия г. Интернете на странице Института биохимии им. А.Н. Баха. Основные положения диссертации, выносимые на защиту. Из новых синтетических аналогов полиаминов три соединения 1аминооксиЗаминопропан, дезоксиаденозилБметилртиоэтилгидроксиламин, этилендиамин обладают наибольшими биоэффектами в бесклеточной тестсистеме. В модельных условиях на культивируемых клетках Iаминоокси3аминопропан и бдезоксиаденозилбмегилтиоэтилгидроксиламин показали себя как антипролиферативные агенты. С помощью биотестсистсмы на основе быстро пролиферирующих клеток человека определены биологические эффекты ДФМО и МГБГ, а также 4х новых синтетических дифенилсодержащих аминов ДФСА 1 4. Показано, что ДФСА1 является наиболее перспективным цитотоксическим агентом, поскольку для него выявлено наиболее выраженное антипролиферативное действие. Протеомный анализа белков клеток РС3 выявил два новых безымянных белка человека и позволил расширить информационный модуль Белки РС3 в базе данных Нротеомика рака простаты. Показано, что у этнических русских сайт в гене X5 и сайт в гене РАОХ являются мономорфными, т. РП а для сайта 0 в гене существует полиморфизм со следующими характеристиками . А, и . РП. Апробация работы. Материалы данной работы докладывались на международных, российских конференциях, а также на научных съездах и кошрессах, в том числе XVIII Межд. Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии, . Украина, Крым, ЯлтаГурзуф Ii i , , , i Межд. Экология и медицина современное состояние, проблемы и перспективы, , Москва Ii i, I, , , Публикации. По теме диссертации опубликовано научных работ, среди которых 3 статьи в рецензируемых профильных журналах, рекомендованных ВАК РФ, а также тезисов докладов на отечественных и международных научных конференциях. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 8 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка цитируемой литературы 9 ссылок на публикации отечественных и зарубежных авторов. Работа содержит таблиц и рисунков.