Иммуноцитохимическая характеристика ядрышковых белков в лимфоидных клетках человека и мыши

• Автор: Малышева, Марина Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.04, 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список используемых сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ядрышко основной структурный домен клеточного ядра

1.2. Основные белки ядрышка

1.3. Особенности организации и состояния ядрышек лимфоцитов млекопитающих

1.4. Структура и белки ядрышек лимфоцитов при опухолевом росте

ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Локализация и содержание белков ядрышка БиМб и В в лимфоцитах селезенки мыши, активированных к пролиферации конканавапином А
3.1.1. Подбор оптимального метода фиксации клеток мыши
3.1.2. Контроль активации пролиферации лимфоцитов селезенки мыши
3.1.3. Локализация БСЖРб и В в лимфоцитах селезенки мыши на разных сроках после активации пролиферации
3.1.4. Количественное содержание белков БЕЖЕб и В в лимфоцитах селезенки мыши на разных сроках после активации Кон А
3.2. Локализация и содержание ключевых белков ядрышка в лимфоцитах периферической крови человека, активированных к пролиферации фитогемагглютинином
3.2.1. Подбор оптимального метода фиксации клеток человека
3.2.2. Контроль активации пролиферации лимфоцитов периферической крови здоровых лиц
3.2.3. Локализация белков ядрышка в лимфоцитах периферической крови человека на разных сроках активации пролиферации
3.2.4. Количественное содержание ключевых белков ядрышка в лимфоцитах периферической крови человека на разных сроках после ФГАстимуляции
3.3. Содержание белков ядрышка БиИРб, фибрилларина и В в лимфоидных клетках больных лимфопролиферативными заболеваниями
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Эти наблюдения впервые показали, что белок ядрышка ШР6 может служить маркером ранней активации лимфоцитов человека к пролиферации, а также иметь прогностическое и, возможно, диагностическое значение. Показано, что, так же, как и в лимфоцитах периферической крови человека, БДОТб не выявляется в лимфоцитах, выделенных из селезенки мышей. Таким образом, на сегодняшний день белок ЗиИРб является единственным белком ядрышка, который, не выявляясь в ядрышках покоящихся лимфоцитов млекопитающих на примере человека и мыши, начинает экспрессироваться в митогенстимулированных лимфоцитах раньше известных маркеров клеточной пролиферации Кл и РСИА. Полученные результаты расширяют существующие фундаментальные представления о белках ядрышка как маркерах клеточной пролиферации. Возможность выявления по состоянию ядрышкового белка БиКИб ранней стадии пролиферативной активности лимфоцитов иовидимому, в 1 фазы, не выявляемой общеизвестным антигеном Кл, позволяет рекомендовать его анализ для лабораторных исследований в клинической практике с целью ранней диагностики злокачественной транформации лимфоцитов. Выявленная корреляция экспрессии белков Кл и ЖР6 у больных с лимфопролиферативными заболеваниями, с повышением их экспрессии при нарастании злокачественности процесса, позволяет рассчитывать на широкое клиническое применение антител к БиЯРб. На модели стимулированной ФГА культуры лимфоцитов здоровых лиц показано, что белок БТЖРб является надежным маркером последовательных стадий активации лимфоцитов человека к пролиферации. ЗиИРб отсутствует в неактивированных лимфоцитах и начинает выявляться в клетках раньше маркеров клеточной пролиферации белков Кл и РСИА. Существует положительная корреляция между экспрессией белка ЗиЯРб и белков Кл и РСНА в лимфоидных клетках больных различными лимфопролиферативными заболеваниями. Белок ядрышка БиЯРб может служить новым маркером активации лимфоцитов млекопитающих к пролиферации и иметь дополнительное диагностическое и прогностическое значение. Апробация работы состоялась июня г. Гемопоэз, молекулярная биология, биотехнология, иммуногематология гемобластозы и депрессии кроветворения Учреждения Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр РАМН и июня года на заседании межлабораторного научного коллоквиума Учреждения Российской академии наук Институт биоорганичсской химии им. М.М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН. IV Российском симпозиуме Белки и пептиды Казань, , XXI и XXII зимних молодежных научных школах Перспективные направления физикохимической биологии и биотехнологии Москва, и гг. По теме диссертации опубликовано печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК и 9 тезисов. Получено положительное заключение о выдаче патента. ГЛАВА I. Ядрышко это домен клеточного ядра, не отделенный мембраной, и сформированный около участков хромосом, кодирующих повторы рибосомных генов рДНК. У эукариот ядрышко является самым крупным субкомпартментом клеточного ядра от 1 до мкм в диаметре, а его главной и важнейшей функцией является участие в биогенезе рибосом. Основные биохимические компоненты ядрышка это белки, необходимые для транскрипции рибосомных генов, процессинга созревания прерРНК и сборки рибосомных частиц . ii . i, . Именно большое содержание белков определяет высокую плотность ядрышек в ядрах большинства клетках млекопитающих. Кроме белка в состав ядрышка входят нуклеиновые кислоты рРНК до и ДНК 2. Помимо биосинтеза рибосом . . . . iv . Основными структурными компонентами ядрышек, активно синтезирующих рибосомы рис. ФЦ, плотный фибриллярный компонент ФК, гранулярный компонент ГК, ядрышковые вакуоли и ассоциированный с ядрышком хроматин V v, , . Фибриллярные центры ФЦ это сферические структуры с низкой электронной плотностью, соответствующие ядрышкообразующим районам хромосом, образованные фибриллярным материалом.