Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека

• Автор: Шагирова, Жансе Мухадиновна
• Шифр специальности: 03.01.01, 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 с. : ил.

Введение.

Обзор литературы

Глава 1. Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека

1.1. Характеристика клеток человека, различающихся

по чувствительности к радиации и химическим мутагенам.

1.1.1. Синдром Атаксия телеангиэктазия

1.1.2. Синдром Дауна

1.1.3. Синдром ЭлерсаДанло.

1.2. Генетический полиморфизм как маркер индивидуальной чувствительности клеток человека к мутагенам радиация, химические мутагены.

1.2.1. Г сны биотрансформации детоксикации ксенобиотиков

1.2.2. Гены клеточного цикла

1.2.2.1. Ген р
1.2.2.2. Ген метилентетрагидрофолат редуктазы МТИП.
1.2.3. Гены репарации ДНК.
1.3. Защита клеток человека от мутагенов при воздействии
антимутагенов и при адаптивном ответе.
1.3.1. Классификация антимутагенов антиканцерогенов адаптогенов
и особенности их действия.
1.3.2. Эффективность действия антимутагенов в качестве корректоров
наследственных или приобретенных патологий
1.3.3. Адаптивный ответ.
Эксперементальная часть.
Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1. Материалы
2.1.1. Клеточные культуры.
2.1.2. Антимутагены.
2.1.3. Мутагены.
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение ДНК
2.2.2. Метод полимеразной цепной реакции ПЦР
2.2.3. Метод ПЦРанализа конформационного полиморфизма одной
нити ДНК РСЯЭБСР.
2.2.4. Метод ГГЦРПДРФ полиморфизм длин рестрикционных фрагментов анализ
2.2.5. Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.2.6. Электрофорез ДНК в полиакриламидном геле ПААТ
2.2.7. Электрофорез белков в полиакриламидном геле ПААГ.
2.2.8. Визуализация электрофореграмм
2.2.9. Хроматография клеточных лизатов на колонках с гидроксиапатитом ГАПом
2.2 Метод ДНКкомет
2.2 Определение выживаемости клеток методом
прижизненного окрашивания раствором трипанового синего.
2.2 Математическая обработка результатов.
Глава 3. Генетический полиморфизм в радиочувствительных клетках лимфоциты, фибробласты пациентов с
синдромами Дауна СД и Элерса Дан л о СЭД.
3.1. Определение частот полиморфных аллелей генов I 1А1 и II 1, 1, 1 фаз детоксикации ксенобиотиков.
3.2. Определение частоты полиморфных аллелей гена
метилентетрагидрофолат редуктазы .
3.3. Определение частоты возникновения v мутаций в экзоне 7,
гена р кодоны
3.4. Определение частоты полиморфных аллелей гена X
3.5. Определение частоты полиморфных аллелей гена X
3.6. Заключение
Глава 4. Эффект антимутагенов, теплового шока и адаптивный ответа в радиочувствительных клетках лимфоциты, фибробласты пациентов с синдромом Дауна, различающихся по генетическому полиморфизму.
4.1. Эффект ретинола в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна, характеризующихся различиями по генетическому полиморфизму.
4.2. Эффект чесночного экстракта ЧЭ в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна, характеризующихся различиями по генетическому полиморфизму.
4.3. Эффект краун соединения КС, как синтетического антимутагена, в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна, характеризующихся различиями по генетическому полиморфизму.
4.4. Эффект теплового шока ТШ как адаптирующего фактора в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна, характеризующихся различиями по генетическому полиморфизму.
4.5. Адаптивный ответ АО в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна, характеризующихся различиями по генетическому полиморфизму.
4.6. Анализ белкового полиморфизма в фибробластах пациента
с синдромом Дауна и клетках, индуцированный антимутагенами, адаптирующими факторами
4.7. Заключение
Обсуждение результатов.
Список литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АО адаптивный ответ АФА активные формы азота ЛФК активные формы кислорода к.з. коэффициент защиты КС краунсоединение
ген метилентетрагидрофолат редуктазы
ППОЛ продукты перекисного окисления липидов
СД синдром Дауна
СЭД синдром ЭлерсаДанло
ТШ тепловой шок
ЧЭ чесночный экстракт
xii i
i
глутатионВтрансфераза
i i
i xii i
ii
клетки линии рабдомиосаркомы человека
X X i
X1 X i i
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Так было показано что у пациентов СД происходит образование бляшек, укорочение и истончение шипиков постсинаптических структур на апикальных дендритах крупных пирамидных нейронов V слоя коры больших полушарий головного мозга, сопровождаемое задержкой умственного развития, что и, возможно, является причиной ранних нейродегенеративных изменения, подобных тем, которые характерны для болезни Альцгеймера , . Синдром Элерса Данло СЭД является наследственным заболеванием с нарушенным обменом коллагенов, характеризуется повышенной радиочувствительностью Македонов и др. Эти клетки были второй моделью для изучения особенностей генетического полиморфизма в радиочувствительных клетках. В последнее десятилетие уделяется большое внимание исследованию генетического полиморфизма как фактора, влияющего на индивидуальную чувствительность клеток и организма человека к действию радиации Сальникова и др. Основными системами, обеспечивающими защиту клеток и организма человека от действия мутагенов различной природы, являются в том числе системы детоксикации ксенобиотиков i . ДНК Иванов, . Одним из основных подходов для увеличения устойчивости клеток человека к мутагенам является использование антимутагенов и до последнего времени их отбор происходил эмпирически. В связи с вышеизложенным, представляется актуальным использование радиочувствительных клеток СД и СЭД в качестве модели для тестирования эффективности антимутагенов, а также для изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной чувствительности к радиации и химическим мутагенам, в том числе тяжелым металлам. Результаты данной работы также могу открыть новые подходы для коррекции этиопатогенетических механизмов, связанных с нарушениями защитных процессов, лежащих в основе развития патологий при СД и СЭД. Развитие исследований в этом направлении важно для понимания путей защиты и стабилизации генома человека в условиях возрастающего загрязнения окружающей среды. Целью данной работы является разработка подхода к увеличению устойчивости клеток человека к мутагенам, на основе изучения эффективности действия антимутагенов в радиочувствительных клетках, в зависимости от их полиморфизма по генам, принимающим участие в клеточном гомеостазе. Изучить полиморфизм по и аллельным вариантам генов, участвующих в процессах детоксикации, репарации, регуляции клеточного цикла и др. СД и СЭД но сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров. Выявить наличие возможной связи между уровнем эффективности защиты радиочувствительных клеток СД и здоровых доноров антимутагенами в зависимости от особенностей их генетического полиморфизма. Изучить спектр белков при действии антимутагенов и адаптирующих факторов в клетках СД и контрольных клетках при воздействии повреждающей концентрации СбС . Впервые был исследован комплекс полиморфных генов, принимающих участие в процессах детоксикации, репарации, регуляции клеточного цикла и др. СД и СЭД по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров. Впервые была показана принципиальная возможность защиты радиочувствительных клеток пациентов СД от генотоксического действия СбС5х6М природными чесночный экстракт, ретинол, синтетическими краунсоединение антимутагенами и адаптирующими факторами тепловой шок. Впервые был проведен анализ уровня защиты радиочувствительных клеток СД антимутагенами в зависимости от особенностей генетического полиморфизма. Была показана корреляция между феноменом отсутствия индуцированного СбС адаптивного ответа в радиочувствительных клетках пациентов СД, при действии повреждающей концентрации этого мутагена с отсутствием белка в области кДа в этих клетках при таких же условиях. СД, могут быть использованы также в радиобиологии и генетике, как удобная модель для дальнейшего изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной радиочувствительности, для дальнейшего поиска и тестирования антимутагенов, с целью защиты клеток от действия мутагенов. Работа изложена на 1 страницах машинописного текста, содержит таблиц, рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 2х глав результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает отечественных и 1 иностранный источник.