Усовершенствование программы экстракорпорального оплодотворения человека с помощью применения метода витрификации

• Автор: Джамбор, Варвара Воскановна
• Шифр специальности: 03.00.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : ил.

1.1. Основные аспекты программы экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов человека

1.1.1. Причины женского бесплодия и экстракорпоральное оплодотворение человека

1.1.2. Гормональная стимуляция овуляции пациенток .

1.1.3. Условия культивирования эмбрионов человека

i vi.

1.1.4. Подготовка сперматозоидов для экстракорпорального оплодотворения человека

1.1.5. Этапы развития эмбрионов человека и перенос

эмбрионов

1.1.6. Этические и правовые аспекты репродуктивных

технологий.

1.2. Метод медленного замораживания

1.3. Метод витрификации
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Программа экстракорпорального оплодотворения
и перенос эмбрионов человека.
2.2.2. Метод медленной криоконсервации.
2.2.3. Метод витрификации
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Сравнение частоты наступления беременностей и частоты имплантации в результате переноса медленно криоконсервированных и витрифицированных бластоцист в крио циклах.
3.2. Применение метода витрификации ооцитов человека
3.3. Разработка модификации метода витрификации
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений
ЦАГиП РАМН Научный Центр Акушерства, Гинекологии Перинатологии Российской Академии Медицинских Наук
ПЭ
ИКСИ
яйцеклетку
ЛГРГ
ГГ
ЛГ
ИФР
СПКЯ
Е
УЗИ
ХГ
вкм
ОМБО
экстракорпоральное оплодотворение
перенос эмбрионов
репродуктивные технологии
интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида
гонадотропные гормоны аденогипофиза
люлиберин
гонадолиберин
гонадотропин
фолликулостимулирующий гормон
лютеинизирующий гормон
соматотропин
инсулиноподобные факторы роста
адренокортикотропный гормон
синдром поликистозных яичников
антиспермальные антитела
эстрадиол
прогестерон
ультразвуковое исследование
человеческий менопаузальный гонадотропин
хорионический гонадотропин
трансвагинальная пункция яичников
внутриклеточная масса
глицерин
диметил сульфоксид
РО пропандиол
Ев этиленгликоль
ПВП поливинилпирролидон
Ск концентрация криопротектора
Тк температура кристаллизации
То температура остекленения
СГЯ синдром гиперстимуляции яичников
АГ нРг агонист гонадотропинрилизинг гормона
ВВЕДЕНИЕ


К классу А относят эмбрионы с достаточным количеством одинаковых по размеру бластомеров бластомера на день 2, 6 бластомеров на день 3, компактизация бластомеров и гладкая структура морулы на день 4, формирование бластоцисты эмбриобласта и трофобласта на день 5 фрагментация составляет менее 5 от общего объема эмбриона. Эмбрионы класса В также имеют достаточное количество бластомеров на день 2 и день 3, бластомеры могут немного отличаться по размеру, либо фрагментация составляет 5 от общего объема эмбриона, компактную структуру морулы на день 4 с фрагментацией 5 от общего объема эмбриона, на день 5 эмбрион все еще находится на стадии морулы. Эмбрионы класса С характеризуются недостаточным количеством бластомеров в эмбрионе, неодинаковыми по размеру бластомерами, отсутствием структур морулы и бластоцисты на день 4 и на день 5, соответственно, и фрагментацией от общего объема эмбриона. К классу относят эмбрионы, которые сильно отстают в развитии и почти полностью фрагментированы более от общего объема эмбриона. М. . Выбор дня ПЭ зависит от количества эмбрионов, их градации, а также от статистических показателей успешных ЭКО и ПЭ в различных лабораториях. В некоторых лабораториях предпочтение отдается ранним дням ПЭ второму или третьему. В этих случаях переносят лишь часть эмбрионов, а оставшиеся эмбрионы классов А и В замораживают для переноса их в следующих циклах крио циклах. ПЭ ложится на пятый день. Эмбрионы, достигшие стадии бластоцисты на пятый день, в своем большинстве относятся к классу А Эокгаэ А. Неиспользованные после ПЭ бластоцисты и эмбрионы, из которых сформировались бластоцисты на шестой день такие эмбрионы относятся к классу В также подвергают криоконсервации. В то время как метод медленного замораживания клеток и эмбрионов существует уже лет и характеризуется медленным вытеснением воды криопротекторами с последующим медленным понижением температуры от комнатной температуры до температуры жидкого азота, 6С Мепего У. У1гаЩК1ип I. ЫеЬегтапп I. Ь ТгоипБоп А. В нашей лаборатории был применен и модифицирован метод витрификации, разработанный д. М. Куваямой в клинике Като, специализирующейся по ЭКО Токио, Япония Киуауата М. Метод витрификации основан на быстром воздействии криопротекторов вследствии их повышенной концентрации и на быстром понижении температуры. При витрификации происходит быстрое вытеснение воды из эмбрионов для предотвращения ее кристаллизации в клетках с последующим моментальным переносом эмбрионов в жидкий азот. Многие исследования отмечали значительное возрастание частоты выживаемости эмбрионов при использовании техники витрификации Е1ЭапаБоип1. В наши дни криоконсервация эмбрионов является обычным методом программы ЭКО. Поэтому, разработка модификаций метода криоконссрвации яйцеклеток и эмбрионов и установление наиболее оптимальных условий его протекания является одним из самых важных направлений программы ЭКО. Таким образом, целью нашего исследования явилось оценить эффективность метода витрификации эмбрионов и ооцитов человека с помощью сравнения методов медленного замораживания и витрификации, установить наиболее оптимальные условия для успешного проведения витрификации с целью повышения частоты наступления беременностей и имплантации в программе ЭКО и ПЭ. Применить метод витрификации и метод медленного замораживания на бластоцистах человека дня 5 и дня 6 развития. Сравнить частоту выживаемости бластоцист при витрификации и методе медленного замораживания. Сравнить частоту наступления клинической беременности и частоту имплантации при ПЭ после витрификации бластоцист и после использования метода медленного замораживания бластоцист с частотой наступления клинической беременности и имплантации перенесенных бластоцист и морул на день 5 в циклах ЭКО. Сравнить схемы подготовки пациенток к переносу размороженных после медленной криоконсервации эмбрионов и после витрификации. Применить метод витрификации ооцитов и оценить его результаты. Разработать оптимальные условия витрификации ооцитов и эмбрионов человека.