Дифференцировка и поведение нейральных стволовых клеток человека в культуре ткани и при трансплантации в головной мозг крыс

• Автор: Подгорный, Олег Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 171 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. ПеГфОгенез и стволовые клетки взрослого мозга млекопитающих.

1.2. Выделение, культивирование и исследование развития нейральных стволовых клеток i vi.

1.3. Биологические основы нейротрансплантации.

1.4. Трансплантация нейральных стволовых клеток в ЦНС.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Культивирование нейральных стволовыхпрогениторных клеток человека.

2.2. Методы трансплантации культур нейральных стволовыхпрогениторных клеток человека в головной мозг взрослых крыс.
2.3. Фиксация головного мозга.
2.4. Методы фиксации клеточных культур
2.5. Приготовление срезов головного мозга крыс
2.6. Приготовление срезов нсйросфер.
2.7. Гистологические методики.
2.8. Методы иммуногистохимического окрашивания
2.9. Антитела и их описание.
2 Документирование и обработка результатов микроскопических исследований
2 Гипоксическая модель повреждения головного мозга
Глава 3. Дифференцировка и поведение нейральных стволовых клеток эмбрионального мозга человека в культуре i vi.
3.1. Введение.
3.2. Результаты исследования
3.3. Обсуждение.
Глава 4. Трансплантация популяций нейральных стволовыхпрогениторных клеток эмбрионального мозга человека в головной мозг взрослых крыс
4.1. Введение
4.2. Результаты исследования.
4.3. Обсуждение
Глава 5. Трансплантация клеток ненейралыюго происхождения в головной мозг взрослых крыс.
5.1. Введение
5.2. Материалы и методы
5.3. Результаты исследования.
5.4. Обсуждение
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Кроме этого была прослежена генерация нейробластов из единичных клеток Втипа i vi и i i, с использованием трансгенных мышей, у которых под промотсром гена ГФКБ находился ген рецептора к ретровирусу птичьего лейкоза. После заражения таких животных вирусом птичьего лейкоза, содержащим ген щелочной фосфатазы, исследователи обнаружили активность щелочной фосфатазы сначала в астроцитах СВЗ, затем через несколько дней в нейробластах, мшрнрующих вдоль рострального миграционного пути, и, наконец, через две недели во вставочных дефенитивных нейронах в ОЛ. Таким образом, результаты этих исследований показали, что астроциты СВЗ дают начало быстро делящимся КП, организующимся в плотные локальные кластеры, и эти КП в последствии дают начало мигрирующим нейробластам. В литературе такие быстро делящиеся КП получили название транзиторноамплифицирующиеся клетки iii , . Здесь важно отметить, что по последним данным именно астроциты СВЗ, отросток которых проникает между клетками эпендимы и имеет непосредственный контакт с полостью желудочка, считаются стволовыми клетками i . Более того, по данным тех же авторов деление астроцитастволовой клетки происходит с миграцией тела клетки в слой эпендимны i . Повидимому, это и объясняет возникновение двух гипотез о месте локализации стволовых клеток в области латеральных желудочков. Рис. Ниша стволовых клеток СВЗ латеральных желудочков мозга. См. Обозначения оранжевым цветом показана СВЗ VУ расположенная между латеральным желудочком ЬУ и стриатумом ВУ кровеносные капилляры ВЬ базальная мембрана А, В, С и Е типы клеток. Рисунок взят из работы ОоесЬ, . Рис. Ниша стволовых клеток СГЗ ЗИ гиппокампа. См. Обозначения ВУ кровеносные капилляры В, О и О типы клеток. Рисунок взят из работы ОобсЬ, . i v, , . Эти цепочки заключены в сеть, образованную астроцитами, отростки которых часто заканчиваются на кровеносных капиллярах vi , i v, . Мигрирующие нейробласты имеют вытянутую форму с ведущим отростком, оканчивающимся конусом роста i v, . Клеточные механизмы, обеспечивающие такую цепочечную миграцию, пока остаются непонятными. Возможно, что полимеризация и деполимеризация микрогрубочек и регулирующие эти процессы белки играют важную роль в продвижении клеток . Роль астрощгтов в процессах миграции нейробластов также остается невыясненной. Астроциты не оказывают влияния на организацию цепочек мигрирующих нейробластов i . . Некоторые исследователи также полагают, что они обеспечивают выживание и направленную миграцию нейробластов v iV, . В противоположность тому, что нейроны ОЛ рождаются в СВЗ, а затем мигрируют на значительное расстояние, нейроны гранулярного слоя ЗИ гиппокампа генерируются в СГЗ, слое между ЗИ и хилусом. Также как и в СВЗ область генерации новых нейронов в СГЗ представлена в виде локальных структурированных клегочных островков ассоциированных с кровеносными капиллярами Рис. . , . Эти островки содержат клетки астроглии, которые простирают свои базальные отростки вдоль пласта клеток СГЗ, а апикальный отросток в слой гранулярных клеток, клеткипредшественники типа, которые экспрессируют маркеры нейрональной дифференцировки и маркеры эндотелиальных клеток, и иммунопозитивиые малодифференцированные нейробласты клетки типа . i . , . Также как и в СВЗ, именно астроциты СГЗ являются первичными предшественниками нейронов. При делении они дают начало КП типа, которые тоже делятся и впоследствии дифференцируются в зрелые гранулярные нейроны ЗИ i . Однако КП типа делятся медленнее, чем транзиториоамилифицирующиеся КП Стипа в СВЗ. Для нейрогеиеза в ЗИ гиппокампа характерно сопряжение процессов генерации новых нервных клеток и постоянного обновления эндотелиальных клеток. Так, по данным Палмера с соавт.