Опухоль-промоторный эффект полициклических ароматических углеводородов (ПАУ)

• Автор: Болотина, Наталья Александровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 84 с. : 19 ил.

Оглавление
Введение

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Механизмы химического канцерогенеза.

1.2.Химические канцерогены окружающей среды.

1.3. Механизмы активации непрямых канцерогенов.

1.4. Стимуляция пролиферации как необходимое звено

опухолевой промоции.

1.5 Митогснный эффект активных форм кислорода.

Гб.Траискрипционный фактор и его роль в

пролиферации опухолевых клеток.

1.7.Межклеточные щелевые коммуникации и их ингибирование
в ходе опухолевой промоции.
1.8. Аионтоз. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Культура клеток.
2.2.роницаемость щелевых контактов.
2.3. Определение уровня БП и БсП в клетках.
2.4. Реакция связывания и АР1 с консенсусным Олигонуклеотидом i ii i , .
2.5.Электрофорез и Иммуноблотинг.
2.6. Транзиторная трансфекция и определение генарепортера.
2.7. Определение влияния Г1АУ на образование АФК в клетках
гепатомы Г.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1.Ингибирование межклеточных щелевых контактов при действии
ПАУ в культуре клеток 2.
3.2.Ингибирование межклеточных щелевых контактов
ПАУ в культуре клеток Г
3.3.Влияние ПАУ на экспрессию белков р и р.
3.4.Влияние ПЛУ на активность кВ.
а. Влияние ПАУ на транскрипционную активность кВ, определяемую методом фанзиторной трансфекции.
б. Влияние ПЛУ на активацию МРкВ, определяемую методом ЕМ8А.
3.5.Влияние ПАУ на активацию АР1.
3.6. Влияние ПАУ на образование ЛФК.
4.0БСУЖДЕНИЕ.
5.ВЫВОДЫ.
6.СГ1ИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
Список сокращений
АФК активные формы кислорода
БаП, БП бензоапирен
БеП бензоепирен
БА бензаантрацен
БаПДЕ бензоапирен7,8диол9,эпоксид
ДДТ дихлордифенилтрихлор.этан
5МЦДЕ 5метилхризеин1,2диол3,4 эпоксид
3МХ 3метилхолантрен
а Ф анафтофлавон
ДМБА 7,диметилбензаантрацен
УФизлучение ултрафиолетовое излучение
АР1 iv i 1, транскрипционный фактор, являющийся димером, содержащим по одному онкобелку от предс тавителей семейства и . ядерный транскрипционный комплекс кВ ГРА отетрадеканоилфорболацетат фактор некроза опухолей альфа
Введение
Актуальность


Непрямые канцерогены проканцерогены исходно биологически инертные вещества и для их превращения в активный канцероген требуется метаболическая трансформация в клетке. Прямые канцерогены в исходной форме реализуют свой канцерогенный потенциал. Кроме того, среди химических канцерогенов выделяют полные и неполные. Полные канцерогены способны индуцировать развитие опухоли без дополнительных воздействий. Неполные индуцируют или стадию инициации инициаторы, или стадию промоции промоторы. Полициклические ароматические углеводороды ПАУ, используемые в нашей работе, являются полными непрямыми канцерогенами. Именно ПАУ наиболее распространенные загрязнители окружающей среды. Эти соединения находятся в выхлопных газах двигателей внутреннего сгорания, в табачном дыме, их выявляют в продуктах питания, подвергшихся термической обработке и пр. Что касается ПАУ, то в первую очередь следует обратить внимание на то, что до настоящего времени исследования по механизму их канцерогенного действия были направлены на изучение инициации, поскольку считалось, что именно эта стадия является определяющей в развитии опухоли при действии непрямых канцерогенов. Попытки применения и разработка новых препаратов, ингибирующих стадию инициации в первую очередь антиоксиданты, ингибиторы свободно радикальных процессов успеха не принесли. Исследования последнего времени дали основания считать, что стадией, определяющей канцерогенность ПАУ, является стадия промоции 1. Поэтому изучение механизмов промоции при действии непрямых канцерогенов является важной и актуальной задачей, дающей в перспективе возможность создания профилактических и лечебных препаратов, препятствующих или замедляющих развитие опухолевою процесса. Цель исследования изучение механизмов опухольпромоторного действия полных канцерогенов на примере ПАУ на модели культуры клеток гепатом. ПАУ и их неканцерогенного аналога на функциональную активность межклеточных щелевых коммуникаций МЩК в культуре клеток гепатом, экспрессирующих и неэкспрессирующих ферменты метаболизма и АЬрецептор. ИЛУ. ПДУ на активацию транскрипционных факторов АР1 iv i 1 и ядерный транскрипционный комплекс кВ. Научная повита работы. В нашей работе впервые использована в качестве сравнительной модели для изучения опухолевой промоции уникальная культура клеток гепатомы Г, в которой отсутствует экспрессия цитохрома Р0 и рецептора. Проведенное сравнительное исследование показало, что наблюдаемые нами эффекты ПЛУ, ассоциированные с промоторной стадией канцерогенеза подавление функциональной активности МЩК, активация транскрипционного фактора обусловлены действием исходной химически инертной молекулой вещества. Мы показали, что эффекты канцерогенных Г1АУ, ассоциированные с промоторной стадией канцерогенеза, в культуре клеток реализуются по нескольким механизмам в зависимости от экспрессии рецептора и изоформ цитохрома Р0 в клеткахмишенях. Впервые продемонстрировано существование ранее неизвестного механизма опухольиромоторного действия канцерогенных АУ. Теоретическая и практическая значимость. Известно, что в химическом канцерогенезе выделяют 3 стадии инициация, промоция и профессия. Стадия инициации химического канцерогенеза для Г1АУ достаточно хорошо изучена, однако в представлениях о стадии промоции, необходимой для дальнейшего выживания инициированной клетки, остается много невыясненных вопросов. Полученные нами данные позволяют ответить на некоторые из них. МЩК, активация некоторых белков, регулирующих клеточную пролиферацию и апоптоз на стадии опухолевой промоции, вызываются исходной биологически инертной молекулой ПАУ, по ранее неизвестному механизму. Полученные данные углубляют существующие представления о механизмах действия ПЛУ, реализующихся на стадии опухолевой промоции. Полученные результаты важны для экспериментальной онкологии, гистологии, биохимии и молекулярной биологии, кроме того, их целесообразно учитывать при разработке новых способов лечения и профилактики онкологических заболеваний.