Особенности экспрессии вирусных антигенов и сборки вирусных частиц в фибробластах и эндотелиальных клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека

• Автор: Ряскина, Светлана Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 101 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления о патогенезе

атеросклероза.

1.2. Вирусная теория атеросклероза

1.3. Цитомегаловирус человека.

1.4. Особенности развития цитомегаловирусной

инфекции в клеточных культурах

1.5. Латентная цитомегаловирусная инфекция

1.6. Особенности иммунного ответа на
цитомегаловирусную инфекцию.
ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Расходные материалы и реактивы.
2.2. Культура эндотелиальных клеток и фибробластов
человека
2.3. Вирусологические исследования
2.4. Иммуноцитохимическое окрашивание.
2.5. Стандартная трансмиссионная электронная
микроскопия.
2.6. ДНК гибридизация i i.
2.7. Совмещение гибридизации i i с электронной
микроскопией
2.8. Полимеразная цепная реакция и электрофорез
ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Идентификация инфицированных ЦМВ
эндотелиальных клеток. Выбор источника ЭК человека
3.2. Цитоиатологические изменения в эндотелиальных клетках при ЦМВ инфекции
3.3. Закономерности экспрессии сверхраннего антигена ЦМВ р в инфицированных эндотелиальных клетках
3.4. Закономерности экспрессии раннего антигена ЦМВ рр в инфицированных эндотелиальных клетках.
3.5. Закономерности экспрессии позднег о антигена ЦМВ в инфицированных эндотелиальных клетках.
3.6. Особенности экспрессии вирусных антигенов в фибробластах, инфицированных эндотелиотропным вирусным штаммом.
3.7. Цитопатологические изменения в культуре
фибробластов при ЦМВ инфекции.
3.8. Закономерности экспрессии сверхраннего антигена ЦМВ р в фибробластах, инфицированных эндотелиотропным штаммом
3.9. Закономерности экспрессии рр и в фибробластах, инфицированных эндотелиотропным штаммом
3 Закономерности экспрессии вирусных антигенов в фибробластах, инфицированных фибробластотропным вирусным штаммом
3 Оценка уровня неспецифического связывания моноклональных антител.
3 Особенности сборки вирусных частиц в клетках,
инфицированных эндотелиотропным или фибробластотропным штаммами
цитомегаловируса человека.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Все больше данных свидетельствует о том, что цитомегаловирусная инфекция может являться наиболее вероятным участником патогенеза атеросклероза i . . , . Еще в х годах, в исследованиях на экспериментальных животных было убедительно доказано, что инфекция вирусами группы герпеса индуцирует в артериях развитие поражений, близко напоминающих атеросклероз у человека ii . i . . В последующие годы накопилось множество данных, подтверждающих взаимосвязь между развитием атеросклероза и ЦМВ. Так, признаки обострения цитомегаловирусной инфекции были обнаружены у подавляющего большинства пациентов с вновь развившимся атеросклерозом коронарных артерий пересаженного сердца , , , . Ускоренное развитие атеросклероза на фоне цитомегаловирусной инфекции было отмечено у больных после операций аортокоронарного шунтирования , i, i . В эпидемиологических исследованиях была выявлена корреляция между степенью утолщения интимы, определенной с помощью ультразвукового исследования, и титром антител к ЦМВ у людей без клинических признаков атеросклероза i . Исследования больных с клиническими проявлениями атеросклероза также показали, что подавляющее большинство больных имеют повышенный титр антител к ЦМВ . Имеются также сведения, что повторный стеноз коронарных артерий чаще развивается у пациентов, имеющих в сыворотке крови антитела к ЦМВ, причем большинство таких пациентов имеют повышенный титр антител . Учитывая, что геном ЦМВ был найден в аорте, коронарных, бедренных и сонных артериях человека i . ix . . ЦМВ может находиться в стенке артерий i . Способность эндотелиальных клеток ЭК быть инфицированными и продуцировать вирус в организме на сегодняшний день не вызывает сомнения. Сосудистый эндотелий является резервуаром латентной цитомегаловирусной инфекции в организме человека . , в связи с чем взаимодействие ЦМВ с ЭК может играть важную роль в генерализации инфекции. Помимо эндотелия, ЦМВ способен продуктивно инфицировать различные типы человеческих клеток фибробласты, гладкомышечные и эпителиальные клетки, а также клетки крови , . Закономерности протекания цитомегаловирусной инфекции в фибробластах хорошо изучены, однако в организме человека эти клетки инфицируются только в случае развития острого процесса, например, при подавлении иммунной системы при трансплантациях. Несмотря на это, сегодняшние представления о биологии ЦМВ базируются на исследованиях не клинических изолятов ЦМВ, а лабораторных штаммов, пассируемых на фибробластах. Известно, что пассирование вируса в фибробластах изменяет его свойства штаммы теряют характерную способность инфицировать ЭК . Чтобы прояснить этот вопрос, было проведено сравнительное изучение закономерностей экспрессии вирусных антигенов в ЭК и фибробластах, инфицированных эндотелиотропным УНЬЕ или фибробластотроптным АО 9 штаммами цитомегаловируса человека. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение процесса развития литической ЦМВ инфекции в эндотелиальных клетках и фибробластах человека с использованием эндотелиотропного штамма УНЬЕ, сохраняющего клеточный тропизм клинического изолята. Отработать методы оценки развития литической инфекции различных типов клеток человека, основанные на выявлении сверхранних, ранних и поздних антигенов ЦМВ. Исследовать закономерности развертывания цитомегаловирусной инфекции в культуре эндотелия и фибробластов человека, инфицированных эндотелиотропным вирусом штамм УНЬЕ и выявить возможные отличия от фибробластотропных вариантов цитомегаловируса. Провести сравнительное изучение закономерностей сборки вирусных частиц в эндотелиальных клетках и фибробластах, инфицированных эндотелиотропным УНЬЕ или фибробластотропным АО 9 штаммами цитомегаловируса человека. Научная новизна и практическая значимость работы.