Адгезивные белки поверхности клеток сетчатки глаза позвоночных : Свойства и биологические эффекты

• Автор: Краснов, Михаил Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 183 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I. Особенности строения и межклеточного взаимодействия

в сетчатке позвоночных

II. Адгезивные белки, обнаруженные в сетчатке позвоночных

II. 1. Семейство кадгеринов

II.2. Суперсемейство иммуноглобулинов

И.З. Суперсемейство интегринов

III Адгезивные молекулы в пигментном эпителии сетчатки

IV. Особенности структуры адгезивных молекул

V. Молекулы внеклеточного матрикса
VI. Белки интерфоторецепторного матрикса
VII. Кальцийсвязывающие нейроспецифические регуляторные белки 0 белки и их гомологи
VIII. Маркерные молекулы дифференцировки клеток
сетчатки и пигментного эпителия
IX. Основные подходы и модели для идентификации адгезивных
молекул
X. Модели культивирования тканей сетчатки и пигментного эпителия глаза
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Используемые реактивы и оборудование
1. Получение тканевых экстрактов
2. Получение фракций белков
3. Изоэлектрмрокусирование тканевых экстрактов
4. Определение концентрации белка
5. Высокоэффективная жидкостная хроматография
6. Определение углеводного состава исследуемых фракций
7. Определение вторичной структуры с помощью метода
кругового дихроизма
8. Определение кальцийсвязывающей активности методом равновесного микродистиза
9. Электрофорез белков в полиакриламидном геле
. Определение аминокислотного состава исследуемых белков И. Определение влияния исследуемых гликопротеинов па
вязкоупругие свойства мембран гепатоцитов мыши при кратковременном органном культивировании i vi
. Исследование клеточной агрегации в
суспензионных культурах
. Получение поликлональной кроличьей антисыворотки
. Иммуноферментный анализ антител i
. Изолирование тканей глаза и их культивирование
. Культивирование нейральной сетчатки
. Использование специфических маркеров основных
клеточных типов сетчатки и иммуногистохимия
. Гистохимическое окрашивание культивированных эксплантатов сетчатки тритона для определения
активности ацетилхопинэстеразы
. Морфологическое исследование
. Количественные исследования
. Иммуногистохимичесое окрашивание с использованием меченых вторых антител
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В зависимости от участия ионов кальция молекулярные механизмы клеточной адгезии разделяют на Сазависимый и 2независимый. Классификация на гомофил ьный и гетерофильный механизмы адгезии отражает участие во взаимодействии между клетками одинаковых или различающихся адгезивных молекул . i, . Многие адгезивные белки сетчатки идентифицированы, изучена их первичная структура, локализация в ткани, выделены и изучены кодирующие их гены i, , i, V, . В тканях нейрального происхождения, к которым относятся ПЭС и нейральная сетчатка, адгезивные межклеточные взаимодействия связаны с процессами сигнальной трансдукции, опосредующими основную функцию этих тканей проведение нервного импульса i, . Сигнальная трансдукция в сетчатке может включать связывание лигандов с рецепторами ионных каналов, что в свою очередь приводит к изменениям в их открытии и закрытии. Это меняет мембранный потенциал клеток. Так происходит, например, в случае ацетилхолиновой трансмиссии , , . С другой стороны, связывание лиганда может приводить к стимуляции энзиматической активности его рецептора или модуляции трансдукционных белков, например белков. Основными энзиматическими модуляторами в нервной ткани явяляются сериновые, треониновые и тирозиновые киназы и фосфотазы , , 9, которые, в свою очередь, запускают каскады внутриклеточных реакций, приводящих к регуляции процессов на уровне генов , i, i . , i, . Клеточная адгезия осуществляется в нейральной сетчатке взаимодействием по типу клетка клетка. В сетчатке глаза, как и в мозге, с помощью электронномикроскопической техники не удалось обнаружить каркасной структуры внеклеточного матрикса ВМ i, . И только применение иммунохимических методов способствовало идентификации ряда белков ВМ в межклеточном пространстве этих тканей i, . Повидимому, ВМ в тканях нервной системы существует, но не представляет собой высокоупорядоченной надмолекулярной структуры, свойственной, например, соединительной и эпителиальной тканям i, V, . Адгезивные белки, обнаруженные в сетчатке позвоночных. Архитектоника в нейральной сетчатке и ПЭС поддерживается благодаря белкам адгезии, которые могут быть как трансмембранными, так и секреторными внеклеточными i, V, . i, V, , . Ниже коротко расмотрены каждое из указанных семейств в отдельности. П.1. Семейство кадгсринов. Кадгерины представляют собой суперсемейство адгезивных белков, опосредующих Са2зависимый гомофилический механизм клеточной адгезии в нервной и других тканях позвоночных , . Эти белки являются компонентами специализированных ультраструктур межклеточных контактов десмосом. Последние представлены во многих тканях, и особенно широко в эпителии, где они входят в состав специальной области клеточной поверхности, называемой контактным комплексом , . Кадгерины являются трансмембранными белками и имеют 5 чередующихся аминокислотных фрагментов, которые не похожи по последовательности iподобные домены, но имеют схожий с ними размер Рис. Са i, , , . Р и у катенинов. Благодаря этому кадгерины могут бьггь вовлечены в процессы регуляторной трансдукции , . В настоящее время обнаружено около различных типов кадгеринов , Р, , Е, Т, В, 7 и др. , . При развитии сетчатки каждый из этих типов в течение ретинотектального синаптогенеза экспрессируется в определенной очередности ivi . Экспрессия кадгеринов в развитии сетчатки возможно регулируется различным уровнем фосфоршшрования, за счег работы киназ и фосфотаз . . Различные кадгерины экспрессируются в различных типах клеток нейральной сетчатки . . Молекулы кадгеринов имеют не только несколько сайтов для связывания ионов кальция, но и потенциальные сайты для гликозилирования i, , . П.2. Суперсемейство иммуноглобулинов. . x ii iii .