Получение и характеристика сублиний клеток К562, резистентных к модуляторам процессов дифференцировки

• Автор: Чекмасова, Алена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Петрозаводск
• Количество страниц: 137 с.

СОДЕРЖАНИЕ

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫП

ГЛАВА 1. Взаимосвязь между индуцированной дифференцировкой и резистентностью клеток опухолевых линий к различным химическим соединениям
ГЛАВА 2. Взаимосвязь между изменением экспрессии генов и белков, контролирующих апоптоз, и резистентностью клеток опухолевых линий к различным антиопухолевым агентам
ГЛАВА 3. Молекулярные механизмы резистентности клеток опухолевых линий к химиотерапевтическим препаратам.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .

РЕЗУЛЬТА ТЫ ИССЛЕДОВА НИЯ

, Биологическая активность ряда структурноразличных ксенобиотиков по отношению к клешам родительской линии К2.
1.1. Влияние индукторов эритроидной дифференцировки тимидина, бутирата натрия и ДМСО на клетки К
1.2. Влияние ингибиторов эритроидной дифференцировки ФМА, дексаметазона и Л7 на клетки К
1.3.Влияние индукторов эритроидной дифференцировки в сочетании с ФМА, дексаметазоном и А7 на клетки К
2. Биологическая активность ряда структурноразличных ксенобиотиков по отношению к меткам сублинии К2ИОО.
2.1. Анализ чувствительности клеток КО к различным классам цитостатиков, по сравнению с клетками родительской линии
2.2. Влияние индукторов эритроидной дифференцировки тимидина, бутирата натрия и ДМСО на клетки К2ТХ0.
2.3. Влияние ингибиторов эритроидной дифференцировки дексаметазона и А7 на клетки К2ЛХ
2.4. Влияние тимидина в комбинации с дексаметазоном и А7 на клетки К2ЛХ
3. Биологическая активность ряда структурноразличных ксенобиотиков по отношению к клеткам сублинии КУ0О.
3.1.Анализ чувствительности клеток КЫ к различным классам цитостатиков по сравнению с клетками родительской линии
3.2. Влияние индукторов эритроидной дифференцировки тимидина, бугирата натрия и ДМСО на клетки К2А0О
3.3. Влияние ингибиторов эритроидной дифференцировки дексаметазола и ФМА на клетки КМОО
3.4. Влияние тимидина в комбинации с дексаметазоном и ФМА на клетки ККдО.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТА ТО В
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Выводы.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Определить способность клеток КС0 и К0 подвергаться химическииидуцированной дифференцировке под действием исследуемых индукторов и их комбинаций, по сравнению с клетками родительской линии. На основе данных по токсичности изучаемых соединений, определить уровни фрагментации ДНК в клетках сублиний и родительской линии при действии эритроидиых и мислоидных индукторов, используемых отдельно и в сочетании. Установить взаимосвязь между резистентностью клеток К0О и ККР0 и способностью подвергаться дифференцировке иили апоптозу. Научная новизна Впервые экспериментально получены сублинии клеток К2, резистентные к диметиламиностирилхинолин1оксиду К2ТрО и 4нитрохинолин1оксиду КЫОО, и охарактеризованы по способности подвергаться индуцированной эритроидной дифференцировке иили апоптозу в ответ на различные химические реагенты, по сравнению с клетками родительской линии К2. Установлено, что при обработке клеток сублиний К2ЛХ0 и тимидиыом и бутиратом натрия но не ДМСО имеет место более выраженная индукция эритроидной дифференцировки, по сравнению с клетками родительской линии. В клетках родительской линии К2 и сублинии КЫСЮ после инкубации с тимидином и бутиратом натрия регистрируется фрагментация ДНК, в отличие от клеток КС0. Показано, что обработка клеток К2ОрО и дексаметазоном, ФМА и А7 не приводит к значимому подавлению эритроидной дифференцировки, по сравнению с клетками родительской линии. Однако, клетки К0 являются резистентными к апоптотической индукции после обработки А7, в отличие от клеток родительской линии. При обработке клеток сублинии К2ЛХ0 тимидином в комбинации с дексаметазоном А7 значимая модуляция эритроидной дифференцировки не сопровождается апоптозом, в отличие от родительских клеток К2. Инкубация клеток ККтрО с тимидином в сочетании с ФМА Иех не приводит к достоверному изменению эритроидной дифференцировки или апоптоза, по сравнению с клетками родительской линии. Теоретическая и практическая значимость работы заключается в изучении с использованием модельной системы резистентности клеток опухолевых линий и их способности подвергаться индуцированной дифференцировке иили апоптозу под действием различных индукторов, используемых отдельно и в сочетании. Известно, что клетки опухолей и опухолевых линий могут приобретать повышенную резистентность к целому ряду соединений, многие из которых используются в клинике как противоопухолевые агенты. В связи с этим, показано, что при обработке полученных нами сублиний клеток К и К2МЫ0 дифференцирующее и апоптогенное действие используемых химических реагентов является более выраженным, но сравнению с аналогичными вариантами обработки клеток родительской линии. Таким образом, развитие резистентности клеток опухолей и опухолевых линий к некоторым химическим соединениям и противоопухолевым препаратам может привести к изменению процессов дифференцировки иили апоптоза, что в дальнейшем может быть использовано как альтернативный терапевтический подход в преодолении фенотипа МЛУ. ГЛАВА 1. Обработка клеток большого числа постоянных линий, в том числе опухолевых, некоторыми химическими иили биологическими агентами от органических растворителей до ростовых факторов i vi приводит к появлению фенотипических признаков дифферешшровки ii . При этом изменяется морфология клеток, наблюдается v экспрессия ядерных, цитоплазматических и мембранных белков специфической дифференцировки, снижается или подавляется пролиферация клеток , , Ix . Это обстоятельство формально сближает индуцированную дифференцировку клеток опухолевых линий и таковую нормальных клеток. Сходство наблюдаемых эффектов нормальной дифференцировки клеток i viv и индуцированной дифференцировки клеток опухолевых линий i vi предполагает наличие общих, контролирующих этот процесс механизмов, в том числе, активацию одного и тою же набора транскрипционных факторов. К числу соединений, обладающих дифференцирующей активностью, относятся жирные кислоты и их соли бутират натрия i . ДМСО i, , , активаторы и ингибиторы внутриклеточных протеинкиназ форболмиристатацетаг ФМА, стауроспорин i, i, . Анисимов и др. ДНКтропныс агенты этидий бромид, актиномицин О i, i, и другие.