Роль эндометриальных белков и клеток-продуцентов в репродукции человека

• Автор: Болтовская, Марина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 244 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение.

1. Обзор литературы

1.1 Роль эндометриальных белков в системе мать плацента плод

1.2 Структурная характеристика, регуляция синтеза и АМГФ

1.3 ДМГФ как маркер функциональной активности эндометрия

1.4 АМГФ как показатель мужской репродуктивной функции

1.5 Структурная характеристика, регуляция и функция ПАМГ

1.6 Биолоппсская роль ПАМГ во время беременности

1.7 Общие принципы создания гибридом

2. Общая характеристика материалов и методов исследовании
2.1 Животные и клеточные линии
2 2 Среды, реагенты, расходуемые материалы для получения и
культивирования гибридом
2.3 Гибридомная биотехнология
2.3.1 Протоколы иммунизации
2.3.2 Гибридизация клеток
2.3.3 Мониторинг первичных гнбридомных культур.
2.3.4 Твердофазный иммуноферментный анализ для скрининга гибридом и
характеристики моноклональных антител.
2.3.5 Клонирование гибридом методом предельных разведений
в жидкой фазе.
2.3.6. Культивирование стабильных линий гибридом i vi и i viv.
2.3.7 Крноконсервация гибридных клеток.
2.4 Кариотипнческнн анализ гибридом.
2.5 Клиническая характеристика обследованных групп
2.6 Твердофазный иммуноферментный анализ для количественного определения эндометриальных белков в биологических жидкостях
2.7 Иммуногнстохимическое выявление эндометриальных белков в тканях репродуктивной системы человека.
2.8 Спсрмнологнческий анализ эякулята.
2.9 Статистическая обработка.
3. Результаты собственных исследований и обсуждение
3.1 Получение гибридом и характеристика моноклональных антител. Тест
системы для количественного определения ПАМГ и АМГФ
3.2 Иммуноморфологнчсское исследование экспрессии ПАМГ в течение
беременности.
3.3. Иммуноморфологическая локализация АМГФ в эндометрии, децидуальной
оболочке, фаллопиевых трубах и семенных пузырьках
3.4 Определение физиологической гсстационной динамики ПАМГ и АМГФ с помощью моноклональных антител.
3.5 Уровень ПАМГ в материнской сыворотке как показатель патологии
3.6 Значение количественного определения АМГФ для вспомогательных репродуктивных технологий
3.6.1 Сывороточные показатели АМГФ для прогнозирования наступления и ранней диагностики беременности в программах экстракорпорачьною оплодотворения
3.6 2 Уровень АМГФ в семенной плазме как прогностический критерий эффективности экстракорпорального оплодотворения
3.7 Содержание АМГФ в семенной плазме мужчин с нарушением репродуктивной функции .
Заключение
Список литературы


Эндометрий является основной тканьюмишенью для стероидных гормонов яичника эстраднола, стимулирующего пролиферацию сгромальных и железистых клеток в фолликулярной фазе менструального цикла, и прогестерона, вызывающего секреторную трансформацию эндометрия в лютеиновой фазе Отсутствие циклической перестройки эндометрия характерно для ановуляторного цикла, а задержка дифференцировкн наблюдается у женщин с недостаточностью лютеиновой фазы и у женщин с не установленной причиной бесплодия Пструннн и др. Частота недостаточности лютсиновой фаты среди причин бесплодия составляет до ,2. При определении содержания прогестерона в крови и исследовании биоптатов может быть явное несоответствие между уровнем гормона и выраженностью секреторных изменений эндометрия. Нормальная коннсиграция прогестерона во второй фазе цикла не является гарантией полноценной фазы секреции, т. Поэтому для постановки диагноза недостаточности лютсиновой фазы необходима биопсия эндометрия, проводимая за 23 дня до начала менструации Бодяжина и др. Возможно лечение недостаточности лютсиновой фазы препаратами, стимулирующими овуляцию, или прогестероном. Однако чтобы установить, скорректирована ли недостаточность лютенновой фазы, необходимо последующее проведение биопсии. К сожалению, это не всегда оказывается возможным, поскольку изза дискомфорта, связанного с взятием образца ткани, женщины часто избегают повторной процедуры . В связи с этим вполне оправдан поиск адекватных биохимических показателей функционального состояния эндометрия, которые можно было бы определять многократно в динамике во время менструального цикла иили беременности. В ряде работ, выполненных с использованием методов гистохимии, иммуногистохимии и морфометрии, было показано, что при бесплодии уменьшается секреторная активность эндометриальных желез i . i . Очевидно, эго должно проявляться в изменении содержания растворимых продуктов эндометрия в биологических жидкостях, что и определяет сферу поиска маркера функциональной активности ткани. Эксперименты с органными культурами эндометрия, взятого на разных стадиях цикла, и измерение количества АМГФ в гомогенатах ткани показали, что белок нс продуцируется пролиферирующим эндометрием, а синтезируется только в секреторной фазе цикла етрунин и др. i Тканевая концентрация РРАМГФ последовательно возрастает с 0. . . РРАМГФ синтезируется и секрстнрустся только эпителием желез, но не стромальными клетками эндометрия . В случае наступления беременности синтез РР АМГФ продолжается, и содержание его в децидуальной ткани в первом триместре достигает 4 общего белка . x , . . Кроме того, важной функцией РРАМГФ в начале беременности, когда плацента только формируется и отсутствует плацентарная циркуляция, может быть транспорт гидрофобных молекул, необходимых для эмбрионального развития, из тканевого окружения . Таким образом, процесс подготовки эндометрия к имплантации и развитию оплодотворенной яйцеклетки включает активацию синтеза иммуносупрессорного белкааналога АМГФ, который можно рассматривать как один из маркеров рецептивности репродукгмвной ткани i, , . Содержание РРАМГФ в амниотической жидкости резко меняется в течение беременности. По данным i с соавторами, на 8 неделях уровень белка составляет в среднем всего нгмл. Начиная с недели беременности, концентрация АМГФ быстро увеличивается, значительно опережая рост концентрации других белков амниотической жидкости, в частности, альбумина Количество АМГФ достигает пика на неделе максимум мкгмл, в срслнсм ,0 мкгмл и несколько снижается к неделе беременности 7, мкгмл. Таким образом, между и неделями беременности концентрация белка в амниотической жидкости увеличивается в 0 раз. Такое резкое увеличение содержания АМГФ в амниотической жидкости обусловлено анатомическими изменениями плодных оболочек, происходящими в эти гсстационныс сроки облитерацией внеэмбрнональной полости и соединением амниона с хорионом, так что единственным барьером между децидуальной оболочкой и амниотической полостью становится хориоамнион. Авторы замечают, что, учитывая иммуносупрессорные свойства АМГФ.