Цитотоксическое и апоптогенное действие индукторов дифференцировки клеток линии К562

• Автор: Волкова, Татьяна Олеговна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Петрозаводск
• Количество страниц: 143 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Принятые сокращения

Введение

Обзор литературы

1. Индукция дифференцировки клеток опухолевых линий

в условиях обработки химическими реагентами

И. Влияние дифференцирующих агентов на экспрессию некоторых белковых факторов, вовлеченных в индукцию или подавление апоптоза

III. Влияние дифференцирующих агентов на чувствительность

клеток опухолевых линий к НЦТлизису ЕКК

IV. Возможные механизмы модуляции литического действия ЕКК на клетки опухолевых линий дифференцирующими
агентами
Собственные исследования
Материалы и методы исследования
Результаты исследования
1. Пролиферация и жизнеспособность клеток К2 в условиях обработки рядом химических реагентов
1.1. Влияние тимядина, бутирата натрия и ДМСО на уровень пролиферации и жизнеспособность клеток К2
1.2. Влияние сочетанного действия тимидина, бутирата натрия с ДМСО на уровень пролиферации и
жизнеспособность клеток К
1.3. Влияние форболмиристатацетата ФМА на
уровень пролиферации и жизнеспособность клеток К2
1.4. Влияние производных ряда хинолина и пиридина на
уровень пролиферации и жизнеспособность клеток К2
1.5. Влияние сочетанного действия тимидина, бутирата натрия, ДМСО с ФМА на уровень пролиферации и
жизнеспособность клеток К2
1.6. Влияние сочетанного действия бутирата натрия и ДМСО на фоне ФМА на уровень пролиферации и жизнеспособность клеток К2
1.7. Влияние производных ряда хинолина на фоне индукторов эритроидной дифференцировки тимидина, бутирата натрия и ДМСО на уровень пролиферации и
жизнеспособность клеток К2
2. Индукцияподавление синтеза гемоглобина в клетках К2, обработанных рядом химических реагентов
2.1. Влияние тимидина, бутирата натрия и ДМСО на изменение базального уровня синтеза
гемоглобина в клетках К2
2.2. Влияние сочетанного действия индукторов эритроидной дифференцировки тимидина, бутирата натрия и ДМСО на изменение концентрации гемоглобина
в клетках К
2.3. Влияние ФМА и дексаметазона на изменение базального
уровня синтеза гемоглобина в клетках К
2.4. Влияние производных ряда хинолина и пиридина на изменение базального уровня синтеза гемоглобина
в клетках К
2.5. Влияние сочетанной обработки тимидином, бутиратом натрия, ДМСО с ФМА на изменение концентрации
гемоглобина в клетках К
2.6. Влияние бутирата натрия и ДМСО в комбинации с ФМА на изменение концентрации гемоглобина
в клетках К2 4
2.7. Влияние сочетанного действия индукторов эритроидной дифференцировки тимидина, бутирата натрия и ДМСО и производных ряда хинолина на изменение
концентрации гемоглобина в клетках К2
3. Индукцияингибирование фрагментации ядерной ДНК в
клетках К2, обработанных рядом ксенобиотиков
3.1 Влияние тимидина, бутирата натрия и ДМСО на индукцию фрагментации ДНК и концентрацию никотинамидных
коферментов в клетках К
3.2. Влияние ФМА и дексаметазона на индукцию фрагментации ДНК и концентрацию никотинамидных коферментов
в клетках К2
3.3 Влияние производных ряда хинолина и пиридина на индукцию фрагментации ДНК и концентрацию никотинамидных коферментов в клетках К
3.4. Влияние тимидина, бутирата натрия и ДМСО в комбинации с ФМА и дексаметазоном на индукцию фрагментации
ДНК в клетках К
3.5. Влияние кальциевого ионофора А7 на фоне тимидина, бутирата натрия и ДМСО на индукцию фрагментации
ДНК в клетках К
4. Модуляция чувствительности клеток К2 к неспсцифическому цнтотоксическому лизису лейкоцитами человека и крыс под влиянием индукторов дифференцировки
4.1. Влияние тимидина, бутирата натрия и ДМСО на фойе ФМА на изменение чувствительности клеток К2 к
НЦТлизису спленоцитами крыс
4.2. Влияние тимидина, бутирата натрия и ДМСО на фоне ФМА на изменение чувствительности клеток К2 к НЦТлизису лейкоцитами периферической крови человека
Обсуждение результатов
Заключение
Выводы
Список использованной литературы


Изучено дифференцирующее и алоптогенное действие ряда известных , 2, , 2, 4, и новосинтезированных , производных хинолина и пиридина, обладающих высокой способностью связываться с ароматическими гетероциклами, включая азотистые основания нуклеиновых кислот, нуклеозидами, нуклеотидами и ДНК установлено, что наиболее сильный апоптогенный эффект в опухолевых клетках имеет место при обработке реагентами, способными к наибольшему связыванию с ДНК по данным определения УФспектров, при этом дифференцирующая активность исследуемых ксенобиотиков может отсутствовать. Теоретическая и практическая значимость работы заключается в изучении с использованием модельной системы сочетанного действия индукторов различных путей дифференцировки опухолевых клеток на ряд важнейших клеточных функций , в том числе чувствительность к НЦТлизису эндогенными ЕКК. Значительное количество антиопухолевых соединений обладают дифференцирующей активностью по отношению к клеткам опухолей i viv и опухолевых линий i vi, проявляющуюся в зависимости от дозы используемого реагента и условий обработки. В связи с этим, нами показано, что при сочетанной обработке опухолевых клеток, в частности, клеток линии К2, индукторами эритроидной и миелоидной дифференцировки может наблюдаться как снижение, так и увеличение чувствительности клеток к НЦТлизису ЕКК. Таким образом, при клиническом использовании комбинаций антиопухолевых агентов необходимо учитывать эффекты модуляции клеточных функций, в частности, чувствительности к литическому действию ЕКК, возникающие под действием или на фоне каждого составляющего комбинации. При обработке клеток опухолевых линий i vi некоторыми агентами возникает сложная цепь событий, приводящая к фенотипическому созреванию или дифференцировке клеток. С нормально протекающим процессом дифференцировки в клетках и тканях организма человека и животных i viv диффсрснцировочные процессы, индуцированные или протекающие спонтанно в культуре опухолевых клеток, роднят два обстоятельства снижение или подавление пролиферации клеток и появление морфологических и биохимических признаков дифференцированных клеток той или иной гистогенетической линии. Примерами могут служить экспрессия иммуноглобулинов класса М в клетках линий человеческих ВХЛЛ при обработке активатором протенкиназы С ПКС форболмиристатацетатом ФМА . К2 и в индуцированных вирусом лейкоза Френд мышиных эритролейкемических клетках в условиях инкубации с гемином, диметилсульфоксидом ДМСО, бутиратом натрия и другими соединениями v . Вместе с тем, инкубация клеток К2 с ФМА приводит к подавлению базального уровня синтеза гемоглобина и гликофорина А и появлению маркеров мегакариоцитарных иили моноцитомакрофагальных клеток . С другой стороны, ФМА, а также синтетический глюкокортикоид дексамегазон ингибируют проявление эритроидной дифференцировки клеток К2 и , соответственно индуцированной упомянутыми выше агентами, а также 1арабинофуранозилцитозином . Линии, имеющие другое гистогенетическос происхождение, при индукции диффсрснцировки i vi также демонстрируют свойства того клеточного типа, из которого они произошли. Например, ФМА способен опосредовать плазмацитомную дифференцировку Вклеточных лимфомных линий, несущих 8транслокацию i . II, обработанные индукторами дифференцировки, показывают, помимо остановки клеточного деления, пониженную грануляцию, потерю ядрышек, повышенную плавучую плотность, усиление активности Рнафтилбутиратэстеразы и продукцию суиероксидных радикалов О2 ii . В данном случае дифференцировка запускалась целым рядом индукторов ДМСО, Ыб,дибутирилцАМФ, 1,дагидроксивитамином 3, ФМА, а также простагландином Ег и теофиллином. Обработка клеток ретиноевой кислотой приводит к высвобождению в инкубационную среду низкомолекулярного фактора, способного вызывать дифференцировку исходных оеток в гранулоциты Нуриева, . Этот фактор глугаминовая кислота резко снижает аффинитет связывания интерлейкина1 и способствует увеличению числа связывающих сайтов для опухоленекротизирующего фактора 3 . Интересно, что клетки не имеют специфических глутаматсвязывающих сайтов Нуриева, , следовательно действие указанного фактора дифференцировки опосредуется через гормональную регуляцию роста клеток линии . Соединения, запускающие указанные процессы в опухолевых клетках, индукторы дифференцировки, могут быть как биологического происхождения трансформирующий ростовой фактор р i . ДНК афидиколин . ДМСО, бутират натрия, гсксамстиленбисацетамид и другие . Различия в структуре индутегоров обусловливают и различия в механизме действия на клетки.