Регуляция NA+,K+-атфазы при активации лимфоцитов человека

• Автор: Карицкая, Инна Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 131 с.

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Ионный гомеостаз и ионный гетерогенитет

эукариотической клетки.

1.2. Системы активного ионного транспорта, сопряженного с

гидролизом ЛТФ.

1.3. Системы вторичного активного транспорта.

1.4. Иа,К АТФазная транспортная система.

1.4.1. Структура натриевого насоса.

1.4.2. Принципы функционирования ,КАТФазы и ее роль в клетке.

1.5. Регуляция активности Ыа,КАТФазы

1.5.1. Механизмы кратковременной регуляции.
1.5.2. Механизмы долговременной регуляции
1.6. Изменение транспорта ионов и их роль в запуске пролиферативного ответа лимфоцитов человека. Значение Ыа,КАТФазы в процессах пролиферации и трансдукции сигнала в клетках разного типа.
1.7. Особенности пролиферативного ответа нормальных лимфоцитов человека
1.7.1. Активация Тклеточного рецептора
1.7.2. Активация рецептора ИЛ2 и запуск ,1ак8ТАТсигналыюго пути
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Выделение и культивирование лимфоцитов периферической крови человека.
2.2. Схемы активации лимфоцитов.
2.3. Обработка клеток ингибиторами
2.4. Культивирование клеток постоянных клеточных линий
2.5. Получение тотальных клеточных лизатов и лизатов мембранных фракций
2.6. Антитела.
2.7. Электрофорез и иммуноблотинг.
2.8. Измерение входных потоков рубидия
2.9. Оценка пролиферативного ответа лимфоцитов
2 Оценка экспрессии высокоаффинного рецептора ИЛ2.
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Изменение входных потоков рубидия при переходе
нормальных лимфоцитов периферической крови человека,
стимулированных митогенами, из состояния покоя к пролиферации.
3.2. Внутриклеточное содержание натрия и уровень входных
потоков рубидия в активированных лимфоцитах
3.3. Динамика экспрессии а 1субъединицы Ка,1САТФазы по ходу пролиферативного ответа ФГАстимулированных лимфоцитов.
3.4. Динамика экспрессии а 1субъединицы КАТФазы по ходу пролиферативного ответа лимфоцитов, стимулированных форболовым эфиром и иономицином
3.5. Влияние ингибиторов транскрипции и трансляции на экспрессию КаКАТФазы
3.6. Экспрессия асубъединицы ,КАТФазы в активированных лимфоцитах является циклоспорин А зависимым процессом
3.7. Экспрессия а 1субъединицы ЫаКАТФазы лимфоцитов при стимуляции экзогенным ИЛ
3.8. В долговременной регуляции экспрессии и функциональной активности ,КАТФазы участвуют и МАРкиназные пути
Глава 4. Обсуждение результатов.
Глава 5. Выводы
Список литературы


Природа связанных с клеточным циклом изменений транспортной активности натриевого насоса не изучена. Не известно, может ли нарастание численности мембранных ионтранспортирующих комплексов быть следствием рекрутирования готовых Иа,КАТФазных комплексов в мембрану из внутриклеточных компартментов, или это нарастание контролируется на уровне транскрипции и синтеза белковых субъединиц, входящих в состав натриевого насоса. Для понимания роли ионных изменений, обусловленных работой натриевого насоса по ходу клеточного цикла, представляется важным выяснить природу механизмов, которые контролируют уровень потоков через плазматическую мембрану, и исследовать возможность участия сигнальных путей, инициируемых при активации рецепторов ростовых факторов и цитокинов, в регуляции систем ионного транспорта. Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось изучение механизмов, обеспечивающих долговременное изменение транспортной активности натриевого насоса при развертывании пролиферативного ответа лимфоцитов периферической крови человека. АТФазы с ИЛ2зависимой стадией пролиферации нормальных лимфоцитов человека выявление сигнальных путей, контролирующих экспрессию ,КАТФазы при запуске клеточной пролиферации и связанное с этим исследование статуса фосфорилирования транскрипционных факторов 3 и 5 и протеинкиназ в активированных лимфоцитах человека. Глава 1. Обзор литературы. Ионный гомеостаз и ионный гетероген итет эукариотической клетки. Распределение и движение ионов между внутриклеточной и внеклеточной средой, связанные с ними электрогенные процессы и регуляция водного баланса составляют важную сторону функционирования клетки и контролируются филогенетически консервативными механизмами. У всех эукариотических животных клеток эти механизмы едины Веренинов, Марахова, . Во внешней среде, окружающей клетку, электролиты в основном представлены неорганическими ионами и СГ. Неорганические ионы К, 2, Са2 и составляют большую часть клеточных катионов, из них приходится на и К. Неорганических анионов в клетке относительно мало, их дефицит покрывается органическими анионами, среди которых преобладают фосфаты , . Неорганические ионы принимают участие во многих внутриклеточных процессах. Например, кальций является важным звеном проведения сигнала в клетке, магний выполняет роль кофактора во многих ферментных системах. Однако, если бы значение неорганических ионов сводилось только к роли специфических лигандов, то для клетки было бы важным поддерживать независимый от изменений внеклеточной среды постоянный состав внутриклеточных электролитов. В действительности, для клеток жизненно важен не только ионный гомеостаз постоянство электролитного состава клетки, но и ионный гетерогенитет вполне определенные, резко выраженные различия ионного состава внутриклеточной и внешней среды. Веренинов, Марахова, . В поддержании ионного гомеостаза и гетерогенитета клетки главную роль играют системы переноса ионов плазматической мембраны, которые принято подразделять на ионные каналы и ионные транспортеры. Ионные каналы обеспечивают движение ионов по градиенту концентрации за счет разности электрохимических потенциалов между клеткой и внешней средой. К ионным транспортерам относят насосы или помпы, обеспечивающие активный транспорт против градиента концентраций за счет энергии химической реакции, и ионтранспортирующие системы, в которых активный транспорт совершается в результате сопряжения разных ионных потоков за счет снижения электрохимических потенциалов для одних ионов повышается разность концентрационных градиентов для других. Системы активного ионного транспорта, сопряженного с гидролизом АТФ. ОДКАТФазная система натриевый насос является главной транспортной системой клетки, обеспечивающей низкую концентрацию Иа во внутриклеточной среде за счет сопряжения потока Ыа с химической реакцией. Перепад электрохимического потенциала Ыа между внутриклеточной и внешней средой является энергетическим источником, обеспечивающим работу ионных каналов плазматической мембраны и систем вторичного активного транспорта других ионов, аминокислот, сахаров и иных метаболитов.