Клеточные механизмы репарации тканевых повреждений

• Автор: Васильев, Андрей Валентинович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 302 с. : ил.

1.1. Культивирование кератиноцитов . .

1.2. Дифференцировка кератиноцитов . . . . .

1.3. Эпителиальномезенхимные отношения

1.4. Факторы роста

1.5. Стволовые клетки эпидермиса

1.6. Процесс восстановления кожного покрова . . . .

1.7. Трансплантация выращенных в культуре кератиноцитов . .

1.8. Реконструкция кожного покрова

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава 3. МОДЕЛИРОВАНИЕ МЕХАНИЗМОВ РАНЕВОГО

ЗАЖИВЛЕНИЯ I VI.

3.1. Закономерности культивирования эпидермальных
кератиноцитов кожи человека
3.2.Миграция колоний эпидермальных кератиноцитов в культуре .
3.3. Взаимодействие эпидермальных кератиноцитов и
фибробластов в живом эквиваленте кожи i vi . . .
3.4. Разработка модели регенерации эпидермиса i vi и
изучение клеточных сублопуляций кератиноцитов . . .
3.5. Заключение . . . . . . . . .
Глава 4. ВОССТАНОВЛЕНИЕ КОЖНЫХ ПОКРОВОВ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АЛЛОГЕННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ.
4.1. Разработка метода культивирования и трансплантации
клеток кожи на поверхности микроносителей . . . .
4.2. Клиническая оценка эффективности применения модифицированного дермального эквивалента . . .
4.3. Применение выращенных аллогенных эпидермальных
пластов для реконструкции кожных покровов . . . .
4.4. Иммуногистохимическое исследование механизмов репарации ран под влиянием аллогенных эпидермальных трансплантатов . . . . . . . .
4.5. Заключение .
Глава 5 ВОССТАНОВЛЕНИЕ ДЕФЕКТОВ РОГОВИЦЫ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АЛЛОГЕННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ТРАНСПЛАНТАТОВ.
5.1. Изучение возможностей культивирования клеток эпителия роговицы
различных животных.
5.2 Сравнительные результаты динамики заживления ожогового дефекта
роговицы при трансплантации СЭ в ранние сроки после травмы.
5.3. Сравнительные результаты динамики заживления при трансплантации СЭ на сформировавшуюся десцеметоцеле
и язву роговицы
5.4. Морфологическое изучение репарации ожогового дефекта роговицы после трансплантации стромального эквивалента
5.5. Иммуногистохимическое изучение реларативной регенерации ожогового дефекта роговицы после трансплантации стромального эквивалента
5.6. Обсуждение результатов иммуногистохимического
анализа
5.7.Эффективность применения клеточных трансплантатов
в лечениии больных с дефектами роговицы различной этиологии.
ГЛАВА 6 РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ОБЪЕМНЫХ ТКАНЕВЫХ ДЕФЕКТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖИВОГО
ЭКВИВАЛЕНТА КОЖИ на примере гортани
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРЫ.
ВВЕДЕНИЕ


Эпителиальномезенхимные отношения проявляются также i vi и влияют на поведение кератиноцитов и формирование культуры. Рейнвальд и Грин i и , использовали фибробласты в качестве фидерных клеток для создания специфического микроокружения и поддержания жизнеспособности кератиноцитов. Позднее было показано, что фибробласты могут продуцировать различные факторы, в частности фактор роста кератиноцитов , обладающий высокой митогенной активностью, специфичной к эпителиальным клеткам и играющий важную роль в регуляции пролиферации кератиноцитов i . Этот фактор относится к семейству фактороз роста фибробластов и является паракринным эффектором кератиноцитов i . Однако взаимодействие фибробластов и кератиноцитов не ограничивается только продукцией . Фибробласты продуцируют также фактор рассеивания клеток , который стимулирует и модулирует пролиферацию эпителиальных клеток . Имеющиеся данные показывают, что фидерные клетки могут откладывать
внеклеточный матрикс, за счет которого создается микроокружение, необходимое для роста и функционирования клеток. Так было показано, что хорошее прикрепление и рост кератиноцитов обеспечивает внеклеточный матрикс, отложенный клетками эндотелия роговицы ii . Фибробласты в культуре синтезируют в значительном количестве фибронектин и гепарансульфат протеогликан, а также в меньшем количестве ламинин, нидоген, тенасцин и хондроитин4сульфат протеогликан. Эти компоненты откладываются в виде упорядоченного матрикса вдоль треков миграции фибробластов . Клетки i ЗТЗ продуцируют и откладывают на подложку цепи проколлагена 1IV и а2 IV i . Фибробласты человека также активно синтезируют коллаген i . Известно, что кератиноциты лучше прикрепляются к коллагену IV типа, характерному для базальных мембран . При изучении адгезии кератиноцитов новорожденных крыс было найдено, что миллипоровые фильтры, покрытые коллагеном IV типа, обеспечивают значительно лучшее прикрепление клеток, чем при использовании коллагена I типа . Эти данные согласуются с результатами другого исследования, в котором было обнаружено, что кератиноциты морской свинки также лучше прикрепляются к коллагену IV типа . Оказалось, что добавление аскорбиновой кислоты усиливало прикрепление кератиноцитов к коллагену I типа за счет усиления продукции коллагена IV типа непосредственно кератиноцитами . Компоненты внеклеточного матрикса могут оказывать действие на прикрепление и пролиферацию кератиноцитов в субоптимальных условиях. Так, при выращивании кератиноцитов человека в отсутствии и экстракта гипофиза, фибронектин и коллаген IV типа обеспечивали более высокий уровень включения меченого тимидина и прироста числа клеток по сравнению с выращиванием кератиноцитов на пластике. Еще одной функцией внеклеточного матрикса может быть компартментализация факторов роста и сохранение их биологической активности . Vv . В частности, базальные мембраны компартментализуют основной фактор роста фибробластов . В связи с этим можно отметить, что рост кератиноцитов в присутствии фидерных клеток ЗТЗ оказывается в 0 раз более устойчивым к действию , чем при культивировании без фидерных клеток. Причина этого явления, возможно, заключается в том, что фидерные клетки почти полностью разрушают и удаляют связанный с подложкой и таким образом обеспечивают рост кератиноцитов i . Роль фидерных клеток может заключаться и в синтезе необходимых цитокинов. Ямазаки и сотрудники i . ЗТЗ. Влияние фидерных клеток осуществляется и в результате прямого межклеточного контакта. Так, было показано i . Приведенные данные позволяют заключить, что фидерные клетки могут оказывать многофакторное воздействие на выращиваемые кератиноциты, создавая для них необходимое микроокружение за счет продукции внеклеточного матрикса и факторов роста. Очевидно, что поведение кератиноцитов в описанной системе определяют сложные эпителиальномезенхимные отношения, проявляющиеся как на уровне паракринных взаимодействий, так и на уровне взаимодействия с внеклеточным матриксом. Важным паракринным эффектором является фактор роста кератиноцитов, который синтезируется фибробластами i viv и i vi i .