Роль кортикального актина в регуляции натриевых каналов в клетках К562

• Автор: Шумилина, Екатерина Вадимовна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 95 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений Введение

Обзор литературы

1. Влияние цитоплазматического натрия на активность сигнальных систем в клетке

2. Механизмы пассивного транспорта натрия в невозбудимых клетках

2.1. Натриевые каналы реабсорбирующих эпителиев

2.2. Потенциалнезависимые натриевые каналы в клетках

неэпителиального происхождения

3. Актиновые филаменты и клеточный кортекс

3.1. Структура и полимеризация актина

3.2. Семейство кэпирующих белков

3.3. кофилин
3.4. Г ельзолин
3.5. Белки, связывающие глобулярный актин
3.6. Комплекс Агр2
3.7. Белки семейства
3.8. белки и актиновый цитоскелет
3.8.1. Структурнофункциональная организация белков
3.8.2. белки семейства регуляция и роль в реорганизации актинового цитоскелета
3.8.3. Передача сигнала от белков на акгиновый цитоскелет 3.9. Модель регулируемой полимеризации актина
ЗЛО. Связь примембранного актинового цитоскелета с клеточной поверхностью
4. Роль цитоскелета в регуляции ионзранспортируюгцих белков плазматической мембраны
4.1. Пространственная локализация ионтранспортирующих белков
4.2. Модуляция активности ионных каналов
Материалы и методы
1. Клеточная культура
2. Электрофизиология
3. Растворы
4. Белки
5. Полимеризация актина
6. Обработка результатов
Результаты
1. Влияние цитохалазинов Д и Б на активность натриевых каналов в
экспериментах на изолированном мембранном фрагменте
2. Влияние Оактина на активность натриевых каналов
2.1. Влияние различных видов актина на активность натриевых каналов
3. Рефляция активности натриевых каналов при участии кэнирующего белка
4. Влияние активаторов вбелков на активность натриевых каналов
4.1. Влияние вактина на активность натриевых каналов,
вызванную действием ОТРуБ
4.2. Блокирующее действие фаллоидина
4.3. Эксперименты с ОТРуБ и Саактином
Обсуждение
1. Регуляция натриевых каналов клеток К2 роль микрофиламентов
2. Кэпирование актиновых филаментов вовлечено в регуляцию
активности натриевых каналов
3. Обелки модулируют активность натриевых каналов посредством
перестроек в системе микрофиламентов
Выводы
Список литературы


Действие широкого спектра гормонов, медиаторов, биологическиактивных соединений и вторичных мессенджеров сопряжено с входом ионов натрия в цитозоль из наружной среды, что влечет за собой изменение потенциала покоя клетки i, , кальциевого баланса i, ii, i . , i, v . i . v . , i, , vi, . Среди известных на данный момент систем транспорта важную роль играют ионные каналы. В настоящее время детально исследованы потенциалзависимые натриевые каналы, отвечающие за генерацию и проведение нервного импульса i, , и потенциалнезависимые амилоридчувствительные натриевые каналы абсорбирующих эпителиев . Потенциалнезависимые натриевые каналы были также описаны в клетках неэпителиального происхождения, таких как гладкомышечные клетки V , i, и макрофаги крысы v, Viv, , лимфоциты i, , , , и клетки миелоидной лейкемии человека v . v . Ведерникова и др. , i, и улитки ii . В настоящее время формируются общие представления о суперсемействе натрийпроводящих каналов, биофизические характеристики которых, варьируют в достаточно широких пределах. Эти представления развиваются также на основе молекулярнобиологических исследований, в которых обнаружена генетическая общность интегральных белков, обладающих свойствами катионных каналов в клетках и организмах далеких в филогенетическом отношении от дегенеринов и механочувствительных каналов круглых червей до эпителиальных натриевых каналов почек млекопитающих , . Согласно современным представлениям, одной из важнейших клеточных систем, структурно и функционально связанных с работой ионных каналов плазматической мембраны эукариотических клеток, является кортикальный цитоскелет. Ряд работ свидетельствует, что белки нитоскелета могут не только определять пространственную локализацию каналов в плазматической мембране, но и непосредственно модулировать их кинетические характеристики i . vi . v . Другим не менее важным фактором регуляции ионных каналов плазматической мембраны являются ГТФсвязывающие белки белки. С года, когда впервые было обнаружено, что белки могут непосредственно взаимодействовать с ионными каналами i . Тем не менее, для широкого круга невозбудимых тканей в том числе клеток крови механизмы пассивного транспорта натрия остаются малоизученными. Поэтому представляет интерес исследование роли цитоскелета и белков в регуляции натриевых каналов в клетках хронической миелоидной лейкемии человека К2, по своим свойствам являющихся аналогами стволовых клеток мультииотентных предшественников миелоидного ряда клеток крови. Цель настоящей работы заключалась в изучении роли актинового цитоскелета и белков в регуляции активности натриевых каналов плазматической мембраны клеток хронической миелоидной лейкемии человека К2. Определить возможность участия Обелков в регуляции натриевых каналов. К2. Впервые в опытах на изолированном фрагменте мембраны показано, что активность потенциалнезависимых натриевых каналов в клетках К2 зависит от состояния кортикального актинового цитоскелета. Вероятность нахождения каналов в открытом состоянии увеличивается при фрагментации актиновых филаментов, ассоциированных с мембраной. Глобулярный актин в условиях, способствующих его быстрой полимеризации, приводит к инактивации натриевых токов. Впервые показано, что предварительно полимеризованные филаменты актина, независимо от их длины, не приводят к подавлению активности каналов. Впервые продемонстрировано, что именно полимеризация актина является решающим фактором, определяющим инактивацию каналов. Приоритетными являются данные по влиянию актинсвязывающего копирующего белка Сар2 на активность каналов. Впервые получены результаты, демонстрирующие участие вбелков в регуляции активности натриевых каналов и позволяющие объяснить механизм их действия.