Система метаболической регуляции транспорта слабых органических анионов в клетках проксимальных канальцев почки

• Автор: Никифоров, Анатолий Александрович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 178 с. : ил.

Оглавление
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика ПКП

1.2 Методы исследования механизмов секреции СОА в ПКП

1.3. Этапы секреции СОА в ПКП

1.4. Кинетические аспекты транспорта СОА в ПКП

1.5. Зависимость транспорта СОА от энергетического метаболизма

1.6. Влияние физикохимических факторов на транспорт СОА

1.7. Механизмы сопряжения транспорта СОА с энергетическим

метаболизмом клеток ПКП

Часть 2. Материалы и Методы
2.1. Регистрация накопления флуоресцсина в ПКП
2.1.1. Почка лягушки
2.1.2. Почка крысы
2.1.2.1. Метаболически активные канальцы
2.1.2.2. Метаболически неактивные канальцы
2.1 3. Определение концентрации флуоресцсина, накопленного в ПКП
2.2. Определение степени восстановленности митохондриальных
пиридин нуклеотидов
2.3. Оценка состояния клеток ПКП в срезах коры почки крысы
2.4. Определение содержания метаболитов в ПКП крысы
2.4.1. Получение суспензии фра ментов коры почки крысы
2.4.2. Измерение концентрации метаболитов.
2.5. Регистрация потребления кислорода суспензией фрагментов коры
почки крысы
2.6. Оценка жизнеспособност и фрагментов коры почки крысы
2.7. Статистическая обработка и воспроизводимость результатов.
2.8. Реактивы
Часть 3. Результаты и Обсуждение
3.1. Роль ,КАТФазы в метаболической регуляции транспорта СОА
3.1.1. Влияние ацетата на Мазависимое накопление флуоресцеина
в ПКП лягушки
3.1.2. Влияние ацетата на Ыанезависимое накопление флуоресцеина
в ПКП крысы
3.1.3. Влияние этанола на накопление флуоресцеина в ПКП крысы
3.1.4. Влияние ионов кадмия на накопление флуоресцеина
в ПКП лягушки и крысы
3.1.5. Влияние сукцината на накопление флуоресцеина в ПКП крысы
роль редокссостояния митохондрий
3.2 Роль редокспотенциала цитоплазмы в регуляции транспорта СОА
в ПКП крысы
3.2.1. Влияние ингибиторов ГНГ на эффекты лактата и пирувата
на накопление флуоресцеина .
3.2.2. Влияние ингибиторов ГНГ на базальное накопление флуоресцеина
3 2 3 Влияние ингибиторов ГНГ на стимуляторный эффект ионов кадмия
на базальное накопление флуоресцеина
3.2.4 Влияние ингибиторов ГНГ на эффект этанола на накопление флуоресцеина
3.3. Роль внутриклеточног о КГ в регуляции транспорта СОА в ПКП крысы
3.3.1. Влияние ингибиторов аспартатаминотрансферазы на базальное накопление флуоресцеина
3.3.2. Влияние пент4еновой кислоты на базальное накопление флуоресцеина
3.3.3. Влияние вальпроата на накопление флуоресцеина
3.3.4 Влияние интермедиатов ЦТК на накопление флуоресцеина
3.3.5. Влияние ингибиторов ГНГ на накопление флуоресцеина
в среде с низким содержание Ма
Часть 4. Заключение
4.1. Регуляторные факторы клеточного метаболизма
4.2. Зависимость транспорта СОА от аденилагного статуса клетки
4.3. Роль редокспотенциала цитоплазмы в регуляции транспорта СОА
4 4 Роль субстратных взаимопревращений в регуляции транспорта СОА
Выводы
Список литерату


Методы исследования работы системы транспорта СОА в 1ГКП i vi имеют почти такую же историю, как и методы работы i viv. В г. А.Ричардс и ДжБарнуэл i, , сообщили об успешном применении целой изолированной почки лягушки для наблюдения за прохождением анионного красителя ФК из омывающей среды в просвет канальцев. В работах Р Чэмберса с сотр , , , , был описан метод визуальной оценки накопления ФК в культуре ткани мезонефроса куриных эмбрионов и почки эмбрионов человека. Отмстим, что визуальный контроль имеет особую важность в случае переноса веществ через клеточный слой, поскольку дает возможность определить характер распределения накопленного вещества между разными компартментами гистологических структур. Большой прогресс в изучении компартментализации СОА в ПКП достигнут в последние голы с помощью метода компьютерного анализа изображений, полученных при эпифлуоресцентной и лазерной конфокальной микроскопии с использованием флуоресцеина в качестве маркерного транспортного субстрата обзор i, i, . Широкое распространение методы работы i vi с использованием ФК получили после работы Р Фостера , , в которой использовались срезы почечной ткани пойкилотермиых животных и фрагменты изолированных канальцев почек некоторых рыб Просвет Г1КП, изолированных из почек костистых рыб , , . i, , а также в тонких срезах почки лягушки , и в кусочках почки золотой рыбки i, ii, замкнуг на краях канальцев. Поэтому накопление СОА в препаратах почек пойкилотермных животных суспензия фрагментов ПКП, тонкие и толстые срезы почки, изолированная почка i vi аналогично процессу секреции, происходящей i viv. В г. СОА исследовали на тонких срезах коры почек млекопитающих , , , . Такие срезы были метаболически активны, как это следовало из данных о стимуляции потребления кислорода субсгратами окисления, и аккумулировали СОА из среды против градиента концентрации. Работу Р. Кросса и Дж Тагарта , , можно назвать классической, т. СОЛ и в срезах коры почки млекопитающих , v, , однако более подробное морфологическое исследование процесса накопления было проведено с помощью метода ауторадиографии с использованием меченого ПАТ , , , i, В цитированных работах были выявлены и недостатки метода с использованием срезов коры почки млекопитающих, связанные с влиянием толщины срезов на уровень накопления ПАТ. Транспорг СОА исследуется также на суспензии ПКП, изолированных из коркового вещества почки I, , . Поскольку соединительная ткань в почках млекопитающих не является столь же рыхлой, как у таких пойкилотермных животных, как змеи и костистые рыбы, фрагменты канальцев обычно получают, обрабатывая ткань коллагеназой. Изолированные канальцы метаболически активны, аккумулируют ПАТ против градиента концентрации содержание , К и воды, а также инулиновое внеклеточное пространство, не отличаются от таковых для срезов коры почки , , . Впоследствии эта методика была усовершенствована в направлении полного исключения дистальных сегментов из получаемой суспензии . Vi , . i . i , , , . В последние годы появились работы, выполненные на идентифицированных сегментах ПКП, полученных с помощью микродиссекции без предварительной обработки ткани коллагеназой . . По мнению Мерти и Фоулкса , , , суспензия изолированных ПКП более адекватно, чем срезы, моделирует i vi процесс почечной секреции СОА, поскольку в изолированных канальцах перенос через апикальную мембрану не лимитирован и транспорт осуществляется через клеточный слой. Главным преимуществом изолированных канальцев перед срезами являегся обеспечение равных условий доставки кислорода и растворенных в инкубационной среде веществ. Известны отдельные работы v, . СОА исследовали в суспензии изолированных клеток ПКП.