Репаративный остеогенез при ксенотрансплантации пренатальных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток и хондробластов человека

• Автор: Фатхудинов, Тимур Хайсамудинович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : 57 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.
ВВЕДЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. История изучения репаративного остеогенеза.

2.2. Методы стимуляции репаративного остеогенеза

2.3. Культивирование мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток

2.4. Культивирование хондробластов

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Получение культуры пренатальных мультипотентных мезенхимальных клеток стромы костного мозга
3.2. Получение культуры пренатальных хондробластов
3.3. Методики характеристики фенотипа полученных культур клеток
3.4. Экспериментальное исследование.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Характеристика фенотипа полученных культур клеток
4.1.1. Культура мультипотентных мезенхимальных клеток стромы костного мозга
4.1.2. Культура хондробластов.
4.2. Результаты экспериментального исследования.
4.2.1. Десятые сутки наблюдения.
4.2.2. Тридцатые сутки наблюдения.
4.2.3. Шестидесятые сутки наблюдения
4.2.4. Девяностые сутки наблюдения.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


На ранних стадиях регенерации трубчатых костей хрящевая ткань составляет основную часть костной мозоли, вызывая при этом эктопический остеогенез в месте дефекта. Однако в то время автор считал, что в условиях недостаточного кровоснабжения происходит трансформация временной хрящевой ткани в костную без предварительной резорбции хрящевой ткани, то есть хрящевые клетки могут дифференцироваться в остеобласты так называемое метахондральиое окостенение . Полежаев Л. В. в сериях опытов на мышах, крысах, собаках , , Матвеева А. И. в серии опытов на собаках описали и доказали способность костных опилок, перемешанных с кровью, вызывать регенерацию дефектов костей свода черепа с утраченной регенерационной способностью. Студитский А. Н. на модели регенерата длинной трубчатой кости, развивавшегося после полной субпериосталыюй резекции диафиза регенерационное вторичное формообразование, установил, что новообразованная костная структура копирует по форме и структуре утраченную среднюю часть диафиза . . Таким образом, автор показал, что индукционная активность эпифиза может обеспечить частичную регенерацию диафиза даже при его удалении вместе с периостом и эндостом. Эпифиз в данном случае играет роль индуцирующей системы, вызывающей развитие метафиза и прилежащей части диафиза. Теоретическим фундаментом современных представлений о регенерации ткани в норме и патологии является учение о стволовой клетке. Основы его были заложены еще в начале XX века . . Максимовым. Им было выдвинуто положение о том, что костная ткань может при определенных условиях образовываться в любом месте организма в соединительнотканных прослойках органов, поскольку там есть клетки мезенхимального происхождения, обладающие потенциями к остеогенной дифференцировке . Однако только в е годы прошлого века благодаря работам А. Я. Фриденштейна и его школы, И. Л. Черткова и его школы в России, М. в Англии, М. vi 1 были получены основные доказательства существования во взрослом организме стволовых клеток в строме костного мозга, которые могут дифференцироваться в различные ткани мезенхимального происхождения, такие как кость, хрящ, мышечная, жировая и другие ткани 6. Классическими работами А. Я. Фриденштейна и его школы было доказано, что одним из источников мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток является костный мозг. Болсс того, в лабораторных условиях была получена культура этих клеток, которые стали называть колониеобразующими единицами фибробластов КОЕф 6, , что послужило началом второго этапа изучения гистогенеза кости. Основным методом, позволяющим изучать свойства мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, является клонирование их i vi. Основы методики клонирования были разработаны А. Я. Фриденштейном. Исследования по изучению КОЕф авторы проводили по нескольким направлениям. С одной стороны, количественно и качественно изучали содержание колониеобразующих клеток в костном мозге, их фенотип, поведение, остеогенные свойства i vi 2, 4, 9, , . Кроме того, большое количество работ коллектива посвящено изучению в эксперименте репарагивного остеогенеза при трансплантации клеток , , , . Клетки трансплантировали в виде суспензии, на различных носителях, в диффузионных камерах орто или гетеротопически. Было выявлено, что КОЕф в зависимости от микроокружения или факторов индукции могут дифференцироваться в остеобласты и хондробласты, формировать костную или хрящевую ткань , , . Остеогенные свойства полученной культуры также были изучены в ряде клинических исследований, которые продемонстрировали высокую клиническую эффективность клеточных трансплантаций. Костная ткань взрослого организма обладает высокой регенерационной способностью, благодаря которой даже обширные повреждения костей скелета могут успешно восстанавливаться. Однако в ряде клинических ситуаций, после тяжелых травм, при врожденных дефектах кости, при дегенеративных заболеваниях тканей опорнодвигателыюго аппарата для полноценного восстановления структуры и функции костного органа возникает необходимость в стимуляции репаративных процессов. В основе этих состояний лежит т.