Изменение водного и ионного баланса клеток U937 при апоптозе, вызванном этопозидом и стауроспорином

• Автор: Широкова, Анна Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 80 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Общая схема запуска и развития апоптоза

Дегидратация клеток при апоптозе .

Изменение при апоптозе внутриклеточного

содержания и концентрации К .

Изменение при апоптозе внутриклеточного

содержания и концентрации а

Изменение при апоптозе внутриклеточного

содержания и концентрации С1 и Р.

Изменение при апоптозе внутриклеточного
Изменение при апоптозе разности электрических
потенциалов на клеточной мембране
Механизмы изменения внутриклеточного ионного состава.
ЫаКГ насос.
КГ каналы .
Ка каналы.
Другие тракты
Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ,
Клеточные культуры
Индукция апоптоза
Определение внутриклеточного содержания
воды по плавучей плотности клеток
Определение внутриклеточного содержания К Ыа и ЯЬ.
Измерение потоков ВЬ через насос и каналы.
Измерение скорости выхода Ь.
Определение внутриклеточного содержания хлора
Микроскопия, морфометрия и проточная цитометрия .
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Апоптоз, вызванный стауроспорином, сопровождается дегидратацией
Плавучая плотность клеток при апоптозе, вызванном стауроспорином.
Ионный состав клеток при апоптозе, вызванном стауроспорином.
Уабаинчувствительный и уабаинрезистентный потоки ЯУ
при апптозе, вызванном стауроспорином
Апоптоз, вызванный этопозидом, не сопровождается их дегидратацией
Плавучая плотность клеток при апоптозе, вызванном этопозидом.
Ионный состав клеток при апоптозе, вызванном этопозидом
Уабаинчувствительный и уабаинрезистентный потоки ЯУ
при апоптозе, вызванном этопозидом.
Морфологические изменения при апоптозе, вызванном стауроспорином и
этопозидом
Микроскопия
Морфометрия
Проточная цитометрия.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ


СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. ВВЕДЕНИЕ . Дегидратация клеток при апоптозе . К . С1 и Р. Механизмы изменения внутриклеточного ионного состава. ЫаКГ насос. КГ каналы . Ка каналы. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Определение внутриклеточного содержания К Ыа и ЯЬ. Измерение потоков ВЬ через насос и каналы. Измерение скорости выхода Ь. Микроскопия, морфометрия и проточная цитометрия . Плавучая плотность клеток при апоптозе, вызванном стауроспорином. Ионный состав клеток при апоптозе, вызванном стауроспорином. Плавучая плотность клеток при апоптозе, вызванном этопозидом. Проточная цитометрия. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ. Апоптоз программируемая гибель клеток, естественный процесс, предназначенный для элиминации поврежденных клеток, либо клеток не нужных по программе индивидуального развития организма. Неспособность клеток подвергаться апоптозу одна из причин возникновения опухолей. Апоптоз может быть вызван как эндогенными, так и экзогенными факторами и отличается от некроза по ряду признаков. Важнейший из них в функциональном плане отсутствие воспалительной реакции соседних клеток на продукты распада. Характерные признаки апоптоза утрата межклеточных контактов, блеббинг, дегидратационное сжатие клеток, разрушение цитоскелета, фрагментация ядер, конденсация хроматина, деградация ДНК см. , , ii, , . Сокращение объема клеток исторически рассматривалось как главный признак апоптоза, отличающий его от некроза. Апоптоз определялся как i i Кегт, . Заключение об уменьшении объема клеток ранее делали на основании микроскопии фиксированных гистологических препаратов. В настоящее время апоптоз изучают во многих случаях на живых клетках, и вывод о сокращении размеров клеток обычно основан на измерениях малоуглового светорассеяния при проточной цитометрии, хотя этот метод нельзя считать строгим. Апоптозное снижение объема клеток i V , V связывают с их дегидратацией . . . Широко распространено представление, что выход внутриклеточного является важным фактором, сопровождающим, а по мнению многих исследователей и обуславливающим апоптоз см. , ii, , i, , . Ряд исследователей считает, что изменение внутриклеточной концентрации К при апоптозе изменяет состояние каспаз и нуклеаз . , ii, . К во внутриклеточной воде. Представлялось актуальным исследовать этот вопрос, используя наиболее чувствительный в настоящее время метод определения внутриклеточного содержания воды путем измерения плавучей плотности клеток в градиенте Перколла и технику эксперимента, позволяющую анализировать содержания ионов в отдельных плотностных фракциях. Такой подход ранее не применялся. Актуальным представлялось также исследование изменений баланса моновалентных ионов при апоптозе, не сопровождающемся дегидратацией, то есть таком, который по нашим наблюдениям имеет место при апоптозе клеток 1Л7, вызываемом этопозидом. Предполагалось, что изучение изменений ионного баланса, не сопровождающихся нарушением водного баланса, даст более широкую картину участия в апоптозе основных систем переноса моновалентных ионов через клеточную мембрану. Цели н задачи исследования. Цель данной работы сравнительное исследование изменения ионного и водного баланса клеток 7 при апоптозе, вызванном стауроспорином, когда по предварительным наблюдениям имела место дегидратация клеток, и при апоптозе, вызванном этопозидом, когда водный баланс не изменялся. Путем измерения плавучей плотности клеток и7 определить наличие или отсутствие дегидратации при апоптозе, вызванном стауроспорином и этопозидом. С помощью эмиссионного и радиоизотопного анализа определить внутриклеточное содержание К , Ыат и СГ и измерить потоки Шэ через клеточную мембрану клеток 7 при апоптозе, вызванном стауроспорином и этопозидом. Для диагностики аноптоза провести проточную цитометрию и флуоресцентную микроскопию клеток.