Клетки-мишени фактора стволовых клеток во внутренних органах человека в ходе онтогенеза

• Автор: Калигин, Максим Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 102 с. : 40 ил.

1. ВЕДЕНИЕ

2.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Фактор стволовых клеток и его рецептор СКк.

2.2 Биологические эффекты БСРСКк взаимодействия.

2.2.1. Участие БСРСКк взаимодействия в кровотворении

2.2.2. Участие БСРСКН взаимодействия в нейрогенезе

2.2.3 Другие БСРСКк взаимодействия

2.3. Развитие нервной системы.

2.3.1 Источники развития нервной системы

2.3.2. Развитие клеток центральной нервной системы

2.3.3.Миграция клеток нервного гребня.

2.4. Дифференцированные клетки экспрссирующие Скк интерстициальные клетки Кахаля ИКК
2.4.1 Классификация интерстициальных клеток Кахаля
2.4.2. Интерстициальные клетки Кахаля вне кишки.
2.4.3. Морфологические и фенотипические признаки клеток Кахаля
2.4.4. Происхождение клеток Кахаля
2.5 Гистогенез стенки кишечной трубки пищеварительной системы.
2.6. Развитие поджелудочной железы
2.6.1. Анатомия и физиология поджелудочной железы.
2.6.2 Гистогненез поджелудочной железы
2.7 Регенерация поджелудочной железы
2.7.1 Возможность регенерации.
2.7.2 Клеточные источники регенерации Рклеток
2.7.3 Маркеры предшественников рклеток.
2.7.4 Скк маркер стволовых клеток поджелудочной железы .
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Объекты исследования.
3.2. Методы исследования
3.2.1. Депарафинирование и регидратация парафиновых срезов.
3.2.2. Окрашивание гематоксилинэозином
3.2.3. Иммуногисгохимия и реакция гибридизации i i.
3.2.3.1 Окрашивание срезов
эмбрионов, поджелудочной железы плодов и детей
человека антителами против инсулина и аГМА .
3.2.3.2 Окрашивание срезов эмбрионов, внутренних органов плодов и поджелудочной железы детей человека
антителами против i и глюкагона.
3.2.3.3 Двойное иммуногистохимнческое окрашивание парафиновых срезов эмбрионов,
поджелудочной железы плодов и детей человека.
3.2.3.4 Реакция i i гибридизации.
3.2.3.5 Окрашивание парафиновых срезов эмбрионов, внутренних органов плодов и поджелудочной
железы детей человека
антителами против i с использованием
метода амплификации с тирамидбнотином .
3.3 Морфометрия
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Экспрессия i
в ходе внутриутробного развития органов человека
4.1.1 Экспрессия i в клетках нервной системы
эмбрионов человека.
4.1.2 Экспрессия i в клетках развивающейся
кишечной трубки эмбрионов и плодов человека.
4.1.3 Экспрессия i в клетках печени эмбрионов человека
4.1.4 Экспрессия i в клетках сердца эмбрионов человека
4.1.5. Экспрессия i в клетках поджелудочной железы
4.2. Экспрессия инсулина и глюкагона в поджелудочной железе эмбрионов,
плодов и детей человека
4.3. Экспрессия мРНК к проинсулину
в поджелудочной железе эмбрионов человека
4.4 Результаты двойного иммуногистохимического окрашивания поджелудочной железы эмбрионов, плодов и детей человека антителами против i и инсулина, i и глюкагона,
инсулина и глюкагона.
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
6. ВЫВОДЫ.
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
8. БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ТБС физиологический раствор, забуференный Трис буфером
1НС центральная нервная система
ПНС периферическая нервная систмеа
ГМК гладко мышечная клетка
ДИК дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК рибонуклеиновая кислота
мРНК матричная рибонуклеиновая кислота
ИКК интерстициальные клетки Кахаля iii I
ИККАС интерстициальные клетки Кахаля в Аурбаховом сплетении I i x
ИККЦСК интерстициальные клетки Кахаля в циркулярном слое тонкой кишки x
ИККСЕП септальные интерстициальные клетки Кахаля I i ivii I
ИККВМ внутримышечные интерстициальные клетки Кахаля i I II
ИККПС интерстициальные клетки Кахаля подслизистого слоя I i ii I
ИККММ межмышечные интерстициальные клетки Кахаля i I I
i iii система катализированная сигнальная амплифицированная
iii кластер дифференцировки
i эпидермальный фактор роста
I фактор роста гепатоцитов
i i i рецептор белка тирозинакиназы
фактор стволовой клетки
рецептор к фактору стволовой клетки
фактор роста тучных клеток
ii спинномозговой ганглий
i iiv ii колонии образующими клетками с высокой пролиферативной активностью i а глакждомышечный актин ГМА
ii рецептор нейрокининов
X i x 1 панкреатический и дуоденальный домашний домен
ii ii специфический фактор транскрипции поджелудочной железы
тетрапептидная последовательность аминокислот глицин, аспарагин, аспарагин, К лизин
1. ВВЕДЕНИЕ
АКТУАЛЬНОСТЬ


Впервые у человека иммуиогистохимическими методами установлен источник развития популяций Сккпозитивных клеток в производных нейроэктодермы, Сккпозитивных предшественников клеток Кахаля из производных нейроэктодермы и Сккпозитивных предшественников инсулоцитов поджелудочной железы из производных энтодермы, а также основные этапы их дальнейшей дифференцировки. Обнаружена транзиторная экспрессия Скк в клеткахпредшественницах различных диффероиов в ходе органогенеза внутренних органов человека печени, желез желудка, эпителия протоков поджелудочной железы, эндотелия сосудов сердца. Выявлено, что рецептор к фактору стволовых клеток является наиболее оптимальным маркером клетокпредшсственниц инсулоцитов, поскольку именно после начала экспрессии Скк клетками эпителия протоков поджелудочной железы начинается развитие е эндокринной части. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Сккпозитивных предшественников клеток Кахаля из производных нервного гребня, а также этапы миграции и внедрение этих клеток в стенку кишечной трубки. Поскольку клетки Кахаля являются пейсмейкерами, то есть участвуют в контроле сокращения ГМК. Установлено, что региональными стволовыми клетками поджелудочной железы являются клетки эпителия протоков, а рецептор к фактору стволовых клеток Оки может служить для выявления этих клеток. Данные исследования способствуют расширению представлений об этапах развития кишечной трубки и поджелудочной железы. Полученные результаты о развитии Скйпозитивных клеток поджелудочной железы могут быть использованы для дальнейшего изучения региональных стволовых клеток поджелудочной железы. То, что Скй является трансмембранным рецептором, позволяет разработать способы выделения этих клеток, что открывает перспективы для новых методов лечения сахарного диабета I типа путем трансплантации Скйпозитивных клеток поджелудочной железы. Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования Скй в кишке и поджелудочной железе можно оценивать регенеративную способность этих органов при различных патологиях, а также дифференцировать эти патологии с новообразованиями. ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Иммуногистохимическая оценка закономерностей экспрессии рецептора к фактору стволовых клеток в тканях кишечной трубки и инсулоцитах поджелудочной железы успешно внедрена в практику ГМУ Детская республиканская клиническая больница г. Казань, МУЗ Городская клиническая больница 7 г. Казань для оценки регенерации стенки кишечной грубки и эндокринной части поджелудочной железы, для дифференциальной диагностики патологических изменений этих органов с новообразованиями, выбора метода лечения и прогнозирования исхода заболеваний. КГМУ, включены в учебный процесс на кафедрах нормальной анатомии человека и гистологии КГМУ. По результатам исследования опубликовано работ. Экспрессия i у человека является фенотипическим признаком ряда клеток нейроэктодермы и их предшественниц клеток нервной системы, интерстициальных клеток Кахаля, меланоцитов, а в клетках печени, эпителия желудка, эпителия протоков поджелудочной железы, эндотелия сосудов сердца i является маркером только коммитированных клетокпредшественниц на определенных сроках пренатального развития. А и Вклеткн поджелудочной железы человека имеют общую коммитировапиую клсткупрсдшествеииицу, которая экспрессирует рецептор к фактору стволовых клеток. ЛИЧНЫЙ ВКЛАД СОИСКАТЕЛЯ. Приведенные в работе данные получены при личном участии соискателя на всех этапах работы. Соискателем составлен план, поставлены задачи, определены этапы исследования. Автор провел подбор и анализ литературы. Им лично проведены забор материала и его последующая заливка в парафин, нарезаны парафиновые срезы. В ходе исследования соискатель провел 8 иммуногистохимических окрашиваний срезов, с которых им было получено 6 фотофафий, лично разработал экспериментальные подходы в проведении двойных иммуногистохимических исследований и реакции гибридизации i i. Статистическая обработка, сопоставление полученных результатов с данными литературы, оформление, публикации результатов исследования, формулирование выводов и рекомендаций принадлежат автору.