Секретируемые протеазы некоторых мицелиальных грибов: выделение, очистка и характеристика физико-химических и функциональных свойств

• Автор: Матвеева, Анжелика Рафиковна
• Шифр специальности: 03.00.24, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 106 с. : ил.

Содержание

Список сокращений

Введение

Глава 1 Литературный обзор

1.1 Свойства и классификация протеолитических ферментов

1.1.1 Сериновые протеиназы

1.1.2 Аспартильные протеиназы

1.1.3 Металлопротеиназы

1.1.4 Цистсиновые протеиназы

1.2 Влияние условий культивирования на секрецию протеаз

1.3 Грибы рода i

, ,1.3.1 Антракноз, вызываемый представителями рода i
1.3.2 Микогсрбицидная активность некоторых видов рода i
1.4 Роль секретирусмых протеаз патогенных 1рибов в инфекционном
процессе
1.4.1 Участие секретируемых протеиназ патогенных грибов в инфекционном процессе у животных и человека
1.4.2 Участие секретируемых протеиназ патогенных грибов в инфекционном процессе у растений.
1.5 Использование протеаз
1.6 Выделение протеаз
Глава 2 Материалы и методы
Глава 3 Результаты и обсуждение
3.1 Изучение роста колоний грибов i и . ii на твердых средах и в погруженной культуре
3.1.1 Изучение роста колоний i на твердых средах
3.1.1.1 Рост изолятов .iii на твердых средах
3.1.1.2 Рост изолятов . на твердых средах
3.1.1.3 Рост изолятов .x на твердых средах
3.1.1.4 Рост изолятов .ii на твердых средах.
3.1.2 Изучение роста колоний . ii на твердых средах.
3.1.3 Изучение роста колоний i и . ii при погруженном культивировании
3.2 Изучение секреции внеклеточной протсолитической активности в погруженной культуре у изолятов i и . ii
3.3 Сравнение патогенности грибов рода i и уровня внеклеточной прогеолитичсской активности
3.4 Выделение, очистка и характеристика свойств наиболее представленных ферментов изученных грибов
3.4.1 Выделение протеиназы . ii из культуральной жидкости
3.4.2 Выделение ферментов .x из культуральной жидкости
Выводы
Список литературы


Многие патогены продуцируют протеолитические ферменты, от активности которых зависит их способность использовать белки организмахозяина. Например, некоторые патогенные штаммы представителей рода i . i, i, . i, . , . i ослабляют иммунную систему человека и вызывают такие заболевания, как аллергический аспергиллез, туберкулез и, наиболее опасный, легочный аспергиллез . Поражение патогенными штаммами . v в большинстве случаев приводит к смертельному исходу. Показано что, на многих стадиях протекания болезни штаммы рода i секретнруют протеазы. Интенсивно ведется изучение протеиназ, способных путем прямого гидролиза фибрина растворять тромбы крови человека. Некоторые внеклеточные ферменты способны приводить к активации защитных механизмов организма человека и восстановлению кровотока Егоров и др. Ландау и др. Ii . Внеклеточные протсолитические ферменты играют ключевую роль в использовании микромицетами органических субстратов Билай, . , . Стоит отметить, что их выделение и очистка обходятся дешевле аналогичных внутриклеточных ферментов. Согласно Номенклатуре ферментов, подготовленной под эгидой Комиссии по номенклатуре МБС I, протсолитические ферменты относят к классу гидролаз класс 3, в составе которого они образуют подкласс пептидгид рол азы ему присвоен номер 3. По характеру гидролиза пептидных связей протеазы подразделяют на экзопептидазы и эндопептидазы рис. Амтюпепттшпзы аампноапплпептпа гплролазы КФ 3. Дштептпдазы аипептид гшгродазы КФ 3. Дттепттхдитаедтпдазы длпепгшпешептид пшроллзы КФ 3. Пегшшишпшепгадаш пехшшклдлпедшд пщрояазы КФ 3. Сер1шовые карбокештеппаазы КФ 3. Металлокарбокснлептидазы КФ 3. Цпстенновые карбокештелшдазы КФ 3. ОПептлдазы КФ 3. Серпнозые дротепндзы КФ 3. Цпстешговые тиоловые протепназы КФ 3. Аспартатные карбоксильные протепназы КФ 3. Металлопротеиназы КФ 3. Рис. Схема классификации протеаз по , Антонов, . Экзопептидазы от экзо и греч. Протеазы КФ 3. , либо с Сконца полипептидной цепи Мосолов, . Карбоксипептидазы классифицируют также по структуре активного центра на сериновые, цистенно вые и металлокарбоксипептидазы. Эндопептидазы от эндо и греч. Это проявляется в существовании для данной группы общих ингибиторов и в сходстве диапазона , в котором ферменты определенного класса проявляют активность. Соответственно их разделяют на сериновые, цистеиновые, аспартатныс и метапопротеиназы. Внутри групп разделяют семейства протеиназ, для которых характерно наличие однотипно построенного катал итического центра и эволюционное родство, выраженное в гомологии первичной и сходстве пространственной структуры. При исследовании протеиназ обнаружились ферменты, у которых изучено только строение каталитического центра, однако первичная структура неизвестна. В данный момент они отнесены к классу протеиназ неопределенной специфичносги , . Большая часть известных к настоящему времени протсаз может быть отнесена к одной из четырех групп металлопротеаз, сериновых, цистеиновых и карбоксильных или аспартильных протеаз Лобарсва и др. , . Мицелиальные рибы способны продуцировать разнообразные внеклеточные протсолитические ферменты. Наиболее активно изучаемые протеазы грибов это сериновые, металло и цистеиновые эндо и экзо протеазы и карбоксильные протеиназы. Внеклеточные сериновые протеиназы мицелиальных грибов представляют собой обширную группу протеолитических ферментов, обладающих весьма близкими свойствами. Среди них есть эндо и экзопептидазы карбоксипептидазы . Для большинства ферментов характерно наличие в каталитическом центре триады аминокислот аспарагиновая кислотагистидинсерин i, связанных водородными связями и образующих в присутствии субстрата цепь переноса заряда. Для многих из них показана способность расщеплягь как белки, так и синтетические субстраты. Оптимум сериновых протеиназ лежит в нейтральной и щелочной области.