Анализ локусов генов устойчивости томата к фузариозу и вертициллезу и создание на их основе ДНК маркеров

• Автор: Куклев, Михаил Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ботаническая характеристика томата

1.2. Фузариознос увядание томата.

1.3. Вертиниллсзное увядание томата

1.4. Гены устойчивости растений к заболеваниям.

1.4.1. Механизмы устойчивости.

1.4.2. Структура и функции протеинов, кодируемых

генами устойчивости.

1.4.3. Локализация белков устойчивости
и их элиситоров.
1.4.5. Взаимодействие между белками устойчивости
и их элиситорами
1.4.6. Белки устойчивости и передача сигналов.
1.4.7. Проведение сигналов белками с помощью предполагаемых сигнальных доменов.
1.5. Структура кластера, содержащего ген
1.5.1. Состав и структура локуса .
1.5.2. Характеристика протеинов, кодируемых
генамигомологами семейства
1.5.3. Эволюция геновгомологов семейства
1.6. Локус устойчивости томата к вертициллезу
1.6.1. Структура и состав региона, содержащего ген
устойчивости томата к вертициллезу
1.6.2. Белковые продукты генов устойчивости
томата к вертициллезу.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Растительный материал.
2.2. Выделение ДНК из растительного материала
2.3. ПЦРаналнз
2.4. Клонирование ПЦРпродуктов
2.5. Анализ нуклеотидных последовательностей.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изучение локуса у неустойчивых форм томата.
3.1.1. ПЦР анализ локуса .
3.1.1.1. Пара праймеров ШЦМ7
3.1.1.2. Пара праймеров иР и 1
3.1.2. Клонирование и анализ ПЦР продуктов,
полученных с устойчивого и неустойчивого генотипов
3.1.2.1. Анализ клонов, полученных от устойчивого
генотипа.
3.1.2.2. Анализ клонов, полученных от неустойчивого
генотипа.
3.1.3. Структура локуса, аналогичного
5. ртртеШоИнт, у неустойчивого генотипа 5. е8си1еп1ит
3.2. Изучение локуса устойчивости томата к вертициллезу
у неустойчивых генотипов томата
3.2.1. ГТЦРанализ локуса Уе у устойчивых и
неустойчивых форм томата
3.2.2. Анализ нуклеотидных последовательностей
локуса Уе у неустойчивых генотипов томата.
3.2.2.1. Анализ нуклеотидной последовательности
ПЦРпродукта праймеров УУПУУШ.
3.2.2.2. Анализ нуклеотидной последовательности
ПЦРпродукта праймеров У УР2УУЯ2
3.2.3. Анализ региона, тесно сцепленного с локусом
устойчивости томата к вертициллезу
3.2.4. Разработка флуоресцентной тестсистемы
для выявления устойчивых к вертициллезу форм томата.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Рис. Схематическое представление структуры гена по i . Рис. Схема структуры белка . Пояснения в тексте по i . Рис. Сравнительная схема протенинов , I21, I22. Пояснения в тексте по i . Рис. Сконцевая часть протеинов ,1,2,С3,4. Гомологи отличаются числом лейцинбогатых повторов по i . Рис. Локализация маркера на коротком плече 9 хромосомы . Рис. Структура региона, тесно сцепленного с геном устойчивости томата к вертициллезу по , . Рис. Структура протеинов V и V2 по , . Рис. Рестрикционная карта фрагмента, амплифицируемого праймерами 77. Рис. Рестрикция I. Рис. Рестрикция 1. Рис. Рестрикция V . Образец 3 гетерозиготный генотип. Рис. Продукты амплификации с праймерами , . 2 сорт М маркер молекулярного веса. Рис. Продукты ПЦР, полученные с праймерами , , обработанные рестриктазой Асе I 1 устойчивый гомозиготный гибрид 2 неустойчивый сорт . Рис. Скрининг клонов на наличие вставки с праймерами . Рис. Рестрикция клонов устойчивого генотипа эндонуклеазой рестрикции Асе 71 клоны, не имеющие сайта рестрикции 2 клоны с двумя сайтами рестрикции М маркер молекулярного веса. Рис. Нуклеотидная последовательность клона, имеющего два сайта рестрикции Асе I. Рис. Нуклеотидная последовательность клона, не имеющего сайтов рестрикции. Рис. Два типа клонов, полученных с устойчивого генотипа описание в тексте. Рис. Гидролиз ПЦРпродуктов с неустойчивого генотипа с помощью рестриктазы Асе I. Рис. Клопы, полученные с неустойчивого генотипа белыми стрелками указаны клоны, не имеющие сайт рестрикции Асе Г. Рис. Поиск высокогомологичных последовательностей в . Рис. Филогенетический анализ гомологичных последовательностей стрелками указаны ген I25 и клон без сайта рестрикции, . Рис. Поиск высокогомологичных последовательностей в . Рис. Филогенетический анализ гомологичных последовательностей стрелками указаны ген I25 и клон с сайтом рестрикции, . Рис. Клоны, полученные с неустойчивого генотипа после рестрикции . Рис. Рестрикционный анализ клонированных гомологов неустойчивого генотипа, в сравнении с ранее клонированными генамигомологами локуса стрелками указаны сайты рестрикции Асе Г. Рис. Структура локуса у . Рис. Структура локуса у . Рис. Результаты ПЦР с праймерами VV1VV1 дорожки 1, 2, 3, 4 и VV2VV2 5, 6, 7, 8. Рис. Результаты поиска гомологичных последовательностей для клонов устойчивого и неустойчивого генотипа. Рис. Сайты рестрикции X 1 на устойчивых и неустойчивых к вертициллезу генотипах томата. Рис. Рестрикция ПЦРпродуктов с рестриктазой X I 1 Мегана устойчивый гомозиготный 2 неустойчивый 3 Белый налив неустойчивый 4 Ампаро устойчивый гомозиготный 5 Ii гетерозигота 6 гетерозигота 7 i гетерозигота. Рис. Структура региона, тесно сцепленного с геноме устойчивости томата к вертициллезу расстояние от гена V 0, 0, сМ или около 0 , . Рис. Праймеры, синтезированные для выявления делении у неустойчивых генотипов. Рис. ПЦРпродукты, полученные с праймерами VV 1,2 устойчивые гомозиготные 3,4 гетерозиготные 5,6 неустойчивые. Рис. Анализ сортов и гибридов томата двумя маркерными системами 1 Мегана устойчивый гомозиготный 2 неустойчивый 3 Белый налив неустойчивый 4 Ампаро устойчивый гомозиготный 5 Ii гетерозиготный 6 гетерозиготный 7 i гетерозиготный. Рис. Анализ расщепляющейся популяции с помощью праймеров VV. Рис. Нуклеотидные последовательности ПЦРпродуктов, полученных с праймерами VV. Рис. Места отжига праймеров и флуоресцентного зонда на нуклеотидную последовательность региона, тесно сцепленного с локусом V. Рис. Результаты скрининга образцов на наличие доминантного аллеля гена устойчивости томатов к вертициллезу V. Пояснения в тексте.