Механизмы, контролирующие пролиферацию клеток печени

• Автор: Еремеев, Артем Валерьевич
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 122 с. : ил

1.1 История вопроса

1.2 Современные представления о механизмах регуляции

размножения клеток

1.2.1 Уровни регуляции размножения клеток. Экзо и эндогенный позитивный и негативный тип контроля пролиферации

1.2.2 Экзогенный позитивный и негативный тип контроля

пролиферации. Полифункциональность экзогенных факторов роста

1.2.3 Эндогенная негативная регуляции размножения клеток

1.3 Гены супрессоры опухолей рШ и р

1.4 Регуляторы клеточного цикла циклинзависимые киназы и их

ингибиторы

1.5 Активные метаболические процессы в покоящихся клетках

1.5.1 Роль протеаз и активного протеолиза в регуляции размножения
эукариотических клеток
1.5.2 Роль протеинфосфатаз типа 1 и 2А в негативном эндогенном
контроле пролиферации
1.6 Прекращение пролиферации в дифференцированных клетках
1.6.1 Современные представления о механизмах регуляции
пролиферации клеток печени
1.6.2 Регенерирующая печень
1.6.3 Факторы роста, белки регуляторы, сигнальные пути
1.6.4 Ауто и паракрииный позитивный и чегатиный контроль
регенерации печени
1.6.5 Вклад овальных клеток малых гепатоцитов в регенерацию
печени после ЧГЭ
1.6.6 Изменения на уровне хроматина после ЧГЭ
1.6.7 Молекулярные механизмы контроля пролиферации гепатоцитов
1.6.8 Возможные механизмы остановки пролиферации клеток в
регенерирующей печени
1.6.9 Возраст, политоидизация и снижение пролиферапивиого
потенциала гепатоцитов
Глава II МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Характеристика обьекга исследования
2.2 Культивирование клеток
2.3 Получение изолированных гепатоцитов печени взрослых мышей
2.4 Культивирование гепатоцитов и фибробластов
2.5 Слияние клеток
2.6 Эксперименты с окадаевой кислотой
2.7 Эксперименты с ингибиторами биосинтеза белка
2.8 Эксперименты с иншбигорами протеаз
2.9 Радиоавтография
2. Исследование экспрессии генов
2. Обработка данных
Глава III. Изучение характера эндогенного контроля
пролиферации гслатоцитов мыши в культуре
3.1 Параметры пролиферативной активности гепатоцитов в суспензионной культуре, изолированных из иитактной и регенерирующей печени мыши
3.2 Пролиферативная активность стимулированных фибробластов при слиянии их с гепатоцитами, полученными из интактной и регенерирующей печени мыши
3.3 Пролиферативная активность покоящихся фибробластов при слиянии с гепатоцитами, полученными из интактной и восстановившейся после ЧГЭ печени
Глава IV. Изучение механизмов, контролирующих
пролиферацию гепатоцитов, с помощью ингибиторов биосинтеза белка
4.1 Пролиферативная активность стимулированных и покоящихся фибробластов при слиянии с гепатоцитами, полученными из восстановившейся после ЧГЭ печени, кратковременно преинкубированными с цнклогексимидом
4.2 Пролиферативная активность стимулированных и покоящихся фибробластов при слиянии их с гепатоцитами, полученными из интактной печени, кратковременно преинкубированными с цнклогексимидом
4.3 Циклогесимид i viv снимает эффект подавления, проявляемый ядрами гепатоцитов восстановившейся печени со стимулированными фибробластами в гетерокарионах
4.4 Изменения массы печени у мышей разных линий при однократном введении им циклогесимида i viv
4.5 Пролиферативная активность гепатоцитов, полученных из интактной и восстановившейся после ЧГЭ печени и кратковременно преинкубированных с ингибиторами биосинтеза белка, в монослойной культуре
Глава V. Поиск кандидатов на роль эндогенных негативных регуляторов пролиферации гепатоцитов
5.1 Исследование пролиферативной активности и экспрессии генов в клегках печени у мышей различных линий в ответ на однократное введение ОАТ ранние сроки канцерогенеза
5.2 Пролиферативная акгивность стимулированных фибробластов при слиянии их с гепатоцитами, полученными из интактной печени мышей, а также печен и мышей, которым однократно вводили ОАТ
Глава VI. Характер контроля пролиферации гепатоцитов, полученных из печени мышей, получавших канцероген в течение продолжительного периода времени поздняя сгадия канцерогенеза
6.1 Пролиферативная активность стимулированных и покоящихся
фибробластов при слиянии их с гепатоцитами, полученными из интактной и регенерирующей печени мышей линии ,
получавших в течение продолжительного периода времени ОАТ 3 мес
6.2 Пролиферативная активность стимулированных и покоящихся фибробластов при слиянии их с гепатоцитами, полученными из интактной и регенерирующей печени мышей линии АНе, получавших в течение продолжительного периода времени ОАТ 3 мес
Глава VII. Изучение механизмов, контролирующих
пролиферацию гепатоцитов, с помощью ингибитора фосфатаз окадаевой кислоты
Глава VIII. Изучение механизмов, контролирующих
пролиферацию гепатоцитов печени мыши , с помощью ингибиторов протеаз
8.1 Пролиферативная активность юпатоцитов в монослойной культуре, полученных из интактной печени и кратковременно проинкубированных с лизосомотропными агентами
8.2 Пролиферативная активность гепатоцитов в монослойной культуре, полученных из интактной печени и кратковременно преинкубированных с ингибиторами не лизосомных протеаз
Заключение
Основные экспериментальные результаты
Список литературы
Введение


Поскольку клетки находятся в окружении других клеток, регуляция пролиферации может осуществляться при помощи баланса экзогенных стимулирующих и ингибирующих пролиферацию факторов, а также при участии механизма контактного плотностпозависимого подавления роега. Экзогенный позитивный и негативный тип контроля пролиферации. Полифуикциональность экзогенных факторов роста. На экзогенном уровне регуляция размножения клеток осуществляется при участии специализированных пептидных молекул факторов роста. В течение довольно продолжительного времени экзогенный контроль пролиферации клеток наиболее интенсивно развивающаяся область исследований в клеточной биологии. Обусловлено это не только простотой идеологии в экспериментальных подходах, но и установлением важного факта продукты многих клеточных протоонкогенов образуют внутриклеточную коммуникативную сеть передачи сигналов от экзогенных регуляторных молекул в ядро клетки , vvi . Факторы роста оказывают на клеточную пролиферацию чаще всего стимулирующее и реже ингибирующее воздействие. Однако некоторым из них, таким как, например, или свойственна бифункциональность или даже мультифункционалыюсть в зависимости от условий и типа клеткимишени i, , , , , . Это хорошо показано для такого бифункционального факгора роста как . Полипептиды с ингибиторными свойствами были выделены из различных источников, например, гомогенатов различных тканей и сыворотки крови. Так из цитозоля нормальной печени крыс был получен ингибиторный полипептид I с Мг , который обратимо подавлял синтез ДНК в эпителиальных клетках печени, но не оказывал никакого влияния на трансформированные клетки печени или клетки гепатомы в культуре , Гуре, . Поскольку I оказалась близкой к , а многие из вновь изолированных ингибиторных полипептидов были связаны с или оказывались идентичными ему, Накамура и соавт. I также идентичен . Однако Хагетт и соавт. I и , хотя и проявляют одинаковые эффекты на рост нормальных эпителиальных клеток печени i vi, но представляют собой различные ингибиторные молекулы. Были изолированы и другие ингибиторные полипептиды. I i . Мг , подавляющий рост клеток асцитного рака Эрлиха . I . Можно привести еще данные работы . АН0 подавляет зависимое от образование колоний в мягком агаре клетками линии ЗТЗ. Наконец из кровяных пластинок человека был очищен сильный ингибитор пролиферации клеток эндотелия сосудов I , , . Еще один мультифункциональный фактор фактор некроза опухолей а а сильный ингибитор роста эндотелиальных клеток i vi и стимулятор роста фибробдастов . Продемонстрировано, что обладает цитостатическим и цитотоксическим эффектами на определенные клеточные линии, полученные из опухолей мышей и человека , . Также вызывает активацию сфингомиелиназы, приводя тем самым к увеличению уровня церамида в эпителиальных клетках, который активирует соответствующую фосфатазу САРР iivi i . Эта фосфатаза в свою очередь ингибирует экспрессию стус, РКСзависимую транслокацию и в ядро , . Интересно отметить, что , являясь ингибитором роста эндотелиальных клеток, предотвращает ингибирование, вызываемое . Ещ в начале х годов рядом авторов ivi, . Сетков и др. Результаты экспериментов по слиянию покоящихся и пролиферирующих фибробластов человека или клеток мыши линии I ЗТЗ показали, что в покоящихся клетках существуют эндогенный ингибиторы клеточного деления v . Сетков и др. Сетков, Казаков, . Авторами было обнаружено, что ингибиторный эффект зависит от биосинтеза белка в покоящихся клетках. Оказалось, что кратковременная обработка . Актиномицин также приводит к снятию эффекта подавления синтеза ДР1К в гетерокарионах через 8 ч после воздействия Сетков и др. Авторы связывали это с тем, что в покоящейся клетке находится некоторый пул мРНК ингибиторного белка. И пока он не исчерпается, клетка будет синтезировать ингибитор и, следовательно, находиться в состоянии покоя. С другой стороны, было показано, что слияние покоящихся клеток с клетками, находящимися в нериодс, не приводит к вовлечению их в период синтеза ДНК. Также было обнаружено, что стимулированные сывороткой покоящиеся клетки в начале до 2х часов пререпликативного периода сохраняют свою способность подавлять пролиферацию клеток, находящихся в позднем пререпликативиом периоде.