Нуклеопротеиновые комплексы дрожжей : Получение и характеристика

• Автор: Синицкая, Наталья Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика и структурнофункциональная организация хроматина дрожжей vii.

1.2. Регуляция активности хроматина vii.

1.3. Биологическая активность ядерных белковрегуляторов.

1.4. Получение ядерных негистоновых белков дрожжей.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод получения НПК.

2.2.2. Метод фракционирования НПК при микрофильтрации
2.2.3. Вискозиметрия.
2.2.4. Метод определения белка по Лоури
2.2.5. Орциновый метод определения РНК.
2.2.6. Гельхроматография
2.2.7. Ферментативный гидролиз.
2.2.8. Бумажная хроматография
2.2.9. Метод гельэлектрофореза
2.2 Ионообменная хроматография.
2.2 Приготовление буферных растворов.
2.2 Комплексообразование.
2.2 Реакция торможения миграции лейкоцитов.
2.2 Определение антистрессорной активности НПК.
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Разработка метода выделения НПК из дрожжей
vii
3.3.1. Выбор экстрагента и термодинамических условий экстракции.
3.3.2. Фракционирование экстракта мембранной микрофильтрацией.
3.3.3. Осаждение НПК.
3.2. Исследование компонентного состава НПК дрожжей
3.2.1. Изучение углеводного состава НПК
3.2.2. Исследование белковых компонентов НПК.
3.2.3. Гельхроматография НПК
3.3. Изучение особенностей организации НПК дрожжей.
3.3.1. Фракционирование НПК на ионитах.
3.3.2. Исследование взаимодействия нуклеиновых кислот с
белками по спектральным характеристикам
3.4. Исследование биологической активности НПК дрожжей.
3.4.1. Исследование антистрессорного действия НПК
3.4.2. Изучение митогенной ативности НПК.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Дрожжи vii являются типичным представителем сумчатых грибов класса . Размножаются почкованием, но имеют и половой процесс развития. Мицелия не образуют. Клетки дрожжей обычно сферической или круглой формы с диаметром от 7 до мкм. Имеют оформленное ядро с диаметром около 2 мкм Блинов Н. П. . Ядро окружено двухслойной ядерной оболочкой, соединенной с одной стороны с сетью эндоплазматического ретикулума, а с другой с белками ядерного матрикса. Ядерноя оболочка защищает и предохра1шет ДНК от внешних неблагоприятных воздействий. Связь между ДНК и цитоплазмой клетки осуществляется через ядерные мембраные белки порины, через которые способны проникать молекулы РНК, регуляторные белки и гормоны стероидной природы. Число молекул ДНК хромосом, приходящееся на одну клетку является важным токсономическим признаком организма. В интервале между двумя последующими делениями клетки не имеют четко выраженных хромосом. В этот период ДНК расплетена. Ядро заполняет гетерохроматин комплекс ДНК, РНК и ядерных белков v К. Е, Табл. Соотношение компонентов хроматина эукариот, находящихся в i фазе клеточного цикла v К. Компоненты хроматина Содержание, вес. У всех эукариотических организмов выделяют два крупных класса белков хроматина белки основной природы гистоны и негистоновые белки хроматина НТВ. К НТВ хроматина относятся кислые, основные белки и нейтральные пептиды, называемые факторами v К. Е, . Гистоны являются основными структурообразующими белками хроматина, на которые наматывается нить ДНК Нуклеиновые кислоты, . В то же время, обширный класс негистоновых белков включает различные белки, как структурные белки крепления хромосом к ядерной мембране и матриксу, так и регуляторные белки, активирующие удвоение ДНК и транскрипцию, а также ферменты, участвующие в этих процессах Структура и генетическое значение. Гистоны и негистоновые белки хроматина регулируют клеточный цикл на всех этапах от деления до завершения существования клетки и утилизации ее соседними молодыми клетками популяции Гинейтис А. Куций М. П.и др. . С, I В. . С физикохимической точки зрения нуклеиновые кислоты НК представляют собой линейные полиэлектролиты, состоящие из мономеровмононуклеотидов, которые включают азотистое основание пуриновое или пиримидиновое, пентозу и остаток фосфорной кислоты. ДНК составляют дезоксирибоза и азотистые основания аденин А, гуанин Г, цитозин Ц и тимин Т. РНК входят рибоза и те же основания за исключением тимина, который заменен урацилом У. Перечисленные азотистые основания относятся к главному ряду. Характерной особенностью дрожжей является отсутствие минорных оснований 6метиладенина, 1метилгуанина, 5метилцитозина, 5оксиметилцитозина, встречающихся в следовых количествах у высших эукариот в тРНК и рРНК v К. Е., Нуклеиновые кислоты. Количество нуклеотидов четырех типов, входящих в состав ДНК, может охарактеризовать видовую принадлежность организма. Доказано, что соотношение АТГЦ представляет собой показатель специфичности ДНК. Так для . АТГЦ соответствует 1, 1, Нуклеиновые кислоты, . При исследовании РНК было показано, что отношение суммарного количества пуриновых оснований к пиримидиновым также обнаруживает значительное постоянство. Эта величина дополнительно характеризует нуклеотидный состав микроорганизмов. Для дрожжей она в среднем колеблется в интервале 1, 1, Нуклеиновые кислоты, . Первичная, вторичная и третичная структуры РНК и ДНК одинаковы для всех эукариотических организмов Зенгер В. К настоящему моменту геном 5. Вгоаск ТЯ е ак, . Основные характеристики дрожжевого генома приведены в таблица 2. Вгоаск ТЯ а Размер генома, пары оснований п. М п. ДНК рДНК, обычно, 1,02,0 М п. Единичная ДНК, п. М п. Показано, что кроме ядерной и митохондриальной ДНК в . ДНК и двойная РНК. Показано также, что при компактизации хроматина, предшествующей клеточному делению, в ядре 5. Бае образуется хромосом различного размера. Характеристика дрожжевых хромосом приведена в таблице 3.