Микросателлитные последовательности (TG)n- типа генома крупного рогатого скота

• Автор: Симоненко, Вера Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Боровск
• Количество страниц: 111 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Использование полиморфизма в изучении генома

Морфологический и биохимический полиморфизм Полиморфные ДНКмаркеры Повторяющаяся ДНК

Особенности структурной организации эукариотического генома

Организация, состав и хромосомная локализация повторяющейся ДНК Микросателлитные последовательности
Использование микросателли.тй.последовательностей в исследований.генома сельскохозяйственных животных

Генетические карты сельскохозяйственных животных

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Используемые материалы Выделение ДНК

Слотблот гибридизационный анализ космидной ДНК

Мечение ТС8 зонда
Мечение ДНК ТОсодержащих космид биотином Гидролиз космидной и плазмидной ДНК эндонуклеазами рестрикции
Электрофоретическое разделение ДНК Блотгибридизация
Препаративное выделение ДНКфрагментов из геля Субклонирование фрагментов ДНК Определение нуклеотидной последовательности Амплификационный анализ образцов ДНК Определение полиморфизма микросателлитных локусов
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ космидной геномной библиотеки быка Установление хромосомной локализации Тгсодержащих космид
3.3. Выделение ТОсодержащих фрагментов хромосо
моспецифичных космид
3.4 . Определение нуклеотидной последовательности
ТОсодержащих фрагментов
3.5. Анализ полиморфизма исследуемых локусов
3.6. Оценка видовой специфичности микросателлит
ных локусов
выводы
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Одним из основных условий идентификации локусов, определяющих как моногенные, так и полигенные хозяйственнополезные признаки сельскохозяйственных животных является создание насыщенных полиморфными маркерами генетических карт, которые дают возможность найти корреляцию между интересующими фенотипами и определяющими их генетическими структурами , . Когда будет достигнута достаточно высокая степень насыщения генетической карты маркерами, окажется возможным поновому использовать гибридизацию в селекции. .. Серебровским принципа сигналейЗахаров и др. Важное преимущество ДНКмаркеров в этом случае состоит в возможности определения генотипа у эмбрионов, молодых животных, а также у быков по признакам, реализующимся только у коров. Кроме того, построение подробных генетических карт является одним из условий успеха и в клонировании генов, создает основу для работ по получению трансгенных животных с заданными свойствами Захаров и др. Работы по созданию таких карт являются в последнее время предметом научной интеграции исследователей стран Европейского Союза, Северной Америки, Африки, Австралии. Уже существуют генетические карты приблизительно для видов i . Особое внимание уделяется картированию геномов важнейших видов сельскохозяйственных животных. Наиболее интенсивно ведутся работы по созданию генетических карт крупного рогатого скота. Протяженность созданных за последнее время генетических карт находится в пределах , а размер генома крупного рогатого скота оценивается в сМ . Ввиду вышесказанного, становится очевидной необходимость работ по получению микросателлитных маркеров для построения подробных генетических карт, являющихся необходимым условием идентификации локусов, определяющих хозяйственнополезные признаки сельскохозяйственных животных. Цель и задачи исследований. Целью работы было выделение и анализ микросателлитных последовательностей типа из космидной библиотеки быка. Выделить из геномной библиотеки быка космиды, содержащие микросателлиты. Провести рестрикционный анализ последовательностей, выделенных из положительных космид. Определить хромосомную локализацию положительных космид. Определить нуклеотидную последовательность положительных фрагментов из состава хромосомоспецифичных космид. Проанализировать исследуемые хромосомоспецифичные последовательности на полиморфизм и видоспецифичность. Научная новизна. Установлено, что геном крупного рогатого скота содержит около пятнадцати тысяч микросателлитных последовательностей типа. Выделены космиды, позволяющие маркировать хромосомы крупного рогатого скота. Определена нуклеотидная последовательность семи положительных фрагментов из состава хромосомоспецифичных космид, три из них зарегистрированы Европейским институтом биоинформации под номерами Х8, 6, 5. i . Проведена оценка полиморфизма и видоспецифичности исследуемых локусов. Выполнен сравнительный анализ гомологичных последовательностей быка и барана. Научнопрактическая значимость работы. Полученные данные о структурной организации повторов могут быть использованы при разработке стратегии выделения локусспецифичных маркеров. Результаты анализа геномной космидной библиотеки быка могут быть использованы для дальнейшего выделения и физического картирования генетических маркеров. Выделенные хромосомоспецифические космиды могут быть использованы в качестве хромосомных маркеров. Полиморфная микросателлитная последовательность . хромосомы крупного рогатого скота. Геном крупного рогатого скота содержит около пятнадцати тысяч микросателлитных последовательностей . В большинстве случаев каждый участок хромосомы может быть маркирован более чем одной микросателлитной последовательностью типа. Праймеры, подобранные для типирования определенных локусов крупного рогатого скота, могут быть использованы для выполнения аналогичных работ на близкородственных видах. Выделенная полиморфная последовательность . Апробация работы.