Рекомбинантные антигены в развитии иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса

• Автор: Гражданцева, Антонина Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 106 с.

Оглавление

Список используемых сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы. Сифилис характеристика инфекции и проблемы ее диагностики

1.1. Этиология сифилиса.

1.2. Патогенез, патанатомия и клинические формы заболевания.

1.3. Лабораторная диагностика сифилиса .

1.3.1. Серологические методы диагностики сифилиса с использованием неспецифического антигена
1.3.2. Серологические методы диагностики сифилиса с использованием специфических антигенов

1.3.3. Рекомбинантные белки i в диагностике сифилиса.

Антигенный состав i .

1.4. Заключение но обзору литературы
Глава 2. Материалы и методы
Г лава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Определение оптимальных параметров культивирования i .
3.2. Изучение природного антигена i.
3.2.1. Получение антигена i
3.2.2. Исследование антигена i в
3.2.3. Исследование антигена i в ИФА .
3.3. Конструирование и изучение рекомбинан тных белков i
3.3.1. Выбор антигенов i
3.3.2. Получение бактериальных штаммовпродуцентов белков
3.3.3. Получение рекомбинантных белков.
3.3.4. Применение рекомбинантных белков i для тестирования сывороток людей, больных сифилисом.
3.3.5. Определение стабильности сорбированных на планшетах природного и рекомбинантного антигенов .
3.3.6. Изучение отдельных рекомбинантных белков , , ,
и их комбинации при определении антител к i на различных стадиях заболевания
Заключение
Выводы
Список используемой литературы


Вследствие увеличения в году числа выявленных беременных женщин, больных сифилисом, в раз по сравнению с годом значительно чаще стали регистрироваться случаи врожденного сифилиса. Показатель числа случаев врожденного сифилиса на 0 родившихся возрос с 0,3 в году до 5,6 в году . Вызывает большую тревогу то, что этот подъем заболеваемости имеет некоторые признаки эпидемического характера подавляющее преобладание в структуре заболеваемости заразных форм сифилиса высокий процент среди заразных форм первичного и вторичного свежего сифилиса снижение соотношения вторичных рецидивных и свежих форм 11,6 в г. России 1. Наиболее значимыми причинами такого высокого уровня заболеваемости сифилисом являются изменения в социальной сфере и экономические факторы военные, гражданские и национальные конфликты, падение уровня жизни населения, проституция и т. При выявлении сифилиса определяющую роль играет лабораторная диагностика. С г. КСР, применяемый в медицинских учреждениях нашей страны , так и используемые в качестве отборочных тестов реакция микропрсципитации и реакция пассивной гемагглютинации РПГА. КСР включает реакцию связывания комплемента с кардиолини новым и трепонемным антигенами РСК, реакцию иммунофлюоресценции РИФ, реакцию иммобилизации бледных трепонем РИБТ , . Следует подчеркнуть, что пока ни один из этих тестов не являегся идеальным диагностическим методом и не может удовлетворить полностью практическую медицину. Одни из них сложны при постановке и являются дорогостоящими, другие достаточно часто дают ложноположительные результаты ,, . Так, реакция микропреципитации, которая применяется в основном при массовых обследованиях, является быстрой, простой в исполнении, но может давать ложноположительные, а в отдельных случаях и отрицательные результаты при активных формах сифилиса . Ложноположительные ответы могут иметь место при постановке РСК с кардиолипиновым антигеном реакция Вассермана в случае болезней печени, желудка, желез внутренней секреции, а в РСК с трепонемным антигеном при системной красной волчанке, болезни Лайма , . В пожилом возрасте стандартные серологические реакции на сифилис могт быть ложнопозитивными у лиц. При беременности ложнопозитивные реакции составляют 2 . Недостатки этих классических методов, а также успехи научнотехнических разработок заставляют вводить в практику новые методы диагностики, более удобные в постановке, позволяющие обследовать в короткие сроки большое количество людей и в то же время обладающие достаточной чувствительностью и специфичностью. Одним из таких перспективных методов серодиагностики является иммуноферментный анализ ИФА. В конце х годов в работах зарубежных авторов появляются сообщения о возможности применения ИФА для определения антител к i , . В ряде работ в последующие годы содержатся данные по использованию рекомбинантных антигенов i для выявления сифилиса ,,6. В России кроме обязательного комплекса серологических реакций в некоторых лабораториях в последние десять лет применяется ИФА с использованием антитона из непатогенных и культуральных трепонем , позволяющего определить антитела лишь к группоспецифическим антигенам спирохет. Для определения антител к видоспецифическим антигенам i необходимо применять в качестве антигена патотонную трепонему i. Однако, при ее культивировании возникает ряд серьезных трудностей необходимость пассирования трепонемы на животных кроликах, вероятность заражения персонала, сложность стандартизации антигена, его дороговизна. Перечисленные выше недостатки ставят вопрос о разработке новых методов получения антигена. Одним из наиболее перспективных путей совершенствования диагностических тестсистем является использование в качестве антителосвязывающето субстрата рекомбинантных аналогов белков i, синтезированных в экспрессирующей системе . Получению некоторых рекомбинантных белков i и применению их в качестве антигена в иммуноферментном анализе и посвящена данная работа.