Получение зародышей крупного рогатого скота вне организма

• Автор: Маленко, Галина Петровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Боровск
• Количество страниц: 227 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ.
1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Получение зрелых яйцеклеток крупного рогатого скота.1 о

2.1.1. Дозревание ооцитов крупного рогатого скота i viv.

2А.2. Температурный режим доставки яичников и культивирования ооцитов и ранних

зародышей крупного рогатого скота.

2А.З. Выделение ооцитов из антральных фолликулов яичника

2А.4. Классификация ооцитовМ

2А.5. Дозревание ооцитов крупного рогатого скота i vi.

2.2. Оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота i vi.з

2.2А. Капацитация сперматозоидов
2.2.2. Предварительная обработка сперматозоидов замороженного эякулята быка.
2.2.3. Отодотворение ооцитов крупного рогатого скота i vi.
2.3. КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА I VI
2.3.1. Системы культивирования эмбрионов крупного рогатого скота i vi.
2.3.2. Потребность ранних зародышей крупного рогатого скота в энергетических веществах и аминокислотах
2.3.3. Влияние альбумина и сыворотки крови на развитие эмбрионов крупного рогатого скота i vi
2.3.4. Влияние кооперативного взаимодействия ранних эмбрионов крупного рогатого скота на их развитие i vi
2.3.5. Динамика ра звития ранних эмбрионов крупного рогатого скота
2.3.6. Физикохимические условия культивирования эмбрионов крупного рогатого скота i vi
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ЗА. Общие условия культивирования.
3.2. Реактивы и среды.
3.3. Получение i viv и трансплантация зародышей крупного рогатого скота и кроликов .
3.4. Получение яичников крупного рогатого скота и выделение ооцитов.
3.5. Дозревание и оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота i vi.
3.6. Культивирование эмбрионов крупного рогатого скоти i vi.
3.7. Приготовление эстральпой сыворотки крови крупного рогатого скота для использования в технологии получения зародышей вне организма.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ФАКТОРОВ ПРИ МАНИПУЛИРОВАНИИ ВО ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ НА ГАМЕТЫ И ЗАРОДЫШИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И КРОЛИКОВ, ПОЛУЧЕННЫЕ I VIV.
4АА. Влияние условий кратковременного хранения зародышей крупного рогатого скота на их .жизнеспособность
4.1.2. Тестирование условий культивирования с использованием эмбрионов кролика
4.1.3. Совершенствование методов капацитации сперматозоидов i vi с использованием в качестве модели гамет кролика
4.2. ДОЗРЕВАНИЕ ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА I V
4.2.1. Дозревание ооцитов крупного скота i vi при сокультивировании с тканями стенки фолликула
4.2.2. Эффективность дозревания ооцитов крупного рогатого скоти i vi при размещении различного числа комплексов ооциткумулюс па единицу объема среды.
4.2.3. Влияние среды, источника сыворотки крови и сочетания гормонов в среде на дозревание ооцитов крупного рогатого скота i viI
4.2.4. Перспективы повышения компетенции ооцитов крупного рогатого скота при дозревании i vi. З
4.2.5. Устройство и способ для выделения ооцитов крупного рогатого скота из антральных фолликулов яичника.
4.3. КАПАЦИТАЦИЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ И ОПЛОДОТВОРЕНИЕ ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА I VI
4.3.1. Получение, хранение и использование эпидидималызых сперматозоидов быка
4.3.2. Определение влияния концентрации гепарина на капацитацию сперматозоидов энидидимальных и эякулята быка i vi.
4.3.3. Влияние концентрации сперматозоидов в среде на отюдотворение ооцитов, дозревавших при разных условиях.
4.3.4. Влияние разных марок альбумина в среде на результаты оплодотворения ооцитов крупного скота i vi.
4.3.5. Влияние семени разных быков и метода подготовки сперматозоидов на результаты оплодотворения ооцитов крупного рогатого скота i vi.
4.4. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА I VI.
4.4.1. Получение жизнеспособных эмбрионов крупного рогатого скота i vi при использовании системы сокулыпивирования па монослое соматических клеток.
4.4.2. Использование простых солевых сред для культивирования эмбрионов крупного рогатого скота i vi
4.4.3. Развитие ранних эмбрионов крупного рогатого скота в среде с разным содержанием сыворотки крови и альбумина.
4.4.4. Влияние аминокислот и различных уровней энергетических веществ в среде на развитие эмбрионов крупного рогатого скотаI
4.4.5. Критерии оценки системы культивирования эмбрионов крупного рогатого скота i vi.
4.4.6. Получение зародышей крупного рогатого скота вне организма для использования в научноисследовательской работе.
4.5. МОДИФИЦИРОВАННЫЕ МЕТОДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАРОДЫШЕЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА I VI
4.5.1. Формулы для доведения осмотического давления растворов
4.5.2. Приготовление тотальных препаратов ранних зародышей крупного рогатого скота с использованием камеры, насыщенной парами фиксатора.
4.5.3. Модифицированный метод приготовления цитологических препаратов
нредимшантационных зародышей крупного рогатого скота.
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Введение.
Актуальность


Ооциты категории , безусловно, обладают существенно пониженной способностью к созреванию, и значительная часть их дегенерирует i vi i . Внутриклеточный уровень глутатиона оказывался достоверно выше у ооцитов, дозревавших i vi как комплекс ооциткумулюс по сравнению с денудировапиыми ооцитами. Очень важно предсказать потенциал развития определенного ооцита. Например, для инъекций чужеродной ДНК должны быть отобраны яйцеклетки и зиготы с максимальным потенциалом к эмбриогенезу. Точно также ооциты, отобранные как реципиенты для ядерных пересадок, должны обладать наивысшим потенциалом к развитию. И с этой точки зрения очень интересны работы . Более крупные фолликулы содержат ооциты с более высоким потенциалом к развитию , , v . Ооциты из фолликулов диаметром меньше 2 мм могут обладать меньшей жизнеспособностью , , . Из антральных фолликулов, расположенных в толще коркового слоя яичника, подвергаются i vi дозреванию и последующему развитию до бластоцисты только ооциты с наибольшим диаметром . По количеству фолликулов в яичнике и качеству выделенных ооцитов в связи с возрастом животных результаты были примерно одинаковы по возрастным группам животных телки месяца, коровы лет и 9 лет , , . Сообщалось, что созревание ооцитов из яичников с функционирующим или регрессирующим желтым телом шло примерно одинаково, поэтому отбор ооцитов с учетом стадии цикла представлялся не нужным ii, i, ii . Однако в экспериментах v . Д астрального цикла . Д . Д 6. Д2 . Кроме того, эмбрионы развивались быстрее, если ооциты выделялись из яичников, взятых в конце лютеалыюй фазы на Д. Авторы полагают, что стадия эстралыюго цикла может влиять на потенциал развития ооцитов и получение эмбрионов i vi. Гузеватый и др. Результаты работы i . По данным . Имеется предположение, что способность ооцитов к дозреванию это одна из последних функций, утрачиваемых фолликулом в процессе атрезии , , . Более того, наивысшей компетенцией развития могут обладать ооциты с несколько менее компактным кумулюсом, которые происходят из здоровых или незначительно атретических фолликулов. По данным i, i компетентные ооциты могут происходить из фолликулов с ранними признаками атрезии, тогда как многие здоровые фолликулы содержат некомпетентные к эмбриональному развитию ооциты. Степень дифференциации фолликула более важна, чем его величина или состояние здоровья i . В целом, отбор ооцитов для дозревания i vi в основном базируется на качестве цитоплазмы и клеточного окружения. Более высокое качество кеточного окружения связывается с более высоким уровнем дозревания ii, i, i . Дозревание ооцитов крупного рогатого скота i vi. Возобновление мейоза и ядерное дозревание ооцитов млекопитающих i vi вызывается спонтанно, когда ооциты высвобождаются из ингибирующею окружения фолликула и переносятся в соответствующую культуральную среду i, , v, . Сроки дозревания ооцитов крупного рогатого скота i viv от пика ЛГ и i vi от начала культивирования сопоставимы. Стадия метафаза II выявляется через часов от начала дозревания ооцитов i vi i . Максимальное количество ооцитов на стадии МИ выявляется через часа культивирования i . Лагутина и др. X . Хорошо установлено, что условия дозревания ооцитов крупного рогатого скота i vi оказывают существенное влияние на дробление зигот и последующее развитие зародышей, во всяком случае до бластоцисты iii . В эксперименте , vi из 5 испытуемых сред, использованных для дозревания ооцитов крупного рогатого скота, лучшими были МЕМа и . Среда 9 занимала среднее положение. Среды и оказались неподходящими для дозревания ооцитов крупного рогатою скота i vi. Ранее также было сообщение, что среда оказалась совсем непригодной для дозревания ооцитов крупного рогатого скота, хотя она была лзчшей для дозревания ооцитов мыши V . Очень низкий выход расширенных бластоцист отмечен в случае дозревания ооцитов в среде В2 7, тогда как при дозревании ооцитов в среде 9 и до стадии расширенной бластоцисты развивалось и ооцитов, соответственно , , . Среда I0 и ранее успешно использовалась в качестве среды дозревания ооцитов крупного рогатого скота X .