Разработка и оптимизация биотехнологических методов культивирования in vitro lavandula angustifolia mill. с целью расширения исходного материала для селекции

• Автор: Бостанова, Лейла Умаровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 129 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ ПРОБЛЕМЫ

1.1. Пряноароматические и эфиромасличные растения

источники незаменимых биологически активных веществ.

1.2. Использование биотехнологических методов для решения селекционных задач

1.3. Микроклональное размножение растений.

1.3.1. Модели микроклонального размножения

1.4. Стерильность как основа культуры клеток

1.5. Факторы, определяющие рост и развитие растений i vi

1.6. Укоренение растенийрегенерантов в культуре i vi.

1.7. Адаптация пробирочных растений к естественным условиям.
ГЛАВА 2. МЕТОДОЛОГИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ
2.1. Объект исследований
2.2. Биотехнологические методы исследования.
2.2.1. Культивирование каллусных тканей на твердых
питательных средах
2.3. Физикохимические методы исследования каллусной ткани
2.4. Микробиологические методы исследования.
ГЛАВА З.ПОЛУЧЕНИЕ КАЛЛУСНОЙ КУЛЬТУРЫ V II I.
3.1. Индукция каллусогенеза в растительном сырье.
3.1.1. Подбор растительного материала
3.1.2. Введение эксплантов в стерильную культуру.
3.1.3. Подбор и оптимизация питательных сред для индукции каллусной культуры v ii i.
3.2. Пассирование каллусной культуры.
3.3. Физикохимический анализ каллусной культуры.
3.3.1. Исследование динамики роста каллусной культуры
3.3.2. Определение обводненности каллусных тканей
3.3.3. Химический анализ каллусной культуры
ГЛАВА 4. РЕГЕНИРАЦИЯ РАСТЕНИЙ ИЗ КАЛЛСНОЙ КУЛЬТУРЫ V II I.
4.1. Побегообразование в каллусной ткани как разновидность морфогенеза в культуре клеток
4.2. Оптимизация методов укоренения побегов
4.3. Адаптация растенийрегенерантов к естественным условиям
ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭНДО И ЭКЗОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ КАЛЛУСНЫХ КУЛЬТУР V
II I
5.1. Проведение подготовительных работ для исследования
эндо и экзогенной активности каллусных культур
v ii i
5.1.1. Подготовка биологического материала и питательных сред к исследованию антибактериальной активности
5.1.2. Подготовка посевного материала микроорганизмов
5.2. Исследование антибактериальной активности биологического материала методом серийных разведений в бульоне
5.3. Изучение эндо и экзогенной активности клеточного сока и культуральной жидкости среды выращивания каллуса
лаванды узколистной различных возрастов
5.3.1. Исследование 7дневного биологического материала
5.3.2. Исследование дневного биологического материала.
5.3.3. Исследование дневного биологического материала.
5.4. Разработка технологии получения биопрепарата на
основе каллусной культуры v ii i.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Имеющиеся литературные данные о биотехнологических исследованиях эфиромасличных культур, и в частности лаванды узколистной, крайне ограничены. В этой связи нами проведены исследования возможностей использования биотехнологических приемов в расширении генофонда исходного материала лаванды узколистной культуры, обладающей огромным биологическим и экономическим потенциалом. Цель и задачи исследования. Целью наших исследований было разработать и оптимизировать биотехнологию получения каллусной культуры и растенийрегенерантов v ii i. Научная новизна. Впервые разработана технология получения каллусных культур v ii i. Мурасиге и Скуга для индукции каллусогенеза содержит следующий гормональный состав 2,4Д 1 мгл, ИУК 0,5 мгл, кинетин 0,5 мгл. Подобраны оптимальные режимы стерилизации растительных эксплантов v ii i. Изучены физикохимические свойства полученных культур, в результате чего выяснено, что каллусная ткань лаванды узколистной содержит все биологически активные вещества, присутствующие в интактном растении. Разработана технология длительного культивирования каллусной ткани лаванды узколистной, позволяющая поддерживать активно растущую каллусную ткань неограниченное количество времени 2,5 года. Впервые разработана технология получения из каллусной культуры лаванды узколистной растенийрегенерантов, включающая в себя семь стадий. Постепенная адаптация растенийрегенерантов к естественным условиям позволило получить нам до ,7 приживаемости. В результате проведенных микробиологических исследований выявлена эндо и экзогенной активности каллусных культур v ii i. На основе каллусной культуры лаванды узколистной получен биопрепарат стимулирующий рост бифидобактерий. Практическая ценность работы. Разработка биотехнологических методов культуры i vi позволяет получить возможность комплексного оздоровления посадочного материала высокий коэффициент размножения возможность получения большого количества растений за короткий срок возможность хранения и накопления растений для высадки в оптимальные сроки возможность тиражирования форм, обладающих пониженной способностью к репродукции в обычных условиях и получение материала с увеличенным потенциалом к дальнейшему размножению за счет повышенной способности к ризогенезу и образованию большого числа побегов у древесных растений. Разработка альтернативных имеющимся технологиям использования лекарственных растений становится возможной благодаря биотехнологическим методам. Использование каллусных культур в получении веществ растительного происхождения позволяет независимо от влияния климатических, сезонных и географических условий стабильно выпускать продукцию в течение года, уменьшить площади почвы, вовлеченной в хозяйственный оборот. i. v ii i. v ii i. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научнопрактических конференциях 7ой Пущинской школе конференции молодых ученых Биология наука XXI века Пущино, , II Московском международном конгрессе Биотехнология состояние и перспективы развития Москва, , v i i, I. , международной конференции Наука и бизнес Поиск и использование новых биомолекул биоразнообразия, окружающая среда, биомедицина. Пущино , 8ой международной Пущинской школеконференции молодых ученых Биология наука XXI века Пущино, , 3й съезд Общества биотехнологов России им. Ю.А. Москва, , XVIII зимняя молодежная научная школа Перспективные направления физикохимической биологии и биотехнологии Москва, . Публикации по теме диссертации опубликовано 7 научных работ. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав теоретических и экспериментальных исследований, выводов, списка литературы, включающего 3 работ, в том числе 0 работ отечественных авторов и работ зарубежных авторов. Работа изложена на 9 страницах машинописного текста, иллюстрирована таблицами и рисунками.