Выделение и изучение белковых компонентов бактерий рожи свиней вакцинного штамма ВР-2

• Автор: Барыкова, Юлия Александровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Открытие iix ii

2.2. Распространение рожи свиней

2.3. Систематическое положение

2.4. Строение микробных клеток iix ii

2.5. Характеристика возбудителя

2.5.1. Морфологические и тинкториальные свойства

2.5.2. Культуральные свойства

2.5.3. Биохимические свойства

2.5.4. Антигенная структура
2.5.5. Устойчивость
2.6. Активность и специфичность шаммов возбудителя рожи свиней
2.7. Серологическая классификация бактерий iix ii
2.8. Эпизоотические данные
2.9. Клинические признаки
2 Диагностики
21 Прижизненная диагностика
22 Посмертная диагностика
2 Иммунитет
21. Вакцины
22. Гипериммуная противорожисгая сыворотка
2 Заключение по литературному обзору
3. Собственные исследования
3.1. Материалы
3.2. Методы
4. Результаты собственных исследований
4.1. Выделение и изучение фракционного состава белковых экстрактов клеток бактерий рожи свиней вакцинного штамма ВР
4.1.1. Получение и изучение фракционного состава ультразвукового гомогената бактерий рожи свиней
4.1.2. Получение и изучение фракционного состава щелочного гидролизата бактерий рожи свиней
4.1.3. Получение и изучение фракционного состава автолизата бактерий рожи свиней
4.1.4. Получение и изучение фракционного состава термоэкстракта бактерий рожи свиней
4.1.5. Анализ результатов получения и изучения фракционного состава белковых экстрактов и белков бактерий рожи свиней
4.2. Изучение серологической активности белковых экстрактов и выделенных белков в РА, РДП и ИФА
4.2.1 Исследование контрольных антиэризипелотриксных сывороток в реакции агглютинации
4.22. Изучение серологической активности белковых экстрактов и белков в реакции диффузионной преципитации РДП
4.23. Изучение серологической активности выделенных белков в иммуноферментном анализе ИФА
4.2.4. Определение антител в антиэризипелотриксных сыворотках в ИФА с использованием белков бактерий рожи
4.3. Получение гипериммунных сывороток мыши и изучение их активности и специфичности в серологических реакциях
4.3.1. Схема иммунизации и обработка сывороток
4.3.2. Изучение активности и специфичности гипериммунных сывороток мыши в РА и РДП
Изучение активности и специфичности сывороток мышей в ИФА
Разработка тестсистемы ИФА для определения антиэризинелотриксных антител Обсуждение результатов исследований Выводы
Практические предложения Список литературы Приложения
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Однако в доступных нам литературных источниках обнаруживаются лишь незначительные сведения о антигенноактивных белках штамма ВР2 бактерий рожи свиней, их иммунобиологических особенностях и участии в выработки антител. Поэтому более детальное исследование белков бактерий рожи свиней штамма ВР2 является актуальным. Цели и задачи исследования. Целыо наших исследований являлось выделение и изучение фракционного состава и серологической активности белковых компонентов бактерий рожи свиней вакцинного штамма ВР2. ИФА для определения уровня антител в гипериммунных антиэризипелотриксных сыворотках. Научная новизна. Впервые выделены белки с м. Да бактерий рожи свиней штамма ВР2 и изучена их серологическая активность и иммунизирующие свойства. Впервые установлено, что белок с м. Да, выделенный из бактериальной клетки вакцинного штамма ВР2 является видоспецифическим и может быть использован для определения антиэризипелотриксных антител. Установлено, что белок с м. Да является типоспецифическим и может быть использован для оценки поствакцинального иммунитета. Разработана тестсистема ИФА на основе белков с м. Да и кДа для определения уровня антител в противорожистых сыворотках. Практическая значимость исследований. Разработаны технология получения компонентов и тестсистема ИФА на основе белков м. Да и м. Да, которые могут быть использованы для выявления антиэризипелотриксных антител в сыворотках крови животных. Разработаны проект нормативнотехнической документации на тестсистему ИФА и методика определения антиэризипелотриксных антител к роже свиней, которые рассмотрены на методической комиссии ВНИТИБП и утверждены директором института. Апробация работы. Материалы диссертационной работы докладывались на ой научной студенческой конференции МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, г. Москва мая г. Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов, г. Щелково 56 октября г. Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов, посвященной летию ВНИТИБП, г. Щелково мая г. Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликованы научных статей. Структура и объелI диссертации. Материалы диссертации изложены на 4 страницах компьютерного текста, и состоят из следующих разделов введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы и практические предложения, список литературы, включающий 7 наименований, из которых 3 отечественных и зарубежных источников, и приложение. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную и практическую ценность. Диссертация иллюстрирована таблицами, рисунками. Данное заболевание открыли независимо друг от друга Пастер , Леффлер 2,8,, выделив возбудителя от павшей свиньи. У людей болезнь впервые описал Розенбах 2,, выделивший культуру эризипелотриксов из кожи больного человека и трижды прививший е себе. Данное заболевание Розенбах назвал ползучей эритемой Бейкера или эризипелоидом. Идентичность обоих микроорганизмов установил Г. Д. Вилявин 2,4,. Рожа свиней септическое антропозоонозное инфекционное, широко распространенное в мире, заболевание, поражающее свиней преимущественно в возрасте от 3 до месяцев 1,8,,. Особенно неблагополучны по этой инфекции страны Центральной, Южной и ЮгоВосточной Европы, реже страны Скандинавского полуострова. Рожа наблюдается также в странах Азии и отмечена в Австралии 1,4,,,,0. Первые сведения о роже свиней в России относятся к г. В г. В г. В настоящее время рожа в стране распространена повсеместно. Ее регистрируют в виде спорадических случаев или энзоотических вспышек 2,8,. В Республике Беларусь РБ ежегодно против рожи вакцинируют все поголовье свиней, однако стойкого благополучия по этому заболеванию не достигнуто. В период с по гг. РБ установлено 0 неблагополучных пунктов, в которых заболело свиней, 0 пало. По статистике в республике ежегодно регистрируется от 6 до неблагополучных пунктов по данному заболеванию ,2.