Разработка технологии глубинного способа культивирования микроорганизмов B. subtilis и B. licheniformis для производства пробиотиков

• Автор: Лиморенко, Анатолий Петрович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 149 с.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Ц

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Выбор направления исследований

2.2. Материалы и методы исследований.

2.2.1. Микроорганизмы

2.2.2. Питательные среды, растворы и реактивы

2.2.3. Методы исследований.

2.3. Результаты исследований.

2.3.1. Разработка технологии глубинного способа культивирования микроорганизмов В. ii 3 и В. iii

2.3.1.1. Разработка состава питательных сред

2.3.1.2. Отработка условий глубинного выращивания бацилл в ферментерах различного объема
2.3.1.3. Стандартизация качества жидких питательных сред для глубинного культивирования В. ii 3 и В. Нii
2.3.1.4. Оптимизация условий приготовления и параметров оценки качества посевных рабочих культур В. ii
и В. iii
2.3.1.5. Оценка эффективности оптимизации состава питательных сред 4 и 7 при глубинном выращивании В. ii 3 и В. iii в ферментерах
2.3.1.6. Воспроизводимость результатов выращивания культур В. ii 3 и В. iii по новой технологии
2.3.2. Сравнительная характеристика препарата биосиори
на, полученного по разработанной и существующей технологиям.
3. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ.
6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
7. БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК.
8. ПРИЛОЖЕНИЯ.
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ
АТЛ аппаратурнотехнологическая линия
БК биологическая концентрация клеток по высеву на
чашки Петри с питательным агаром БАВ биологически активные вещества
БИОР 0,1 биологический реактор вместимостью 0 дм
БИОР 0, биологический реактор вместимостью 0 дм
ВФС временная фармакопейная статья
ГВМУ Главное военномедицинское управление
ГИСК Государственный научноисследовательский инсти
тут стандартизации и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов им. Л.А. Тарасевича ИМВ институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.
Заболотного НАН Украины КМ0,1 культиватор малый вместимостью 0 дм
КГК кислотный гидролизат казеина
КС общая концентрация клеток спор по счету в камере
Г оряева
КУК кукурузный экстракт концентрированный
МПА мясопептонный агар
МИБП медицинские иммунобиологические препараты
МПБ мясопептонный бульон
НК КЖ нативная культура культуральная жидкость
НТД нормативнотехническая документация
НТП научнотехническая продукция
ОП оптическая плотность
ПД посевная доза
ПМФ посторонняя микрофлора
ПС питательная среда
водородный показатель
Т8з тепловая устойчивость клеток, определенная соот
ветственно при температуре С
Ка объемный коэффициент массопередачи
ВВЕДЕНИЕ


Создана, аттестована сертификат производства 4 и лицензирована Лицензия Минздрава РФ , регистрационный номер 2 экологически безопасная технология производства препарата Биоспорин. Создан экспериментальнопроизводственный регламент Биоспорин сухой инв. Центра ВТП БЗ и согласованный с ГИСК им. Л.А. Разработан сборник стандартов предприятия по оценке качестве препарата Биоспорин Арх. Центра ВТП БЗ, инв. Получено заключение комиссии по Государственным испытаниям препарата Биоспорин, приготовленного по технологии Центра ВТП БЗ. В процессе приготовления по указанной технологии опытных и установочных серий пробиотика подтверждена правомерность и удовлетворительная воспроизводимость разработанных процессов и операций, режимов, а также методологии входного, операционного и приемочного видов контроля качества. Характеристики опытных и установочных серий препарата Биоспорин, полученных из глубинных культур В. ЫШв 3 и В. НсБетГоптв , отвечали предъявляемым требованиям, что подтверждено положительными результатами испытаний их качества в ГИСК им. Л.А. Тарасевича. Установочные серии препарата Биоспорин во флаконах 6,7 и 8, изготовленные из глубинных культур бактерий после заключения ГИСК им. Л.А. Тарасевича об их соответствии ВФС 6ВС успешно прошли Государственные клинические испытания. Разработано наставление по применению препарата Биоспорин для лечения и профилактики желудочнокишечных заболеваний у сельскохозяйственных животных. Структура диссертационной работы. Диссертация изложена на . Библиографический список представлен 8 источниками, из них зарубежных автора. На защиту выносится научное положение о том, что разработанная технология глубинного способа культивирования микроорганизмов В. МШэ 3 и В. НсЬетбэтив , позволяет сократить в 6 раз продолжительность выращивания микроорганизмов и в раз увеличить объем выпуска препарата, удовлетворяющего требованиям ВФС 6ВС. Существующая технология производства препарата Биоспорин, разработанная сотрудниками ИМВ НАН Украины и Днепропетровского химфармзавода , , , основывается на применении микроорганизмов В. ЫШз 3 и В. БсБешйяттв в виде смеси вегетативных клеток и споровых форм, выращенных на поверхности агаризованиых ПС суслоагар, обогащенный гидролизатом мяса в биологических матрацах при температуре С в течение соответственно ч и 7 суток. Данная технология является малопроизводительной и дорогостоящей прежде всего изза использования указанного способа репродукции бактерий, сопряженного с высокими материальными и трудозатратами, большим числом операций с применением ручного труда, продолжительностью выращивания клеток до образования спор. Альтернативой поверхностному выращиванию бактерий является разработка новой технологии глубинного культивирования в ферментерах различной вместимости, позволяющей получать требуемое количество биомассы с необходимым качеством и обеспечивающей потребности в препарате биоспорин Минздрава РФ и ветеринарии РФ. Исследованиями различных авторов установлена зависимость признаков спорообразования от источников питания и условий культивирования, в том числе и бактерий рода i 5, , , , , , , , , , , , , , , , 3,4. Микроорганизмы видов В. В. iii могут развиваться на белковых и синтетических ПС с аммонийными солями или нитратами. К бактериям, восстанавливающим нитраты, относят многие штаммы В. Основным источником азотного питания для В. В. iii, как и для других непатогенных аэробных спорообразующих бактерий, является белковое сырье, в частности пептон, соя, казеин, горох и некоторое другое 5, ,, , , , , . Изучение потребностей аэробных спорообразующих бактерий в аминокислотах показывает значительные различия в них для разных штаммов, в том числе и для В. В. iii 5, . Так, для ряда штаммов В. Биоспорин, было установлено, что они не ауксотрофны в отношении какойлибо из аминокислот, содержащихся в испытанных ПС. В тоже время, при использовании белковых субстратов в составе ПС происходит преимущественная утилизация определенных аминокислот. Например, при культивировании В. ПС, содержащей депротеинезированную сыворотку крови, преимущественно используется аргинин, треонин и серии. В тоже время, культуры В.