Разработка методов диагностики микоплазмозов кур и изучение изолятов Mycoplasma gallisepticum, выявленных на территории Российской Федерации

• Автор: Спрыгин, Александр Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 149 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Краткая характеристика микоплазм.

Филогенетические отношения 1уЮ.

Структурная организация клетки МО

Иммунные реакции при заражении МО

Генетические особенности МЮ и МК

Патогенность микоплазм.

Конкуренция за субстрат

Адгезия и цитадгезины Мв и М8

Фенотипическое разнообразие микоплазм

Проникновение в клетку.
Цитопатическое действие Мв.
Выявление МО и Мй при смешанных инфекциях
ПЦР с использованием в качестве матрицы генов 5 рРНК и
гемагглютининов
Сравнение ПЦР с другими методами.
Дифференциация штаммов МО и МЭ.
Роль микоплазм в ассоциированном течении инфекционных заболеваний
Заключение по обзору литературы.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Выбор праймеров для дШ Р и дПЦРРВ.
Оптимизация температуры отжига праймеров
Оптимизация температуры отжига в дГТЦР
Оптимизация температуры отжига в дПЦРРВ
Чувствительность разработанных методов ПЦР
Чувствительность дПЦР.
Чувствительность дПЦРРВ
Специфичность разработанных методов ПЦР.
Выбор внутреннего контрольного образца для дПЦР и дПЦРРВ
Объекты исследования
Выявление МИ и МБ у экспериментально зараженных птиц
Результаты выявления МО и М8 методами ПЦР дПЦР, дПЦРРВ, ПЦР ОарА для МО и ПЦР Б для М8 и выделением
чистой культуры из патологического материала
Выявление МИ и МБ в пробах от птиц с ассоциированными вирусными инфекциями инфекционного бронхита кур, ларинготрахеита, метапневмовирусной и реовирусной инфекций.
Изучение биологических свойств изолятов
Оценка гибели куриных эмбрионов при заражении изолятами
Изучение свойств изолятов с использованием трахеальной
органной культуры
Определение патогенности изолятов для восприимчивых
Анализ нуклеотидных последовательностей .
Анализ изолятов по фрагменту гена А.
Анализ изолятов по фрагменту гена 2.
Анализ изолятов но фрагменту гена v
Анализ изолятов по межгенному спсйсерному участку.
Анализ изолятов по фрагменту гена А из одного
птицеводческого хозяйства
Филогенетический анализ изолятов с определенными
биологическими свойствами
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Результаты выявления и в пробах от птиц с респираторным комплексом, полученных из птицеводческих хозяйств различных регионов РФ и СНГ в период с по гг. Результаты изучения биологических свойств изолятов МО. Результаты анализа первичных нуклеотидных последовательностей фрагментов генов , 2 и рурЛ изолятов Мв, выявленных на территории РФ в гг. Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях ученого совета ФГУ ВНИИЗЖ в гг. Всемирного ветеринарного конгресса по птицеводству Китай, , международных ветеринарных конференциях по птицеводству Украина, , Международной конференции, посвященной генетике микроорганизмов и эволюции инфекционных заболеваний США, . Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано научных работ, из них 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 3 работы в материалах международных конференций, 4 работы в материалах конгрессов за рубежом. Структура и объем работы. Работа иллюстрирована таблицами и рисунками. Список использованной литературы включает 0 источников. Микоплазмы представляют большую группу патогенных и апатогенных микроорганизмов, имеющих общие морфологические и физиологические признаки. Все микоплазмы грамотрицательны, морфологически чрезвычайно полиморфны и являются частыми контаминантами клеточных культур . Характерными признаками многочисленной группы микоплазм являются отсутствие клеточной стенки, роль которой выполняет двухслойная мембрана, и фильтруемость через бактериальные фильтры 0. Класс i состоит из 4 порядков и 5 семейств и включает следующие роды , , i, и . Семейство объединяет около 0 известных видов, обнаруженных у млекопитающих, птиц, рыб, насекомых и растений 0. Данное семейство содержит два рода и . Для птиц наибольшую опасность среди всех микроорганизмов класса i представляют и . является возбудителем острых и хронических респираторных заболеваний, аэросаккулита и ряда других хронических заболеваний птиц. широко распространенный вид микоплазмы птиц, приносящий значительные экономические потери промышленному птицеводству 5. Также, возбудитель инфекционного синусита у индеек. Микоплазмоз сопровождаются выделением назального экссудата, кашлем и удушьем. У индеек может наблюдаться значительное опухание инфраорбитальных синусов. Для респираторного микоплазмоза характерна невысокая заболеваемость и смертность до , которая зависит от присутствия ассоциированной вирусной или бактериальной инфекцией. колонизирует эпителий скакательных суставов и респираторного тракта, а также сухожилия. Острые инфекции, вызванные , часто проявляются у птиц в возрасте от 4 до недель. Смертность для данного заболевания невысока . Таким образом, широкое распространение этих видов микоплазм и их важная этиологическая роль в развитии респираторной патологии у промышленных птиц делают актуальной задачу их подробного изучения. Филогенетические отношения . Анализ генетического материала бактерий с использованием современных методов, особенно последовательностей гена рРНК, помог глубже изучить эволюцию микроорганизмов 8. Однако позже было установлено, что филогенетический анализ по одному гену не может показать все эволюционные взаимоотношения бактерий, особенно близкородственных видов, которые формировали свои эволюционные ветви почти в одно время . Филогенетический анализ на основе функционально различных генов не всегда возможен по причине горизонтального переноса или высокого уровня изменчивости отдельных генов , . Среди представителей класса i подобный анализ был проведен i , . В его исследовании подвергнуты анализу, 7, М. М. i 2 0, М i 0, М. 0, М. М. i 6, М. М. i , . 0, i i 1, i 2 по последовательностям и рРНК генов.