Биотехнологические приемы расширения исходного материала для селекции люпина

• Автор: Костюченко, Дина Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Брянск
• Количество страниц: 132 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Методы культуры ткани в селекции растений.

1.2 Культивирование изолированных тканей и клеток растений

1.3 Методы получения новых форм растений

1.3.1 Мутационная изменчивость.

1.3.2 Сомаклональная изменчивость и клеточная селекция.

1.3.3. Использование гаплоидов в селекции. 1

1.3.4 Использование методов генетической инженерии.

1.4 Практическое значение клонального микроразмножения.

2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Культура верхушечных и пазушных почек.
3.1.1 Пролиферация верхушечных и пазушных меристем
3.1.2 Оптимизация метода укоренения побегов.
3.1.3 Адаптация к естественным почвенным условиям.
3.2 Культура незрелых зародышей.
3.3 Трансформация люпина с помощью агробактерий.
выводы
Практические рекомендации производству
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Методы культивирования клеток растений к настоящему времени разработаны до такой степени, что любой вид растения при использовании определенных методических подходов может быть регенерирован из каллусной ткани. Скорость регенерации растений в культуре тканей в зависимости от вида сильно варьирует i, , , v . Для каждого вида растения могут быть разработаны несколько методов регенерации, однако, как правило, лишь один оказывается наиболее эффективным i, . Регенерация растений это краеугольный камень всей методологии культуры тканей. Без регенерации становятся бесполезными исследования по гибридизации протопластов, росту и диффереицировке, получению генетически измененных растений, культуре пыльников, промышленному клонированию с целью быстрого размножения необходимых или трудно размножаемых видов растений, получению незаражщшых растений с помощью культур меристем, а также исследования по многочисленным регуляторам роста. Бутенко, . Регенерация растений из культуры тканей достигается использованием одного из трех методов культуры зародышей, соматического эмбриогенеза и органогенеза. Культура зародышей представляет собой стерильную культуру зиготических зародышей. Зародыш изолируют из семени или семяпочки на разных стадиях развития и помещают в искусственные условия, заменяющие эндосперм. Культура изолированных зародышей используется широко при гибридизации плодовых растений Курсаков, Панфилкина, Уннкеев и др. Джигадло, Сковородников, , при междвидовых скрещиваниях ячменя с рожыо и пшеницей Першина, Исаева, , в межвидовой гибридизации томатов Воробьева, Приходько, , лука Титова и др. , . Эмбриокультура может быть использована для ускорения прохождения жизненного цикла растения, а это может существенно сократить длительность селекционного процесса. Показано, что время генерации озимой пшеницы можно сократить примерно на дней, если дневные изолированные зародыши прояровизировать i vi , i, . Соматические зародыши представляют собой двухполюсные структуры, физически не прикрепленные к ткани, из которой происходят. В дальнейшем они могут развиваться и прорастать в регенеранты через стадии, соответствующие тем, что встречаются при развитии зиготы. Подобное явление можно встретить у многих видов растений в условиях i vi при работе с культурами различных типов клеток, тканей и органов , ii. ii . Образование соматических зародышей из культур клеток, тканей и органов может происходить прямым или непрямым путем. Прямой соматический эмбриогенез заключается в формировании вегетативного зародыша из одной или нескольких клеток ткани экспланта без стадии образования промежуточного каллуса. Мсii . Такое явление наблюдается у цитрусовых, где ткани нуцеллуса дают начало нуцеллярным зародышам как i viv, так и i vi, а также в других случаях, когда культивируемые незрелые зародыши начинают почковаться. Однако по сравнению со случаями непрямого эмбриогенеза эти примеры редки . , ,. Во многих работах приводили самые ранние этапы эмбриогенеза . . ii, , тогда как формирование растснийрегенерантов описывалось гораздо реже. В настоящее время регенерация растений из соматических зародышей в производстве используется для пальм и некоторых хвойных ii, Машкова, Буторина, , размножение которых обычными методами затруднено. Основная проблема этого метода, ограничивающая широкое его распространение, заключается в генетической нестабильности растенийрегенерантов, полученных с помощью соматического эмбриогенеза. Непрямой эмбриогенез включает образование и рост каллуса наиболее часто на среде, содержащей высокие концентрации ауксина 2,4Д, предшествующие формированию биполярных зародышей из предзародышей. Обычно в образовании каллуса участвует лишь небольшое число клеток экспланта. Эти клетки располагаются, как правило, в поверхностных слоях каллуса или находятся в физическом контакте с питательной средой. Каллус по своей природе гетерогенен и развитие зародышей происходит асинхронно , i . , , .