Биотехнология получения лекарственных и иммуногенных липосомальных композиций, используемых в лечении экспериментальных особо опасных инфекций и получении сырья для производства медицинских иммунобиол

• Автор: Таран, Татьяна Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 205 с. : 7 ил.

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРЛТРЫ.

1.1 Принципы включения в липосомы веществ различной химической природы и стабилизации липосом. Влияние липидных везикул па гомеостаз макрооргапизма.
1.2 Использование липосом для конструирования вакцин и лечения особо опасных инфекций.

1.2.1 Липосомы в иммунологических исследованиях

1.2.2 Лечение особо опасных зоонозных инфекций липосомальными формами антибиотиков.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВМ1ИЯ

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАИЯ

2.1 Материалы исследования

2.2 Методы исследования.

3 ВЫДЕЛЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ, ИСПОЛЬЗУЕМОГО

ДЛЯ КОНСТРУИРОВАНИЯ ЛИПОСОМ.
3.1 Разработка биотехнологии экстракции и очистки фосфолипидов из головного мозга крупного рогатого скота.
3.2 Основные физические параметры липосом, полученных различными методами
4 БИОТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПА
РАТОВ АНТИБИОТИКОВ И АНТИГЕНОВ, ИХ ХАРАКТЕРИСТИКА
4.1 Разработка биотехнологии получения липосом с антигенами чумного микроба.
4.1.1 Включение в липосомы ФI чумного микроба.
4.1.2 Включение в липосомы ЛГ1С чумного микроба.
4.2 Оптимизация включения антибиотиков в липосомы.
4.2.1 Оценка влияния полученных липосом и липосомальиых
форм антибиотиков на факторы неспецифической резистентности макроорганизма в эксперименте
5 СТАБИЛИЗАЦИЯ ЛИПОСОМ С ВКЛЮЧЕННЫМИ АНТИБИОТИКАМИ И ОЦЕНКА ИХ БЕЗВРЕДНОСТИ ДЛЯ МАКРООРГА
НИЗМА.
5.1 Стабилизация липосомальиых форм антибиотиков методом
лиофильного высушивания.
5.2 Изучение защитного действия атокоферола ацетата от перекисного окисления свободных и липосомальных липидов
на разных стадиях их приготовления и хранения.
5.3 Оценка безвредности полученных липосом и липосомальных антибиотиков для макроорганизма в эксперименте
6 ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ СКОНСТРУИРОВАННЫХ ЛИПОСОМ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ АНТИБИОТИКАМИ, РАЗРАБОТКА СХЕМ ЛЕЧЕНИЯ
6.1 Лечение экспериментальной сибиреязвенной инфекции липосомальными антибиотиками.
6.2 Лечение экспериментальной туляремийной инфекции липосомальными антибиотиками
6.3 Лечение экспериментальной чумы липосомальпым и свободным стрептомицином
6.4 Лечение экспериментального бруцеллеза липосомальными антибиотиками
7 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЛИПОСОМ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ АНТИГЕНАМИ ЧУМНОГО МИКРОБА В РАЗРАБОТКЕ БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННЫХ СЫВОРОТОК И ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЧУМЫ .
7.1 Биотехнология получения гипериммунных кроличьих антифракционных сывороток
7.2 Применение сконструированных липосомальных форм антигенов чумного микроба в специфической профилактике экспериментальной чумы.
7.2.1 Оценка протективного действия липосомальной фракции 1 чумного микроба в эксперименте
7.2.2 Оценка гуморального ответа при иммунизации липосомальными формами антигенов чумного микроба в эксперименте
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


В качестве реагентов, способных ковалентно связываться с компонентами мембраны липосом и с иммобилизируемым биополимером, используют глютаровый альдегид, димстилсуберимидат 5 триоксиметилфосфин Ыгидроксисукцинимидилдитиопронионат, образующий ковалентную триэфирную связь 3 и другие. Способность гликопротеида авидина формировать очень прочную связь с биотипом, являющимся биологически активным веществом из группы витаминов, предопределила разработку методов фиксации на поверхности липосом различных веществ при формировании комплекса авидинбиотин. С этой целью биотилированные липиды встраивают в мембрану липосом, а авидин конъюгируют с веществом чаще всего с белком, которое предполагают иммобилизовать на поверхности липосом . В некоторых случаях биотилируют как липосомы, так и белки, а авидин используют для фиксации на бислойных везикулах модифицированных биотином белков, сохраняющих при этом свои функции , 6, 0, 4. Для решения ряда прикладных задач разработаны способы иммобилизации в липосомы катализаторов коллоидные платина и золото, полупроводников и магнитных частиц. Считают, что эти липосомы могут найти применение при осуществлении фотолиза, фотовосстановления воды и в ряде других процессах 9. Включение в липосомы магнитных материалов делает их магнитоуправляемыми 7, 1. Высокая биологическая эффективность действия инкапсулированных веществ определяется стабильностью липосом при введении в организм. Наиболее приемлемой во многих отношениях формой готовых препаратов является лиофилизированный биоматсриал 4. Проницаемость липосомальных мембран для воды обеспечивает возможность лиофильного высушивания липосом с последующей регидратацией, позволяющей не только получать исходную форму липосом, но и включать при этом в их внутренний объем водную фазу с растворенными в ней различными веществами 0. Лиофильно высушенные липосомы длительно сохраняют свои исходные свойства и мало подвержены воздействию неблагоприятных факторов внешней среды, приводящих к нарушению структурной целостности липидных мембран . Лиофилизация липосом предусматривает предварительное их низкотемпературное замораживание, которое проводят в присутствии различных криопротекторов, стабилизирующих внешний и внутренний слои липосомальной мембраны. Последующий режим лиофилизации липосом, как правило, мало чем отличается от технологии высушивания различных биологических препаратов . Таким образом, используя описанные методические приемы, удается получать стабильные мульти и моноламеллярные липосомы, имеющие широкий спектр липидного состава мембран, содержащих во внутреннем объеме или на поверхности различные по природе и свойствам вещества. Однако в каждом случае, в зависимости от целей, необходима разработка технологии получения и стабилизации конкретных препаратов. Конструирование различных липосомальных форм ВЛВ предопределяет необходимость исследования механизмов их взаимодействия с различными клетками и тканями макроорганизма ,, , 7, 6. Механизм взаимодействия различных клеток организма е липосомами зависит от их химического состава , 4, от наличия различных веществ внутри липосом или на поверхности их мембран , 3, 8, 4, от присутствия в реакционной среде ионов кальция 8, сыворотки крови 3, 4 и ряда других факторов. Так, жидкие липосомы, независимо от величины их заряда, хорошо связываются с клеточными мембранами в отличие от твердых, положительно заряженных липосом, которые фиксируются клетками гораздо эффективнее нейтральных и отрицательно заряженных липидных везикул 7. Изза возможного липидного обмена между клетками и липосомами последние могут изменить исходный липидный состав, а следовательно свое фазовое состояние и механизм взаимодействия с клеткой 7, 8. Вступая в различные взаимоотношения с клетками макроорганизма, подвергаясь биодеградации, компоненты бислойной мембраны липосом активно включаются в метаболические процессы, вызывая определенные изменения биохимических показателей и функционального состояния отдельных органов и систем организма в ответ на введение липидных везикул 1,3, , 5.