Совершенствование экспрессных методов индикации микобактерий туберкулеза

• Автор: Ефременко, Дмитрий Витальевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 169 с. : 9 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Анализ эпидемиологической обстановки но туберкулзу и современного состояния экспрессдиагностики его возбудите

ля обзор литературы

1.1. Эпидемиологическая обстановка по туберкулезу в России.

1.2. Анализ современного состояния конструирования диагностических препаратов и индикации возбудителя туберкулеза.

1.3. Носители иммобилизованных систем тврдофазного иммуноанализа

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. Материалы и методы

2.1. Штаммы микроорганизмов, взятые в работу

2.2. Питательные среды, условия культивирования микроорганизмов

2.3. Объекты исследования

2.4. Получение антигенных комплексов микроорганизмов
2.5. Лабораторные животные, использованные в экспериментах
2.6. Методы иммунизации животных
2.7. Методы контроля антигенов и сывороток
2.8. Выделение иммуноглобулинов
2.9. Получение и контроль иммунофлуоресцирующих конъюгатов
2 Получение и контроль липосом
2 Получение и контроль иммуноферментных конъюгатов
2 Физикохимические методы
2 Иммунохимические методы анализа
2 Лиофилизация биологического материала
2 Характеристика реагентов, используемых для получения магно иммуносорбентов
2 Методы математической и статистической обработки материалов
ГЛАВА 3. Получение высокоактивного специфического биологическою сырья антигенов и антител для конструирования диагностических препаратов
3.1. Получение антигенных комплексов микобактерий туберкулза
3.2. Получение специфической туберкулзной сыворотки
ГЛАВА 4. Получение нммуноферментных препаратов для экспрессдиагностики туберкулза
4.1. Получение иммунопероксидазного конъюгата
4.2. Получение липосом и лигюсомальноиммунопероксидазного
конъюгата д
ГЛАВА 5. Получение туберкулзных суспензионных диагностику мов
5.1. Биотехнология изготовления латексного диагностикума
5.2. Разработка биотехнологии получения алюмосиликатного диагностику м а
ГЛАВА 6. Конструирование магнитоунравляемых иммуносорбентов для экспрессдиагностики микобактерий туберкулза
6.1. Разработка метода селективного концентрирования возбудителя туберкулза на магиоиммуносорбенте с последующей постановкой иммуноферментного анализа.
6.2. Разработка метода селективного концентрирования возбудителя туберкулза на магиоиммуносорбенте с последующей постановкой количественного иммунофлуоресцентного анализа 1 ГЛАВА 7. Изучение диагностической ценности разработанных диагностикумов и тестсистем для выявления антигена возбудителя
туберкулеза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Научнометодические основы биотехнологии изготовления тврдофазных микрогранулированных аффинных магноиммусорбентов для избирательного концентрирования микобактерий и их использования в экспрессных методах ИФА, КИФА. Разработанные препараты позволяют повысить чувствительность более чем в раз при увеличении вероятности выявления микобактерий за счт селективного концентрирования антигена на антителах, находящихся на тврдой матрице. Основные результаты диссертационной работы были представлены на Всероссийской научнопрактической конференции Медицинская микробиология XXI века Саратов, сентября г. Ставрополь, февраля г. VI Межгосударственной научнопрактической конференции государствучастников СНГ Санитарная охрана территорий государств участников содружества независимых государств проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях Волго1рад, . Основное содержание диссертации отражено в опубликованных научных работах 2 патента на изобретение, 1 депонированная работа и 7 трудов в научных сборниках. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и приложений. Она изложена на 8 страницах, содержит таблиц и рисунков. Список литературы включает 8 отечественных и зарубежных литературных источников. ГЛАВА 1. Эпидемиологическая обстановка по туберкулезу в России. Правительство РФ утвердило Перечень социально значимых и опасных для окружающих заболеваний. К первой группе отнесн туберкулз наряду с такими заболеваниями как гепатит В, С, СПИД и некоторые другие Алексеев П. В целях законодательного регулирования мероприятий по борьбе с инфекционными заболеваниями в г. Федеральный закон О предупреждении распространения туберкулза в РФ. Эпидемиологическая обстановка по туберкулзу остатся напряжнной. Туберкулз одна из главных причин высокой заболеваемости, хронизации и смертности, особенно в развивающихся странах Петрухина М. И., Русакова Е. В., Ющенко Г. В., , К, i . В соответствии с данными ООН, населения инфицирована МТБ микобактериями туберкулза, каждый год выявляется 8 млн. ТБ процесса, ведущего к смертности 3 млн. В России в г. Показатель заболеваемости ,7 на 0 тыс. По сравнению с г. Ильин И. А., . Туберкулз человека вызывается чаще всего МТБ более случаев туберкулзной инфекции. Род i включает более видов и подвидов микобактерий патогенных М vi, М. М. ii фотохромогенные, М. Не менее из них играют важную роль в патологии человека, являясь возбудителями туберкулза, микобактериозов нетуберкулезных кислотоустойчивых микобактерий, проказы Борисов Л. Б., . К нетуберкулзным микобактериям НТМ относится и язва Бурули ЯБ, вызываемая М. До сих пор как эпидемиология ЯБ изучена недостаточно, так и резервуары и способы передачи данного заболевания. В природе свободно живущие фагоцитирующие простейшие играют важную роль как возможные естественные хозяева и резервуары для микобактерий, включая М. В впервые заподозрили водяное насекомое i как пассивный резервуар возбудителя ЯБ. Эта находка позволила предполагать возможную роль насекомых в передаче НТМ от животных к человеку . Географические и климатические изменения могут оказывать влияние на эпидемиологию НТМ. ПЦР образцами из окружающей среды и частотой ЯБ на соответствующей территории. Пространственновременные исследования окружающей среды важны и могут иметь ценность при выявлении возбудителя ЯБ и НТМ у человека и животных. Микроскопически они неотличимы от i i. Патогенность туберкулзных микобактерий связана с прямым или иммунологически опосредованным повреждающим действием липидов. Их действие выражается в развитии специфических гранулм и поражении тканей. Для вирулентных штаммов характерно наличие так называемого кордфактора гликолипида, состоящего из трегалозы и димиколата. Он разрушает митохондрии клеток инфицированного организма, тем самым нарушая функцию дыхания. Патогенные для людей возбудители могут вызывать местные и генерализованные туберкулзоподобные процессы. Частота выделения и этиологическое значение указанных микобактерий зависит от их распространенности и состояния антиинфекционной защиты макроорганизма.