Разработка промышленных технологий получения новых медицинских материалов на основе модифицированных волокнообразующих полимеров, содержащих биологически активные белковые вещества

• Автор: Белов, Алексей Алексеевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 428 с. : ил.

1.1. Активация и свойства некоторых волокнообразующих текстильных носителей на основе целлюлозы и поликапроамнда для иммобилизации биологически активных веществ

1.1.1. Получение и свойства диальдегидцеллюлозы

1.1.2. Получение и свойства поликапроамидного носителя активи

рованного глутаровым диальдегидом

1.1.3. Получение поликапроамидного носителя с собственными альдегидными группами

1.2. Получение и свойства ферментов, иммобилизованных на производных целлюлозы и поликапроамида
1.3. Использование нативных и иммобилизованных ферментов для лечения ран различной этиологии

Глава И. Методы и материалы

II. 1. Материалы

. 2. Методы модификации текстильных носителей. Определение

степени модификации носителя

II.3. Определение протеолитической активности но казеину
.4. Определение ферментативной активности по азоколу
.5. Определение ферментативной активности по паранитроанилиду бензоилО, аргинина
.6. Определение ферментативной активности по коллагену
Глава III.
Ш.2.
П1.2.1.
Ш.2.3.
1.3.
Ш.3.2.
Глава IV.
Разработка методов оценки функциональных свойств созданных материалов
Особенности при работе с иммобилизованными на модифицированных текстильных носителях биологически активными веществами
Методы определения количества иммобилизованного вещества
Определение количества иммобилизованного белка методом ЛоуриГ артри
Определение количества иммобилизованного белка гистохимическим методом Гурвича
Определение количества иммобилизованного белка по спектрам отражения
Определение количества иммобилизованного белка с помощью метода Брэдфорда
Методы определения ферментативной активности иммобилизованных препаратов
Определение протеолитической активности
иммобилизованных препаратов по казеину Определение ферментативной активности
иммобилизованных препаратов по азоколлу
Определение амидазной активности иммобилизованных
препаратов по ВгАЫА
Технологии иммобилизации трипсина на модифицированных текстильных носителях и исследование свойств полученных иммобилизованных препаратов
Ь
IV.1.1. Иммобилизация трипсина на текстильные носители.
Изменение протеолитической активности иммобилизованных препаратов трипсина в процессе хранения
1V.1.2. Действие гамма облучения на препараты иммобилизованного трипсина
IV.2. зависимость протеолитической активности иммобилизованных препаратов трипсина
IV.3. Инактивация иммобилизованного трипсина в модельных
растворах.
IV.4. Влияние некоторых физиологическиактивных веществ на
протеолитическую активность немодифицированного трипсина и трипсина, иммобилизованного на текстильных носителях
IV.5. Токсикологические и фармакологические исследования
IV.6 Технологическая схема производства препаратов иммобилизованного трипсина
Глава V. Разработка технологии получения препаратов иммобилизованных протеолитических комплексов из отходов переработки пищевого сырья на. модифицированных текстильных носителях и исследование свойств полученных иммобилизованных композитов
V Иммобилизация на диальдегидцеллюлозе коллитина и исследование свойств полученных иммобилизованныхпрепаратов
V.2. Иммобилизация на различных текстильных носителях
протеолитического комплекса из гепатопанкреаса краба ГЖ и исследование свойств полученных иммобилизованных препаратов
У.2.1.
У.2.3.
У.2.5.
V.2.6. Глава VI.
VI. 2.
VI. 2.1.
VI. 2. 2. VI. 3.
Иммобилизация ПК на.различные текстильные носители Изменение протеолитической активности иммобилизованных препаратовв процессе хранения рНзависимость протеолитической активности немодифицированного ПК и ПК, иммобилизованного на модифицированных текстильных носителях Инактивация ПК и иммобилизованного на текстильных носителях ПК в модельных растворах Влияние некоторых физиологическиактивных веществ на протеолитическую активность немодифицированного ПК и ПК, иммобилизованного на текстильных носителях Влияние белковых ингибиторов, на ферментативную активность немодифицированного ПК и ПК, иммобилизованного на текстильных носителях Медикобиологические исследования препаратов
иммобилизованного ПК
Разработка технологии получения препаратов
иммобилизованного поливалентного ингибитора
протеиназ ПИП на модифицированных текстильных носителях н исследование свойств полученных препаратов иммобилизованного ингибитора Взаимодействие трипсина с раствором ПИП Иммобилизация ПИП на текстильных носителях. Исследование свойств полученных композиций Иммобилизация ПИП на целлюлозе и д иал ьдеги дцел л юл озе
Иммобилизация ПИП на поликапроамидпом текстильном материале
Определение ингибиторных свойств иммобилизованного ПИП
2
VI. 5.
VII.
Кинетика взаимодействия раствора трипсина с
текстильными носителями, содержащими ПИП Действие уизлучения в стерилизующей дозе на
иммобилизованный и кристаллический ПИП Техникоэкономическое обоснование использования препаратов иммобилнзованых ферментов Заключение и выводы.
Список литературы


Однако в целом ряде случаев для изготовления изделий медицинского назначения необходимы не только традиционные природные и химические волокна и нити, но и волокнистые специальные материалы, обладающие особыми свойствами антимикробными, гемостатическими, анестезирующими, и др. К биологически активным волоки истым материалам медицинского назначения относятся и материалы, содержащие разнообразные БАВ. В настоящее время имеются возможности создания волокнистых материалов, обладающих биологической активностью самого различного спектра 3, , Такого рода волокна имеют значение не только для медицинской практики и, особенно, операционной хирургии, но и для различных отраслей техники и биологии. При модификации волокон с целью придания им биологической активности связь между полимерной матрицей и биологически активным веществом может быть ковалентной, координационной и ионной. Выбор каждого из названных типов связи определяется практическим назначением создаваемых материалов . Обычно, перевязочные лечебные материалы содержат ферменты или иные БАВ связанные с носителем тремя видами взаимодействий механически включенными, адсорбированные за счет физических или ионных взаимодействий и. Химическая модификация белковой глобулы может существенно влиять на стабильность ферментов 3,4,9,,,,. Изменение стабильности ферментов в этом случае представляет собой сложный процесс, обусловленный, в первую очередь, механизмом инактивации ферментов. В результате иммобилизации ферментов удается повысить их стабильность, что может быть объяснено следующими причинами 3,9,, изменение конформации фермента при взаимодействии с носителем и изменение микроокружения ферментной молекулы при переходе из раствора в микросферу носителя. Однако не вызывает сомнений тот факт, что инактивация ферментов под действием температуры сопровождается значительными конформационными изменениями белковых молекул, разворачиванием спирали в первую очередь. Действительно, уже первые исследования показали, что в результате химического присоединения некоторых ферментов к носителям возрастает их термостабильность. Поскольку наблюдается стабилизация разнообразных ферментов различными полимерамимодификаторами, то можно полагать, что главная причина стабилизации образование ковалентных связей между ферментом и матрицей. Действительно, образование ковалентных связей между ферментом и жестким носителем может стабилизировать нативную конформацию фермента 3,4,8,,,,. С помощью различных физических методов было обнаружено, что молекулярная структурабелка после егоприсоединения к носителю становится более жесткой и, следовательно, конформационные переходы в белках сильно затруднены ,. Таким образом, с большим основанием можно полагать, что осуществление многоточечного связывания фермента с носителем будет стабилизировать фермент. Однако реализовать этот принцип на практике достаточно трудно поверхность носителя и поверхность фермента некомплементарны, в то время как комплементарность необходимое условие для реализации благоприятного для стабилизации фермента многоточечного взаимодействия. В противном случае трудно ожидать существенного увеличения жесткости всей молекулы, более того, может наблюдаться обратный эффект дестабилизация глобулы фермента. Большой практический смысл имеет влияние химической модификации иммобилизации на сродство ферментов к эндогенным ингибиторам. В организме человека содержится. Более десяти белковых ингибиторов протеина присутствуют в плазме крови. С точки зрения целей иммобилизации протеиназ, среди основных ингибиторов плазмы крови в первую очередь представляют интерес два из них. Это Хгантитрипсин а АТ, представляющий собой гликопротеид с молекулярной массой 0 Да, и 2 макроглобулин а2МГ, белок, имеющий сложную четвертичную структуру. Молекулярная масса а2МГ, по данным различных авторов, колеблется в пределах от до Да. МГ легче образует комплексы с трипсином, чем оиАТ, т. МГ. И лишь по мере истощения связывания а2МГ трипсин начинает взаимодействовать с а АТ. Следует также отметить, что комплекс трипсин а2МГ значительно более прочен, чем комплекс трипсинсе. АТ 2,3,4,6,8,,,. Полимерная модификация носителя может оказывать значительное влияние на изменение специфичности ферментов. Большую роль в этом играет заряд полимера.