Разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в производственной упаковке (ампуле)

• Автор: Ефременко, Анна Александровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 113 с. : 4 ил.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современное состояние и перспективы совершенствования

эффективности чумных вакцин

1.2 Оптимизация этапов биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой.

1.2.1 Некоторые вопросы управляемого культивирования биомассы вакцинного штамма ЕВ

1.2.2 Пути совершенствования биологических показателей вакцины чумной живой на этапах сведения, разлива и лиофилизации бактериальной суспензии.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Материалы.

2.2 Методы исследования.

Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПРЕПАРАТА ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБОВ И ОБЪЕМА ВАКЦИННОЙ СУСПЕНЗИИ В АМПУЛЕ
Глава 4. БИОТЕХНОЛОГИЯ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКОДОЗ В АМПУЛЕ.
4.1 Приготовление посевной культуры, засев маточной культуры в ЛКМШ, условия культивирования вакцинного штамма чумного микроба
4.2 Смыв бактериальной массы с поверхности агара с последующим приготовлением необходимой концентрации микробных клеток, разлив, лиофилизация вакцины.
4.3 Некоторые вопросы стабилизации вакцинной суспензии в производстве вакцины ЕВ в зависимости от условий лиофилизации.
4.4 Оптимизация параметров вакцинной суспензии в биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой глубинным методом культивирования
Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСШКА ПАРАМЕТРОВ И ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКОДОЗ В АМПУЛЕ И КОММЕРЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА.
5.1 Сравнительная характеристика образцов вакцины чумной живой сухой в зависимости от параметров вакцинной суспензии по критериям жизнеспособности, термостабильности, иммуногснности
5.2 Изучение реактогенности различных образцов вакцины чумной живой сухой.
5.3 Оценка экономической эффективности вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человекодоз в ампуле
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ
ЛИТЕРАТУРЫ.
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
Ф1 фракция 1 чумного микроба абсолютно смертельная доза для экспериментальных зараженных животных доза микроба, вызывающая гибель экспериментально зараженных животных V антиген чумного микроба ОСА основной соматический антиген Л ПС липополисахарид ЛКМ1П аппарат культивирования микробов Шестерснко
ГИСК государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А.Тарассвича ЕД иммунизирующая доза, защищающая зараженных животных
ж.м.к. живые микробные клетки КОЕ колониеобразующие единицы ЛБТК лаборатория биологотехнологического контроля i минимальное значение шах максимальное значение млрдмл миллиардмиллилитр
НД нормативная документация обмин оборотов в минуту ОСО отраслевой стандартный образец
логарифм концентрации водородных ионов тыс. тысяч
ФС и РП фармакопейная статья и регламент производства
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Из факторов, влияющих на выживаемость микроорганизмов в процессе высушивания и дальнейшего хранения, наиболее важную роль играет состав защитной среды и окружающая температура. В настоящее время среды высушивания достаточно хорошо изучены, определен необходимый состав ингредиентов, включающий кристаллоидные, коллоидные вещества и антиокислители, но выбор их осуществляется в основном эмпирически, без достаточного учета современных знаний механизма защиты бактериальных клеток на различных этапах лиофилизации и хранения. Несмотря на то, что основные этапы производства коммерческого препарата строго регламентированы, некоторые количественные параметры вакцины колеблются в значительных пределах. Например, общее число микробных клеток в 1 мл вакцинной суспензии согласно регламентирующей документации составляет от до 0 млрд. Важным моментом биотехнологии производства чумной вакцины является оптимизация процентного содержания компонентов на единицу взвешенных в среде микробных клеток и отработка режимов лиофилизации, которые позволили бы достигать низкой потери массы при высушивании. В контексте сказанного следует обратить внимание на разработку биотехнологии изготовления чумной вакцины со сниженным числом человекодоз в ампуле. Указанная форма является удобной для проведения иммунизации сравнительно небольших по численности коллективов, когда ресуспендированный препарат не может длительно храниться и должен быть сразу же использован. Изменение параметров указанной вакцины касается не только густоты вакцинной суспензии, что отражается на количественном соотношении микробных клеток и стабилизатора, но и уменьшенного объема вакцины в ампуле. Экспериментально обосновать оптимальное количество человекодоз в ампуле с коммерческим препаратом с минимальным показателем поврежденных микробных клеток в нем в процессе хранения. Стабилизировать показатели жизнеспособности и термостабильности бактерий в препарате вакцины чумной живой сухой за счет более оптимального соотношения действующих компонентов стабилизатора на единицу взвешенных в нем живых микробных клеток. Научно обосновать достижение в условиях регламентированного режима лиофилизации состояния более глубокого анабиоза микробных клеток, характеризующегося показателем потери в массе при высушивании,не превышающем 1,5. Определить в эксперименте качественные преимущества вакцины чумной живой сухой с концентрацией микробных клеток в суспензии МО 4, разлитой в объеме 1 мл в ампуле, перед коммерческим препаратом. Разработать и внедрить в производство вакцины чумной живой сухой на этапе сведения и разлива методологию получения препарата с меньшим числом подкожных внутрикожных человекодоз в ампуле , отвечающей качественным фебованиям нормативной документации. Научная новизна работы. Экспериментально обосновано, что вакцина со сниженной концентрацией микробов в ампуле вследствие более сбалансированного соотношения микробных клеток и защитной среды, обладает новыми качественными характеристиками, превосходящими стандартные коммерческие образцы жизнеспособность, термостабильность. Показано, что в условиях регламентированного режима лиофилизации повышается эффективность стабилизации свойств микробных клеток у препарата с меньшей концентрацией вакцинной суспензии и снижением ее объема в ампуле. Критерием более глубокого анабиоза рекомендован показатель потери в массе при высушивании, не превышающий 1,5. При индивидуализации режима высушивания для данного препарата длительность сушки сокращается с до часов. Впервые оптимизировано количество человекодоз в ампуле с коммерческим препаратом, обладающим преимуществом в области практического применения, заключающемся в удобстве при иммунизации небольших коллективов от до человек. Препарат наиболее эффективен при использовании в регионах с жарким климатом и специфическими условиями вакцинации, например, в немногочисленных, расположенных на значительном расстоянии друг от друга точках стойбищах скотоводов, охотников и т. Впервые отработана и внедрена в биотехнологию производства вакцины чумной живой сухой и соответственно в нормативную документацию концентрация микробных клеток в вакцинной суспензии ю в объеме 1 мл в ампуле.