Конструирование диагностических препаратов для экспрессных методов лабораторной диагностики бруцеллеза и детекции его возбудителей

• Автор: Касторная, Маргарита Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 189 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика используемых штаммов микроорганизмов.

2.2. Методы выделения антигенов

2.3. Разрушение микробных клеток.

2.4. Определение оптической плотности.

2.5. Метод количественного определения белка.

2.6. Метод иммунизации животных

2.7. Методика выделения иммуноглобулинов ПЭГом.

2.8. Постановка реакции радиальной иммунодиффузии
по Оухтерлони
2.9. Метод постановки реакции Райта
2 Метод получения иммунопероксидазных конъюгатов и
определение их активности в ИФА
2 Получение флюоресцирующих иммуноглобулинов
2 Иммунофлюоресцентный анализ.
21. Прямой метод окрашивания
22. Реакция непрямой иммунофлюоресценции
23. Количественный иммунофлюоресцентный анализ
КИФА .
2 Метод проведения генетической идентификации
возбудителя бруцеллеза с помощью полимеразной цепной реакции ПЦР
2 Методика проведения хемилюминесцентного иммунного анализа ХЛИА.
2 Лиофилизация иммуноглобулинов, антигенов, сывороток и конъюгатов
2 Характеристика лабораторных животных, использованных в опытах.
2 Методы математической и статистической обработки
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА АНТИГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ
СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА
3.1. Разработка эритроцитарного бруцеллезного антигенного диагностикума
3.2. Стабилизация антигенного эритроцитарного бруцеллезного диагностикума.
3.3. Изучение диагностической ценности антигенного эритроцитарного диагностикума
3.4. Разработка бруцеллезного антигенного диагностикума для реакции агглютинации латекса.
ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ АФФИННЫХ СОРБЕНТОВ С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА В ЭКСПРЕССНЫХ МЕТОДАХ ИММУНОАНАЛИЗОВ ИФА и КИФА
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА СОЧЕТАННЫХ МЕТОДОВ ИНДИКА
ЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРУЦЕЛЛЕЗА МАГНОИММУНОСОРБЦИЯ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ И МАГНОИММУНОСОРБЦИЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ АНАЛИЗ.
5.1. Сочетанный метод детекции возбудителей бруцеллеза селективное концентрирование на магноиммуносорбенте ПЦРанализ
5.2. Сочетанный метод детекции возбудителей бруцеллеза селективное концентрирование на магноиммуносорбенте хемилюминесцентный иммунный анализ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Райтом и Семплом i , установлена способность сыворотки больных мальтийской лихорадкой бруцеллезом агглютинировать культуру мальтийского микрококка возбудителя бруцеллеза, что имело огромное значение и легло в основу современной диагностики бруцеллеза. Данная реакция агглютинации, получившая название реакции Райта, до настоящего времени имеет одно из основных значений в диагностике этого заболевания. .i в г. РСК при исследовании сывороток больных бруцеллезом. РСК является основной и в настоящее время для диагностики данной инфекции у сельскохозяйственных животных и в комплексе с реакцией агглютинации Райта позволяет успешно выявлять неблагополучные по бруцеллезу животноводческие хозяйства , v, i . С целью совершенствования РА и РСК были проведены подробные исследования по их применению в диагностике бруцеллеза, изучена чувствительность и специфичность этих реакций, полностью совпадающая в двух методах постановки в пробирках и микрометодом. Отмечено, что благодаря микрометоду упрощается и ускоряется методика проведения реакций, легко обеспечивается воспроизводимость и объективность результатов, происходит экономия основных ингредиентов реакций и имеется еще ряд других преимуществ Студенцова, Саттаров, Ременцева и др. Недостатком метода является и низкая чувствительность в определении антител к возбудителю в ранние сроки заболевания Алимов, Коксин, Ахмадеев и др. В связи со сложностью постановки и кратковременностью использования компонентов РСК в медицинской практике, она не получила широкого применения Таран, Лямкин, . . в г. Методом ускоренной диагностики бруцеллеза у человека является пластинчатая реакция агглютинации, разработанная Хеддельсоном в г. Е. И. Кайтмазовой в г. Данная реакция становится положительной уже на ранних стадиях заболевания. Техника ее постановки проста и доступна для любой лаборатории. Однако имеются данные, что нередко реакция Хеддельсона может давать неспецифические результаты, поэтому были предложены различные варианты е, как в отношении методов постановки, так и приготовления антигенов. Разработана пластинчатая РА с сывороткой крови и кислым забуференным антигеном, окрашенным бенгальским розовым, названная Роз Бенгал пробой РБП, а также модификация ее на фильтровальной бумаге с использованием РозБенгал антигенов, в результате чего специфичность данной реакции значительно повышается Студенцова, Грушина, , ii, i . , , I . , i, i, . Абусуева, Арбулиева, Хаиров, , i, i . Одной из модификаций дайной реакции является реакция нейтрализации антител РНАт, основанная на нейтрализации антител специфическим антигеном, в результате чего специфическая сыворотка не способна агглютинировать эритроциты, сенсибилизированные специфическим антигеном. Для определения неполных блокирующих антител в году предложена реакция Кумбса. Ее основной ценностью является возможность постановки ретроспективного диагноза при отсутствии клиники и при отрицательной РА. Данная реакция довольно специфична и рекомендуется к применению для диагностики бруцеллеза при хронических формах, однако она редко используется в медицинской практике Вершилова, Голубева, Кайтмазова и др. Таран, Лямкин, . Разработка методов обнаружения специфических антигенов возбудителя является одним из направлений для усовершенствования лабораторной диагностики бруцеллеза. К одному из таких методов относится РНГА с антительным бруцеллезным диагностикумом, обладающим высокой специфичностью, быстротой постановки и воспроизводимостью Каральник, Цыбин, Каральник, Шамардин, Царевский, Студенцова, Саттаров, Ременцова и др. На основе РИГА был предложен модифицированный экспресстест для обнаружения противобруцеллезных антител в сыворотке крови и молоке крупного рогатого скота, названный экспрессРНГА ЭРНГА. Установлена его высокая чувствительность и специфичность в сравнении с реакцией Кумбса и РСК Тихомирова, Урбан, Сочнев, Луканина, Лямкин, . Проводились изыскания способов диагностики бруцеллеза, обусловленного измененными вариантами возбудителя.