Создание биопрепарата на основе выделенных и изученных бактериофагов Enterococcus faecalis

• Автор: Ковалева, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 154 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ стр.

ВВЕДЕНИЕ стр.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1. Характеристика бактерий рода ЕМегососсия стр.

1. 2. Этиологическое значение эн терококков в патологии человека и

животныхстр.

1.3. Факторы вирулентности энтерококков.стр.

1. 4. Лабораторная идентификация энтерококков.сгр.

1. 5. Бактериофаги вирусы бактерий.стр.

1. 6. Применение бактериофагов в диагностической практике стр.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2. 1. 1. Материалы стр.
2. 1.2. Методы стр.
2. 2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2. 1. Выделение и идентификация бактерий рода ЕпГегососсиБстр.
2. 2. 2. Выделение бактериофагов ЕШегососст стр.
2. 2. 3. Характеристика биологических свойств выделенных
бактериофагов.стр.
2. 2. 4. Разработка технологических параметров изготовления и контроля
индикаторных энтерококковых бактериофагов сгр.
2. 2. 5. Разработка параметров ускоренной идентификации бактерий вида
Е.аесаНя с помощью бактериофагов.стр.
2. 2. 6. Разработка оптимальных условий постановки РНФ стр.
2. 2. 7. Использование РНФ для индикации бактерий вида Е.аесаНБ в объектах внешней среды
2. 2. 7. 1. Исследование с помощью РНФ воды, контаминированной бактериями вида Е.аесаНэ.стр.
2. 2. 7. 2. Исследование с помощью РНФ комбикорма, контаминированного
бактериями вида Е.аесаШ.стр.
2. 2. 7. 3. Исследование с помощью РНФ мяса, контаминированного
бактериями вида Е.аесаШ.стр.
2. 2. 7. 4. Исследование с помощью РНФ патологического материала,
контаминированного бактериями вида Е.аесаШ стр.
2. 2. 7. 5. Исследование маститного молока с помощью РНФ на наличие
бактерий вида Е.аееаШ.стр.
2. 2. 8. Изучение эффективности сконструированного биопрепарата
энтерококковых бактериофагов.стр.
ЗАКЛЮЧЕНИЕстр.
ВЫВОДЫстр.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ стр.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ
ИСТОЧНИКОВстр.
ПРИЛОЖЕНИЯстр.
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ТТХ 2,3,5трифенилтетразолий хлорид
пирролидонилариламилаза
лейцинаминопептидаза
МИС молочноингибиторная среда
КАЭ канамицин азидноэскулиновый агар
ЖЩА желчнощелочной агар
МПБ мясопептонный бульон
МПА мясопептонный агар
РНФ реакция нарастания титра фага
м.к.мл количество микробных клеток в 1 мл
м.к.г количество микробных клеток в 1 г
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Работа изложена на 4 страницах текста, иллюстрирована таблицами, рисунками и дополнена приложениями. Микроорганизмы, включенные в род , ранее относили к роду . Название рода , предложенное ii и в , было пересмотрено i и i в с пересмотром бактерий . .i. Позже другие стрептококки, охарактеризованные как энтерококки, перенесли в род . Причиной выделения энтерококков в отдельный род послужило открытие уникального группового антигена глицеринтейховой кислоты, содержащей аланин и глюкозу. Наиболее объективную информацию о систематическом положении микроорганизмов дала геносистемагика, позволяющая их объединить или, наоборот, подразделить в отдельные группы не по внешним признакам, а по родству. Было дано описание новых видов рода . ., . .v, vi, . ., . .ii, основанное на сравнительном РНК секвенировании и ДНКДНК гибридизации 0, . В настоящее время род включает более видов табл. Энтерококки представляют собой клетки сферической или овальной формы, размером 0,6 2,0 х 0,6 2,5 мкм. Это грамположительные бактерии, эндоспор не образуют, иногда подвижные за счет немногих жгутиков, четкие капсулы отсутствуют. В жидкой питательной среде энтерококки располагаются попарно или формируют короткие цепочки . Энтерококки факультативные анаэробы каталазоотризательные являясь мезофиллами, обитают в условиях средних температур от до С, с оптимумом роста при С , 6. Отличительная черта энтерококков способность роста на средах с содержанием ЫаС1 6,5 , желчи , 9,6. . ii Vx . . . . vi i . . iv i . . ii . vi . . vi . . i i . . i . . I i i . . xi v . . i . . vii v . . ii i . . vi i . . i i . . i i, i . . . vi V . Потребности в питательных веществах сложные, поэтому в качестве основных компонентов питательных сред используют глюкозу, лактозу, пептон, триптон, казеиновый гидролизат, дрожжевой экстракт лактозопеитонная среда, сахародрожжевой питательный агар. Селективными для энтерококков считаются среды, имеющие в своем составе от 6,5 до хлорида натрия солевой бульон или агар, желчи желчный бульон или агар, желчная среда Турчинского, 0, теллурита калия молочноингибиторная среда, азид натрия азидноглюкозный бульон, среда СланетцаБартли, высокое содержание щелочи 9,6 щелочнополимиксиновая среда, антибиотик иолимиксин щелочнополимиксиновая среда. Возможно также комплексное использование компонентов 9. Турчинского колонии энтерококков плоские крупные с ровными краями, белые или бледно окрашенные с небольшим кремовым или розовым оттенком, а также малиновые Е. Е.аесаШ или сероватые, мелкие, плоские Е. Индикаторными являются среды с 2,3,5трифенилтстразолий хлоридом ТТХ, основанные на дегидрогеназной активности энтерококков бесцветный водный раствор ТТХ под воздействием вырабатываемых энтерококками дегидрогеназ переходит в трифенилформазан, который окрашивает среду в красный цвет. Для предварительной идентификации стрептококков и стрептококкоподобных бактерий, в том числе и энтерококков применяют биохимические, серологические тесты, а также культуральные особенности. Все виды рода вырабатывают пирролидонилариламилазу , лейцинаминопептидпзу , гидролизуют эскулин, сбраживают глюкозу, но не образуют газ при ее ферментации табл. Примечание положительный, отрицательный, вариабельный результаты. Дополнительным тестом при этом выступает чувствительность изучаемых бактерий к ванкомицину. Однако при изучении данного показателя возможны ошибки, т. Основной задачей, как правило, является дифференциация энтерококков от стрептококков, а не от других родов.