Исследование регуляторных белков, действующих в сверхмалых дозах, выделенных из сыворотки крови млекопитающих

• Автор: Вечеркин, Владислав Владиславович
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 153 с. : ил.

1.1. Состав, функция и физикохимические свойства крови млекопитающих

Общие положения

Морфология и функция форменных элементов крови

Основные функции крови

1.2. Белки сыворотки крови

1.3. Биологически активный в сверхмалых дозах регуляторный белок, выделенный из сыворотки крови млекопитающих

1.4. Цитокины

1.5. Цитомедины

1.6. Белки Б0

ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Использованные материалы

2.2. Методы, примененные при выполнении работы
Получение фракций РБ из сыворотки крови млекопитающих
Обработка слабокислого регуляторного белка серным эфиром
Определение концентрации регуляторных белков
Массспектрометрия
Высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ
Электрофорез в полиакриламидном геле
Исследование регуляторных белков с помощью ядерного магнитного резонанса ЯМР
Спектры кругового дихроизма
Дифференциальная сканирующая калориметрия
Биотестирование фракций белков, полученных в процессе очистки, для определения присутствия регуляторных белков
Определение состояния регуляторных белков в растворах методом АСМ атомносиловой микроскопии
Получение поликлональной антисыворотки
Роллерное органное культивирование кожи тритонов
Изучение влияния сывороточного регуляторного белка на
ранозаживление в коже у млекопитающих i viv
Изучение белкаинактиватора
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выделение и очистка регуляторных белков, выделенных из
сыворотки крови КРС
3.2. Биотестирование фракций регуляторных белков в процессе очистки
Исследование мембранотропной активности РБ, выделенных га
сыворотки крови млекопитающих
3.3. Исследование физикохимических свойств регуляторных белков,
выделенных из сыворотки крови млекопитающих
Оценка значения кажущейся молекулярной массы регуляторных
Изучение вторичной структуры РБ с помощью метода кругового
дихроизма
Изучение растворов РБ с помощью метода атомносиловой
микроскопии
Исследование РБ, выделенных га сыворотки крови млекопитающих, с юз помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии Исследование состава фракций регуляторных белков с помощью
ядерного магнитного резонанса
Изучение липидной компоненты фракции СРБ
Исследование КРБ с помощью метода массспектрометрии
3.4. Изучение локализации в тканях позвоночных животных, а также
специфической биологической активности регуляторных белков
сыворотки крови
Исследование локалгаации СРБ в печени тритона
Исследование влияния РБ на состояние ткани кожи тритона
при органном культивировании i vi
Исследование влияния слабокислого регуляторного белка на ранозаживление кожи мыши i viv
3.5. Исследование белка, инактивирующего мембранотропное действие 9П
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В кровеносном русле кровь в норме ведт себя как не Ньютоновская жидкость, меняющая свою вязкость в зависимости от условий течения. В связи с этим вязкость крови в крупных сосудах и капиллярах существенно различается, а приводимые в литературе данные по вязкости носят условный характер. Закономерности течения крови реология крови изучены недостаточно. Неньютоновскос поведение крови объясняется большой объмной концентрацией клеток крови, их асимметрией, присутствием в плазме белков и другими факторами . Измеряемая на капиллярных вискозиметрах с диаметром капилляра несколько десятых миллиметра вязкость крови в раз выше вязкости воды. При патологии и травмах текучесть крови существенно изменяется вследствие действия определнных факторов свртывающей системы крови. В основном работа этой системы заключается в ферментативном синтезе линейного полимера фибрина, образующего сетчатую структуру и придающего крови свойства студня. Этот студень имеет вязкость, в сотни и тысячи превышающую вязкость крови в жидком состоянии, проявляет прочностные свойства и высокую адгезивную способность, что позволяет сгустку удерживаться на ране и защищать е от механических повреждений. Образование сгустков на стенках кровеносных сосудов при нарушении равновесия в свертывающей системе является одной из причин тромбозов. Образованию сгустка фибрина препятствует противосвргывающая система крови разрушение образовавшихся сгустков происходит под действием фибринолитической системы. Образовавшийся сгусток фибрина вначале имеет рыхлую структуру, затем становится более плотным, происходит ретракция сгустка . К форменным элементам крови относятся эритроциты, лейкоциты, представленные гранулоцитами полиморфноядерные иейтрофильные, эозинофильные и базофильные гранулоциты и агранулоцитами лимфоциты и моноциты, а также тромбоциты кровяные пластинки. В крови также определяется незначительное число плазматических и так называемых ДНКсинтезирующих клеток . Эритроциты называют красными кровяными клетками, потому что они содержат протеин гемоглобин, имеющий яркокрасный цвет. Гемоглобин содержит в свом составе железо, средством которого осуществляется транспорт кислорода и диоксида углерода. Когда кровь проходит через легкие, молекулы кислорода присоединяются к гемоглобину. По мере того, как кровь движется дальше по телу, гемоглобин отдат кислород клеткам. Далее освобожденные молекулы гемоглобина связывают диоксид углерода или другие продукты распада, удаляя их из тела. Костный мозг постоянно производит клетки крови, восполняя их естественную потерю. Эритроциты представляют собой в норме безъядерную двояковогнутую клетку диаметром мкм . В последние года появляется вс больше работ, описывающих поток крови как упорядоченное движение структурированных компартментов, обусловливающих строго определнную селекцию крови по органам. Согласно гистологическим исследованием кровяного тока было установлено, что кровь движется спиральными вихревыми потоками, в которых эритроциты упакованы в определнные конгломераты, образуя веретенообразную архитектонику потока . Тромбоциты кровяные пластинки представляют собой полиморфные безъядерные образования, окружнные мембраной. В кровяном русле тромбоциты имеют округлую и опальную форму диаметром мкм. В норме различают 4 основных вида тромбоцитов 1 нормальные зрелые тромбоциты круглой или овальной формы. Лейкоциты. Гранулоциты нейтрофильные ацидофильные эозинофильные, базофильные полиморфноядерные лейкоциты крупные клетки от 9 до мкм, циркулируют в периферической крови несколько часов, а затем перемещаются в ткани. Основной функцией нейтрофильных гранулоцитов является защитная реакция по отношению к микробам микрофаги. Они активные фагоциты. Наиболее большой процент фагоцитирующих нейтрофилов отмечается у лиц молодого возраста. С увеличением возраста установлено статически достоверное снижение фагоцитарной активности гранулоцитов . Лимфоциты осуществляют формирование специфического иммунитета, синтез защитных антител, лизис чужеродных клеток, реакцию отторжения трансплантата, обеспечивают иммунную память.