Активные в сверхмалых дозах биорегуляторы тканей глаза млекопитающих

• Автор: Скрипникова, Виктория Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.23, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 164 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Новая группа биорегуляторов, проявяяющихактивность в сверхмалых дозах общие оложеиия.

1.2. Активные в сверхмалых дозах биорегуляторы,

выделенные из различных тканей млекопитающих

1.3. Активные в сверхмалых дозах биорегуляторы, выделенные из тканей

глаза млекопитающих.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Получение тканевых экстрактов тканей глаза.

2.2. Высаливание сернокислым аммонием экстрактов тканей глаза.
2.3. Определение концентрации белков
2.4. Изоэлектрофокусирование фракции супернатанта склеры
2.5. Электрофорез белковых фракций в полиакриламидном геле
2.6. Обращенофазовая высокоэффективная жидкостная хроматография
2.7. Определение аминокислотного состава фракции кислых белков склеры.
2.8. Исследование биорегуляторов с помощью метода кругового дихроизма.
2.9. Определение размеров частиц методом динамического лазерного светорассеяния.
2 Определение размеров частиц методом атомносиловой микроскопии
2 Исследование биорегулятора склеры методом ядерного магнитного резонанса
2 Исследование биорегулятора пигментного эпителия
методом аффинной хроматографии
2 Определение мембранотропной активности при кратковременном
органном культивировании печени мыши i vi.
2 Исследование специфической активности
биорегуляторов тканей глаза на моделях органного культивирования
21. Культивирование целого глаза
22. Культивирование заднего отдела глаза
23. Культивирование отдельно изолированной склеральной оболочки.
24. Приготовление гистологических срезов
25. Морфометрическая оценка гистологических срезов
2 Иммуноблоттинг растворов белков и пептидов
2 Исследование биорегулятора пигментного эпителия
методом массспектрометрии
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Изучение биорегулятора, выделенного из ткани склеры глаза быка.
3.2. Изучение биорегуляторов, выделенных из тканей заднего отдела глаза быка
3.3. Изучение структурнофункциональных особенностей биорегулятора, выделенного из ткани пигментного эпителия глаза быка.
3.4. Общее заключение. Практическое применение биорегуляторов,
выделенных из тканей глаза быка. .
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Кроме того, в тканевом экстракте печени обнаружена фракция нейтральных белков i 6,77,2 , . Молекулярная масса исследуемого белка составляла кДа . Он был менее устойчив к воздействию таких физикохимических факторов как нагревание, процедура замораживаниеоттаивание, дефицит ионов Са2 . В СМД этот белок ткансспецифично оказывал влияние на клеточную адгезию и пролиферацию i vi , . Скорее всего, данный белок не относится к РЬ данной группы, и является другим компонентом межклеточного пространства. Не исключено, что исследуемый в этих работах белок является комплексом РБ сыворотки с церулоплазмином, который как и многие другие белки сыворотки крови, синтезируется клетками печени , его изоэлектрическая точка лежит в области 6,87,2. Церулоплазмин играет в организме важную роль в метаболизме железа и меди, проявляет антиоксидантныс свойства . Авторы исследований РБ, выделенных из секретов, например из молока, также объясняют присутствие фракции слабокислых белков образованием комплекса РБ с сывороточными альбуминами 9,. Полученные после ИЭФ или ионообменной хроматографии фракции белков исследовали на предмет их гомогенности с помощью таких современных биохимических методов как, электрофорез в полиакриламидном геле ПЛАТ и обращеннофазовая высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ, также эти стадии являлись дополнительной очисткой биорегуляторов данной группы. Методом электрофореза в ПААТ в присутствии додсцилсульфата натрия ДДСН для РБ данной группы показана их исключительно высокая электрофоретическая подвижность. Значение кажущейся молекулярной массы этих белков составляет менее кДа 3, 68, , , , , , . Однако методом диализа через полупроницаемые пленки было установлено, что РБ не проникают через поры, пропускающие соединения с молекулярной массой 8 кДа 2. Основываясь на результатах проведенных исследований, авторы считают, что значения молекулярных масс РБ лежат в интервале от 8 до кДа. Однако, значение кажущейся молекулярной массы РБ, полученного после ИЭФ супернатанта хрусталика составляет менее 3 кДа , а РБ, полученного после обращенофазоьой ВЭЖХ фракции кислых белков сетчатки 68 кДа 5. Для получения препаратов биологически активных РБ электрофорез фракций проводили без добавления ДЦСН. В этих условиях картина разделения фракций РБ не изменялась биологически активной была низкомолскулярная фракция. Полученные в этих работах данные указывают на аномальное поведение исследуемых РБ в условиях электрофореза в ПААГ. Авторы исследований предполагают, что изучаемые РБ являются низкомолекулярными белками, и что фракции РБ, полученные после ИЭФ или ионообменной хроматографии, имеют высокую степень очистки. Выяснение точного значения молекулярной массы возможно только после определения первичной структуры РБ. Метод обращенофазовой ВЭЖХ в градиенте водаацетонитрил является более результативным способом разделения РБ данной группы 3, 68, , , , , , . Общая картина разделения РБ данной группы предполагает наличие двух наиболее количественно представленных фракций гидрофильной и гидрофобной, которая элюируется при высоком содержании ацетонитрила, . Что представляют собой эти две фракции Очевидно, гидрофильная фракция представляет собой низкомолекулярный РБ. СМД. По крайней мере, электрофорезом в ПААГ было определено значение кажущейся молекулярной массы РБ сетчатки глаза после обращеннофазовой ВЭЖХ, которое соответствовало приблизительно 8 кДа 5, . Состав гидрофобной фракции не изучен, она, вероятно, может содержать вещества, входящие в состав биорегуляторов, например, белкимодуляторы, липиды, углеводы. Гидрофобная фракция проявляет мембранотропную активность в отдельных случаях. Это можно объяснить следующим образом. Не исключено, что при отделении фракции липидов происходит частичный захват молекул РБ, в результате которого данная гидрофобная фракция проявляет биологическую активность в СМД. Кроме того, другим объяснением проявляемой в СМД биологической активности гидрофобной фракцией, является мембранотропнос действие входящих в сс состав липидов.