Разработка способа разделения хитозана на низкомолекулярные фракции и изучение их биологических свойств

• Автор: Кузнецов, Петр Александрович
• Шифр специальности: 03.00.23, 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Щёлково
• Количество страниц: 129 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Физикохимические свойства хитозана

1.2.Производные хитозана

1.3.Способы получения олигосахаридов хитина и хитозана

1.3.1. Ферментативное расщепление

1.3.2. Физическая деструкция

1.3.3. Химическая деструкция

1.4.Фракционирование хитозана

1.5.Хроматографическое фракционирование
1.6.Ультрафильтрация
1.7.Дробное осаждение и экстракция
1.8.Применение низкомолекулярного хитозана
в медицине и ветеринарии
1.9.Использование низкомолекулярного хитозана
в других областях народного хозяйства
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1.Объекты исследований, исходные материалы и
химические реагенты
2.2.Методы исследования
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 .Фракционирование хитозана .
3.2. Определение острой токсичности фракций хитозана
3.3. Изучение влияния низкодисперсного хитозана на иммунный статус
и динамику привесов молодняка КРС при энтеральном введении
3.4. Изучение адъювантных свойств хитозана
3.5. Исследование влияния низкомолекулярного хитозана на показатели иммунобиологической резистентности молодняка КРС при подкожном
введении
3.5.1 Изучение влияния сочетанного применения хитозана и противоиастереллезной вакцины на показатели неспецифической
резист ентности молодняка КРС
3.5.2. Изучение влияния хитозана на специфический иммунный
ответ молодняка КРС вакцинированного против пастереллеза
4. ВЫВОДЫ
5. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
6. ПРИЛОЖЕНИЯ
з
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. БСА бычий сывороточный альбумин
2. ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
3. ВНИТИБП Всероссийский научноисследовательский и технологический институт биологической промышленности
4. ГПХ гельпроникающая хроматография
5. ГОА гидроокись алюминия, 6
6. ЗФР забуференный физиологический раствор
7. ЗФРТ ЗФР с 1 твином
8. ИП индекс полидиснерсности, ММп
9. ИФА иммуноферментный анализ
. АГИФА антиген для ИФА .КРС крупный рогатый скот
.ММ молекулярная масса
.ММР молекулярно массовое распределение
.ПЭК полиэлектролитные комплексы
.МП молекулярная масса пика
.РИД метод радиальной иммунодиффузии
. С ДА степень деацетилирования
.СЦК средний цитохимический коэффициент
.ФП фагоцитарный показатель
.ФИ фагоцитарный индекс
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Показано, что применение хитозана с низким значением индекса полидисперсноти позволяет усилить его биологические свойства, что дает возможность получать больший экономический эффект от применения этого препарата. Показана возможность и перспективность использования хитозана в качестве адъюванта при вакцинации. Выявлен стимулирующий эффект фракционированного хитозана на клеточный и гуморальный иммунитет при подкожном . КРС, что дает возможность использовать этот препарат в качестве иммуномодулятора. Апробация результатов. Ветеринарная медицина современное состояние и проблемы обеспечения благополучия животноводства г. Ветеринарная биотехнология отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии Щелково, . Публикации. По теме диссертации и материалам проведенных исследований опубликовано статей в сборниках международных научнопрактических конференций и симпозиумов, отечественных специализированных журналах, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, методической части, раздела с обсуждением экспериментальных результатов, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 9 страницах машинописного текста, содержит таблиц и рисунков. Список использованной литературы включает 2 источника, из которых 0 отечественных. Основные положения, выносимые на защиту. Способ фракционирования хитозана с использованием ультрафильтрационных мембран. Выявленная взаимосвязь параметров острой токсичности фракций хитозана с их молекулярными массами. Усиление биологических свойств хитозана, получаемое при снижении его полидисперсности. Обоснование адъювантных свойств фракции хитозана. Обоснование иммуномодулирующей активности фракции хитозана. Благодарности. Автор выражает благодарность за помощь при выполнении данной работы членукорреспонденту РАСХН, заслуженному деятелю науки РФ Федорову Ю. Н., профессору Крапивиной Е. В., к. Лопатину С. А., к. Фроловой М. А., к. Шинкареву С. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ХИТОЗАНА. Хитозан является линейным полисахаридом, который содержит р1 4связанную 2амино2дезокси0глюкопиранозу сИ и 2ацетил амидо2дезоксиОпиокопиранозу С1сЫАс 3. Хитин содержит те же самые моносахариды в1сИ и С1сЫАс, но, в отличие от хитозана, превалирующим моносахаридом является вкИАс. Для того чтобы охарактеризовать хитозан, необходимо знать молекулярную массу ММ, распределение по молекулярным массам фракций в составе хитозана молекулярномассовое распределение ММР, а также его степень деацетилирования СДА и содержание примесей . Обычно не удается достичь полного деацетилирования хитина и, таким образом, соотношение звеньев варьирует в широких пределах в зависимости от глубины процесса деацетилирования 3. Таким образом, термин хитозан относится не к уникальной химической структуре, а к сообществу сополимеров, с различным соотношением звеньев С1сМЛс1ЧАс, которые являются растворимыми в разбавленных кислых растворах. Большинство коммерческих препаратов хитозана в основном содержат ФсИ и 5 С1сЫАс 3 и представляет собой чешуйки или порошок от белого до светлокремового цвета. Важнейшей характеристикой хитозана является его молекулярная масса. Однако образцы этого биополимера всегда состоят из молекул разной длины, а, следовательно, и разной молекулярной массы. Поэтому хитозан можно охарактеризовать несколькими видами средних молекулярных масс среднечисловой, средневесовой и средневязкостной . М характеристическая вязкость, а ка константы. Постоянная К 2 чКГ5 зависит от температуры и природы полимера и растворителя. Показатель а связан с конформацией макромолекулы в растворе и зависит от всех факторов, влияющих на конформацию цепи. В общем случае постоянная а изменяется в пределах 0 а 2. Отношение может служить мерой полидиснерсности образца. Многие свойства полимеров физические, механические, проявление биологической активности зависят от распределения их молекул по молекулярным массам. Для более полной характеристики полимолекулярности полимера используются функции молекулярномассового распределения ММР.