Аллергены для диагностики туберкулеза: совершенствование производства и стандартизация

• Автор: Козлов, Владимир Егорович
• Шифр специальности: 03.00.23, 16.00.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 287 с. : ил.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Аллергены для диагностики туберкулеза животных история открытия и изготовления

1.1.1 Иммунные механизмы туберкулиновой реакции

1.1.2 Туберкулиновые препараты и их изготовление

1.2 Туберкулиновые фракции и методы их получения

1.2.1 Антигены туберкулина

1.2.2 Применение мембранных методов при промышленной очистке и фракционировании белков

1.3 Стандартизация аллергенов для диагностики туберкулеза

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Материалы, экспериментальные модели и условия экспериментов

2.2. Методы исследований

2.3. Статистическая обработка результатов исследования
3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Разработка технологии получения туберкулина с применением методов мембранного фракционирования биомолекул
3.1.1 Разработка промышленной установки для концентрирования и диафилыпрации белков туберкулина
3.1.2 Мембранное фракционирование белков туберкулина
3.1.3 Оценка биохимических и иммунобиологических свойств фракций туберкулина, полученных в процессе промышленного мембранного фракционирования
3.1.4 Совершенствование технологии изготовления туберкулина ППД для млекопитающих
3.2 Стандартизация туберкулинов
3.2.1 Стандартизация туберкулина ППД для млекопитающих
3.2.1.1 Отработка условий опытов по стандартизации на морских свинках
3.2.1.2 Отработка условий опытов по стандартизации на крупном рогатом скоте
3.2.1.3 Выбор эталонной серии туберкулина ППД для млекопитающих
3.2.1.4 Определение активности эталонной серии туберкулина
ППД для млекопитающих относительно Первого
международного стандарта туберкулина vi
3.2.2 Стандартизация туберкулина ППД для птиц
3.2.3 Стандартизация микобактериальных аллергенов, применяемых при дифференциальной аллергической 8 диагностике туберкулеза
3.2.3.1 Разработка принципов стандартизации аллергенов для дифференциальной аллергической диагностики туберкулеза на 8 примере
3.2.3.2 Применение принципов стандартизации микобактериальных антигенов для оценки оптимальных доз туберкулина ППД для птиц и туберкулина ППД для млекопитающих при постановке симультанной пробы
3.3. Гармонизация нормативных требований к туберкулиновым препаратам с международными нормативными документами
3.4 Практическое применение и сравнительная оценка стандартизированных аллергенов
3.4.1 Исследование коммерческих серий зарубежных и отечественных туберкулинов ППД
3.4.2 Оценка эффективности применения разных доз туберкулина ППД для млекопитающих
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Курской биофабрике было выпущено более 0 тысяч доз опытного сухого очищенного туберкулина УИЭВ. В г. В дальнейшем специалистами биопредприятия были проведены дополнительные исследования но совершенствованию и повышению эффективности процессов производства препарата , , 9, 9. Выпускаемый ППДтуберкулин для млекопитающих, полученный выращиванием культуры микобактерий на питательной среде, модифицированной специалистами Курской биофабрики, осаждением белка ТХУ с последующим переосаждением сульфатом аммония, содержал в своем составе ,4 белка, состоящего из аминокислот, 2,1 полисахаридов, ,0 липидов и 1,3 нуклеиновых кислот 8. Технология изготовления туберкулина ППД для птиц была внедрена в производство на Курской биофабрике в году. В основе технологии использовался предложенный УИЭВ метод очистки белков из термоинактивированной автоклавированием культуральной жидкости М. Оценка реактогенности туберкулина ППД для птиц, проведенная на здоровых курах и морских свинках в сравнении с международным стандартным образцом, также была признана достаточно высокой ,. Тенденция использования очищенных туберкулиновых препаратов поставила вопрос о совершенствовании способов изготовления ППДтуберкулина для млекопитающих и для птиц. Для обеспечения изготовления активных и специфичных аллергодиагностикумов были подобраны наиболее продуктивные штаммы, разработаны методика их адаптации к синтетической питательной среде и техника производственного посева, а также оптимальные параметры для лиофилизации препаратов , , , , , , 6. Научные и технологические исследования данного периода завершились разработкой ГОСТов на ППД туберкулины , . В мировой практике, как ветеринарной, так и медицинской, термин туберкулин в основном используется для обозначения препаратов, изготовленных из трех видов микобактерий человеческого, бычьего и птичьего. Препараты, изготовленные из других видов нетуберкулезных микобактерий, которые способны вызывать сенсибилизацию организма людей и животных к вышеописанным туберкулинам, предлагается выделить в отдельную группу. Они получали различные названия, например, элиситин 2, канзасиин, скрофуляцеин 2, ионин 5, лепронин . К такого рода препаратам относится и комплексный аллерген из атипичных микобактерий , впервые в мире разработанный в нашей стране А. Н. Шаровым 4, 5. Препарат представляет собой смесь белковых фракций, выделенных из культуральных фильтратов М. М. штамм , выращенных на синтетической питательной среде. Во второй половине прошлого века с улучшением эпизоотической ситуации по туберкулезу ученые стали регистрировать проявление реакции на туберкулин для млекопитающих в благополучных хозяйствах у животных, при дальнейшем исследовании которых патологоанатомическое вскрытие, биопроба на лабораторных животных туберкулез не подтверждался. Подобные реакции получили название неспецифических и в дальнейшем были подразделены на парааллергические и псевдоачлергические 6. Схожесть строения антигенов разных видов микобактерий обусловливает появление неспецифических реакций при исследовании животных на туберкулез 2. Условно принято, что основной причиной проявления парааллергических реакций является не инфицирование животных М. М. i, а сенсибилизация их другими представителями рода i , , 1, 6, 3, 4, 5, 7, 8, 0, 8, 6, в частности, М. М. i, а также многочисленными атипичными микобактериями, широко распространенными в регионах, особенно богатых торфяниками , ,4. Установлено, что существуют общие и специфические белковые антигены среди некоторых видов патогенных и атипичных микобактерий, которые могут сохраняться в препаратах типа туберкулина , , 6, 3, 9,1. К псевдоаллергическим реакциям относят реакции на туберкулин, вызываемые факторами немикобактериального происхождения. Одни исследователи объясняют их развитие наличием в организме животных различных паразитов, возникновением гнойнонекротических процессов или другими причинами , , 8, 5, другие авторы такую возможность отрицают 5, 4, 9. Установлено, что псевдоаллергические реакции могут быть обусловлены представителями родов i, i и 1, 2,3,5, 3.